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    玉郎傘提取物平喘鎮(zhèn)咳作用的研究

    2014-10-16 03:16:40張士軍陳兆霓黃仁彬
    實(shí)用藥物與臨床 2014年6期
    關(guān)鍵詞:水提物豚鼠皂苷

    曾 嶸,焦 楊,張士軍,陳兆霓,黃仁彬*

    0 引言

    玉郎傘是一種尚未開發(fā)利用的民間草藥,為蝶形花科植物疏葉崖豆Millettia pulchra Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的塊根,用于治療高血壓、跌打損傷、消化不良、病后虛弱等。研究表明,本品具有擴(kuò)張血管、降低血壓、增加冠脈流量、抑制心肌收縮力、抑制腸道平滑肌活動、保肝及抗自由基作用[1-3]。本課題組在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),玉郎傘水提物有較好的平喘作用。本實(shí)驗(yàn)從玉郎傘中分離提取3種有效成份:黃酮、皂苷、多糖,以進(jìn)一步探討玉郎傘的平喘作用,并確定其平喘的活性成份。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑 402AL型超聲霧化器(江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)、磷酸組織胺(上海生化研究所)、氯化乙酰膽堿 (sigma公司)、地塞米松磷酸鈉注射液(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司)、濃氨水(白銀化學(xué)試劑廠),復(fù)方甘草片(青海制藥有限公司)、玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖均由本實(shí)驗(yàn)室自制。

    1.2 動物 豚鼠150~200 g,小鼠20~25 g,雌雄兼用,由本校動物實(shí)驗(yàn)中心提供。試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證:SCXK桂2003-0003,試驗(yàn)動物使用許可證:SYXK桂2003-0005。

    1.3 方法

    1.3.1 豚鼠整體引喘實(shí)驗(yàn) 按噴霧致喘法[4]選用豚鼠,置入20 cm×20 cm×150 cm的有機(jī)玻璃箱內(nèi),超聲霧化噴入2%乙酰膽堿和0.2%磷酸組胺混合液15 s,進(jìn)行篩選,引喘潛伏期超過120 s者不予選用。次日,豚鼠隨機(jī)分成10組,每組10只,分別為空白組(生理鹽水,10 mL/kg);陽性組(地塞米松,5 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(以上4種藥物大劑量均為30 g生藥/kg,小劑量均為15 g生藥/kg),灌胃給藥1次。用藥后1 h超聲霧化噴入2%乙酰膽堿和0.2%磷酸組胺混合液15 s測定引喘潛伏期(即從噴霧開始到哮喘發(fā)作,呼吸困難,直至抽搐倒地的時間)。

    1.3.2 對濃氨水致小鼠咳嗽反應(yīng)的影響[5]取小鼠100只,隨機(jī)分為空白組(生理鹽水,10 mL/kg);陽性組(復(fù)方甘草片組,136 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(分設(shè)大劑量、小劑量組,劑量同上)。灌胃給藥,每日1次,連續(xù)2 d,末次給藥1 h后,將小鼠分別置于自制噴霧箱內(nèi),開動霧化器以18.7 kPa恒壓使氨水呈霧狀噴入箱內(nèi)30 s,取出小鼠,置于清潔大燒杯內(nèi),觀察記錄咳嗽潛伏期(以小鼠腹肌收縮并張口吐舌作為咳嗽指標(biāo))和3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

    1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計量資料用±s表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示,除多糖低劑量組外,其余各組與空白組比較,豚鼠引喘潛伏期均有明顯延長。說明玉郎傘水提物及從玉郎傘中提取的3種成份-黃酮、皂苷、多糖均能明顯延長豚鼠的引喘潛伏期,并呈劑量依賴關(guān)系。其中YLS黃酮高劑量組的引喘潛伏期最長,平喘效果最好,作用強(qiáng)于地塞米松(5 mg/kg)組。

    表1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響( ±s,n=10)

    表1 玉郎傘水提物及各成份對豚鼠引喘潛伏期的影響( ±s,n=10)

    注:其中黃酮、皂苷、多糖高劑量相當(dāng)于30 g生藥/kg,低劑量相當(dāng)于15 g生藥/kg(下同)。與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01

