間充質(zhì)干細(xì)胞治療慢性皮膚潰瘍研究進(jìn)展

吉海杰，劉 洋，王黎明，王建剛，吳明遠(yuǎn)

慢性皮膚潰瘍又稱難治性皮膚潰瘍，是一種常見難治性疾病，具有病因復(fù)雜、病程長和反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)，可引起皮膚表皮和部分真皮甚至皮下脂肪缺損。流行病學(xué)研究表明，我國住院患者人群中該病發(fā)生率為1.7‰，致病因素包括糖尿病、外傷、壓迫和感染等，其中糖尿病為主要原因[1]。目前，我國糖尿病患者約9 200萬[2]，15% ～25%患者在其疾病過程中將發(fā)生足潰瘍[3]。間充質(zhì)干細(xì)胞是來源于發(fā)育早期中胚層的一種成體干細(xì)胞，具有自我復(fù)制和定向分化潛能特點(diǎn)，由于其可通過旁分泌效應(yīng)和向類皮細(xì)胞分化參與創(chuàng)傷愈合的各個(gè)階段[4]，具有治療皮膚潰瘍的潛在價(jià)值?，F(xiàn)就皮膚創(chuàng)傷愈合機(jī)制及慢性皮膚潰瘍治療現(xiàn)狀、間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其在治療慢性皮膚潰瘍研究方面的最新進(jìn)展綜述如下。

1 皮膚創(chuàng)傷愈合機(jī)制及慢性皮膚潰瘍治療現(xiàn)狀

1.1 皮膚創(chuàng)傷愈合機(jī)制 皮膚創(chuàng)傷愈合是一個(gè)多種細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的復(fù)雜過程，包括炎癥期、增生期和重塑期3個(gè)階段，按照一定空間和時(shí)間順序有條不紊地發(fā)生。創(chuàng)傷發(fā)生后創(chuàng)面血管損傷血液滲漏，血液在凝固止血的同時(shí)釋放多種因子，趨化炎性細(xì)胞向創(chuàng)面遷移引起紅、腫、熱、痛，其周圍組織發(fā)生急性炎癥。增生期成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和新生毛細(xì)血管共同構(gòu)成肉芽組織填充裂隙，肉芽組織內(nèi)膠原纖維逐漸增多，使得其硬度與張力強(qiáng)度隨之增加，逐漸變?yōu)槔w維組織架接于斷裂的組織之間，即瘢痕修復(fù);同時(shí)，上皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞等增生促進(jìn)傷口邊緣上皮新生，直到傷口初步愈合。在重塑期，隨著機(jī)體狀態(tài)的好轉(zhuǎn)和活動恢復(fù)，瘢痕組織內(nèi)的膠原纖維含量和排列受到各種酶、運(yùn)動應(yīng)力的作用發(fā)生變化，恢復(fù)生理功能。一旦受到感染、組織壞死、缺血和炎癥等因素影響，創(chuàng)傷微環(huán)境發(fā)生紊亂，組織修復(fù)的愈合過程發(fā)生障礙，進(jìn)而發(fā)生慢性皮膚潰瘍。

1.2 慢性皮膚潰瘍的治療現(xiàn)狀 目前，尚無慢性皮膚潰瘍治療指南，臨床上多采用清創(chuàng)術(shù)、負(fù)壓療法、抗感染藥物及敷料處理，這些方法都達(dá)不到兼具促進(jìn)創(chuàng)面愈合和保護(hù)創(chuàng)面的作用，治療效果不盡人意。創(chuàng)傷愈合是細(xì)胞因子與效應(yīng)細(xì)胞相互作用的結(jié)果，因此外源性細(xì)胞因子的局部使用可有效促進(jìn)創(chuàng)傷愈合[5]。1997年美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)重組人血小板源生長因子凝膠用于糖尿病晚期肢端潰瘍愈合與修復(fù)。一項(xiàng)采用重組人血小板源生長因子凝膠治療慢性皮膚潰瘍臨床研究結(jié)果表明，治療組50%患者創(chuàng)面完全愈合，中位愈合時(shí)間86 d，而對照組為35%和127 d[6]。目前，國內(nèi)已經(jīng)有數(shù)種細(xì)胞因子藥物用于慢性皮膚潰瘍的治療，包括重組人表皮生長因子、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子、重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子、重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子和重組人酸性成纖維細(xì)胞生長因子。研究發(fā)現(xiàn)，富血小板血漿中含有高濃度的多種生長因子，自體來源的富血小板血漿在臨床上具有良好的應(yīng)用前景[7]。另外，美國食品和藥物管理局按照Ⅲ類醫(yī)療器械先后批準(zhǔn)Apligraf和Dermagraft-TM 2種組織工程皮膚用于慢性皮膚潰瘍的治療[8-9]。