    組別 劑量 引喘潛伏期(s)空白組10 mL/kg 73.3±22.1地塞米松組 5 mg/kg 150.1±26.1**水提物高劑量組 30 g生藥/kg 128.7±27.8**水提物低劑量組 15 g生藥/kg 115.8±28.4*黃酮高劑量組 0.14 g/kg 153.3±17.2**黃酮低劑量組 0.07 g/kg 122.2±21.7*皂苷高劑量組 2.7 g/kg 114.2±35.3*皂苷低劑量組 1.35 g/kg 108.1±33.9*多糖高劑量組 25 g/kg 99.3±33.0*多糖低劑量組12.5 g/kg 89.3±25.3

    2.2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示,除多糖低劑量組外,其余各組與空白組比較,小鼠咳嗽潛伏期均有明顯延長且咳嗽次數(shù)減少。說明玉郎傘水提物及從玉郎傘中提取的3種成份-黃酮、皂苷、多糖均能顯著減少氨水致小鼠的咳嗽次數(shù),延長咳嗽潛伏期,呈劑量依賴關(guān)系。其中YLS黃酮高劑量組的咳嗽潛伏期最長,鎮(zhèn)咳效果最好,作用強(qiáng)于復(fù)方甘草片組。

    表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響( ±s,n=10)

    表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠咳嗽潛伏期的影響( ±s,n=10)

    注:與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01

    組別 劑量 咳嗽潛伏期(s)3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(次/3 min)空白組10 mL/kg 47.2±17.1 10.5±3.0復(fù)方甘草片組 136 mg/kg 102.1±35.1** 4.5±2.0**水提物高劑量組 30 g生藥/kg 98.7±27.8** 4.9±2.3**水提物低劑量組 15 g生藥/kg 85.8±28.4* 6.8±2.6*黃酮高劑量組 0.14 g/kg 110.3±37.2** 3.5±1.5**黃酮低劑量組 0.07 g/kg 95.2±31.7* 6.3±2.6*皂苷高劑量組 2.7 g/kg 94.2±35.3* 6.6±2.8*皂苷低劑量組 1.35 g/kg 80.1±33.9* 6.9±2.9*多糖高劑量組 25 g/kg 67.3±33.0* 7.3±2.6*多糖低劑量組12.5 g/kg 55.2±25.3 9.3±3.0

    3 討論

    支氣管哮喘(哮喘)是由多種細(xì)胞包括氣道的炎癥細(xì)胞和結(jié)構(gòu)細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病,這種慢性炎癥導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性[6-8]。通常表現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣道受限、并引起反復(fù)發(fā)作性喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀。支氣管哮喘病情反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致氣道平滑肌收縮、粘液分泌過多、血管滲漏引起黏膜水腫和神經(jīng)活性增加等病理變化,最終引起氣道重塑[9-10]。在上述病情演變過程中,嗜酸性粒細(xì)胞浸潤是其基本特征,EOS的浸潤程度始終與氣道重塑、肺功能的衰退及威脅生命發(fā)作性哮喘的嚴(yán)重程度有關(guān)[11]。目前治療哮喘常用藥物有腎上腺素受體激動藥、茶堿、M膽堿受體阻斷藥、腎上腺皮質(zhì)激素、肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定藥等,在哮喘的藥物治療中,糖皮質(zhì)激素、β2受體激動劑等是主要的治療藥物,但因有劑量相關(guān)的副作用,不宜長期使用[12-14]。中草藥因其多成份、多靶點(diǎn)及重視整體調(diào)理,且副作用相對較小,越來越受到醫(yī)學(xué)專家的重視。

    本課題組在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),玉郎傘水提物有較好的平喘作用。為了進(jìn)一步探討玉郎傘提取物的平喘鎮(zhèn)咳作用,為臨床疾病的治療提供指導(dǎo),筆者采用豚鼠噴霧致喘法、小鼠氨水引咳法,觀察玉郎傘水提物及3種成份對豚鼠引喘潛伏期、小鼠咳嗽潛伏期的影響。在本實(shí)驗(yàn)中,觀察到除了YLS多糖低劑量組外,其余各組藥物均可明顯延長豚鼠的引喘潛伏期、減少氨水致小鼠的咳嗽次數(shù)并延長咳嗽潛伏期,說明YLS水提物以及從YLS中提取的3種活性成份-黃酮、皂苷、多糖有較好的平喘鎮(zhèn)咳作用。本實(shí)驗(yàn)組將在后期進(jìn)一步對YLS水提物、黃酮、皂苷、多糖治療支氣管哮喘的藥效學(xué)及作用機(jī)制做進(jìn)一步研究。

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