2 間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性

早期發(fā)現(xiàn)骨髓中存在一種能貼附培養(yǎng)皿呈長梭形的成纖維樣細(xì)胞，由于該細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)呈克隆生長，最初定義為成纖維細(xì)胞樣集落，后來證實(shí)骨髓來源基質(zhì)細(xì)胞具有自我更新和分化能力并命名為間充質(zhì)干細(xì)胞。除骨髓外，機(jī)體多種組織均含有間充質(zhì)干細(xì)胞，如脂肪、肌肉、肝臟和臍帶[10]。目前，間充質(zhì)干細(xì)胞尚無公認(rèn)的生物學(xué)標(biāo)志，國際干細(xì)胞治療協(xié)會發(fā)布了鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞的最低標(biāo)準(zhǔn)[11]:貼壁生長;表達(dá) CD73、CD90 和 CD105，不表達(dá) CD34、CD45、CD14、CD19和人類白細(xì)胞抗原-DR;體外可誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。另外，間充質(zhì)干細(xì)胞可分泌可溶性物質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞表面分子等蛋白參與細(xì)胞遷移、維持局部微環(huán)境[12]，其中旁分泌的可溶性蛋白因子具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，在人胚胎干細(xì)胞來源的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液中可檢測到201種因子，包括血管生成因子、造血因子、趨化因子等[13]。

3 間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚潰瘍研究

3.1 間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚潰瘍動物研究 骨髓是構(gòu)建和維持造血、免疫系統(tǒng)的重要器官，其也參與維持皮膚組織的穩(wěn)態(tài)。一項(xiàng)研究證實(shí)，C57BL/6小鼠植入綠色熒光蛋白嵌合體小鼠骨髓后部分皮膚成纖維細(xì)胞可表達(dá)綠色熒光蛋白[14];另一項(xiàng)研究也發(fā)現(xiàn)，C57BL/6小鼠植入氯甲基苯甲酰氨熒光染料標(biāo)志的Flk-1+間充質(zhì)干細(xì)胞(來源白色BALB/C小鼠骨髓)后背部出現(xiàn)白色毛發(fā)[15]。這2項(xiàng)研究結(jié)果表明，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是參與維持皮膚組織穩(wěn)態(tài)的效應(yīng)細(xì)胞。不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞均可促進(jìn)皮膚潰瘍面愈合。脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞皮內(nèi)注射可加速糖尿病大鼠創(chuàng)傷面愈合[16]，接種有脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞的脫細(xì)胞基質(zhì)移植皮膚全層缺損裸鼠后創(chuàng)面愈合明顯加快[17]。人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞皮內(nèi)注射可促進(jìn)表皮細(xì)胞再生，加速糖尿病小鼠創(chuàng)面愈合[18]。胎盤來源間充質(zhì)干細(xì)胞皮內(nèi)注射可促進(jìn)血管發(fā)生利于糖尿病大鼠傷口愈合[19]。骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞皮下注射可促進(jìn)糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合[20]，接種同源異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的膠原可促進(jìn)糖尿病兔耳朵潰瘍血管發(fā)生和創(chuàng)面閉合[21]。人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞局部注射或全身靜脈注射均可促進(jìn)糖尿病裸鼠創(chuàng)面愈合[22]。研究發(fā)現(xiàn)，生物打印羊膜干細(xì)胞可促進(jìn)大面積皮膚缺損創(chuàng)面愈合[23]。大動物研究也表明，皮內(nèi)注射同源異體間充質(zhì)干細(xì)胞有利于比格犬全層皮膚缺損創(chuàng)面閉合，同時(shí)可下調(diào)創(chuàng)面前炎癥因子表達(dá)[24];全皮缺損羊移植同源臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞7 d創(chuàng)面完全上皮化，而空白組12 d上皮化仍程度不完全[25]。

3.2 間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚潰瘍臨床應(yīng)用研究臨床研究表明，骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞可加速傷口愈合，促進(jìn)組織重建[26]。糖尿病足傷口邊緣直接注射間充質(zhì)干細(xì)胞可明顯縮小傷口面積，增加皮膚血管和傷口皮膚厚度[27]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合纖維蛋白膠復(fù)合物局部貼敷傷口3次，非黑色瘤患者的皮膚傷口可在8周內(nèi)愈合;另外，超過1年不愈的慢性下肢傷口在20周內(nèi)完全愈合，傷口恢復(fù)程度與間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量成正比[28]。一項(xiàng)納入20例傷口不愈患者的臨床研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)培養(yǎng)有自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的膠原海綿體處理傷口后90%傷口完全愈合，并且能促進(jìn)組織再生[29]。一項(xiàng)納入24例下肢不愈合患者的隨機(jī)對照臨床研究表明，在肌內(nèi)注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的同時(shí)向傷口局部移植干細(xì)胞，12周后疼痛感明顯減輕，傷口面積減少[30]。糖尿病足患者一側(cè)下肢肌內(nèi)注射自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或骨髓單核細(xì)胞，對側(cè)下肢注射生理鹽水作為對照，結(jié)果表明間充質(zhì)干細(xì)胞和單核細(xì)胞均能顯著改善行走的疼痛，明顯促進(jìn)傷口愈合，同時(shí)間充質(zhì)干細(xì)胞組較單核細(xì)胞組創(chuàng)面愈合率高[31]。

4 間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚潰瘍機(jī)制研究

4.1 間充質(zhì)干細(xì)胞向表皮樣細(xì)胞分化 間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為中胚層細(xì)胞已經(jīng)得到公認(rèn)，其跨譜系分化一直備受爭議。研究已經(jīng)證實(shí)，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為上皮樣細(xì)胞[32];人胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為皮膚組織細(xì)胞[33];脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為角質(zhì)細(xì)胞，并且發(fā)現(xiàn)接種脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的膠原-殼聚糖支架植入大鼠創(chuàng)傷面14 d可形成表皮和真皮[34]。

4.2 免疫調(diào)節(jié) 創(chuàng)面炎性微環(huán)境可激活間充質(zhì)干細(xì)胞環(huán)氧酶-2，促進(jìn)前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)分泌和抑制白介素(interleukin，IL)-2分泌，從而減少T細(xì)胞有絲分裂和增殖[35]。PGE2可刺激T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌IL-10，從而抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞分泌轉(zhuǎn)化生長因子發(fā)揮抗纖維作用[36]，同時(shí)IL-10也可抑制IL-6和IL-8分泌從而減少膠原蛋白沉積[37]。另外，PGE2 是輔助 T 細(xì)胞(helper T cell，Th)亞群Th1向Th2轉(zhuǎn)化的協(xié)同因子，可引起T效應(yīng)細(xì)胞 γ-干擾素(interferon-γ，INF-γ)分泌減少和IL-4分泌增加[38]。巨噬細(xì)胞是創(chuàng)面炎癥階段后期停留時(shí)間最長的一種免疫細(xì)胞，可促進(jìn)創(chuàng)傷愈合由炎癥期向增生期轉(zhuǎn)化，是炎癥期向增生期轉(zhuǎn)化的重要標(biāo)志，而INF-γ與IL-4比例的降低可加速傷口愈合[39]。

4.3 抗炎 間充質(zhì)干細(xì)胞抑制機(jī)體免疫細(xì)胞分泌前炎癥因子腫瘤壞死因子-α和INF-γ，同時(shí)促進(jìn)抗炎因子IL-10和IL-4的分泌[40]。中性粒細(xì)胞的浸潤是創(chuàng)面進(jìn)入慢性炎癥的一種信號，而IL-10可抑制中性粒細(xì)胞向傷口浸潤，并阻止其產(chǎn)生自由基減少氧化應(yīng)激損傷[41]。研究發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細(xì)胞可分泌抗菌肽LL-37具有直接抗菌作用[42]，同時(shí)分泌免疫調(diào)節(jié)因子可促進(jìn)免疫細(xì)胞殺菌和吞噬能力[43]。

4.4 促進(jìn)血管發(fā)生 表皮毛細(xì)血管循環(huán)為皮膚細(xì)胞提供血供，創(chuàng)面血管發(fā)生障礙可誘發(fā)慢性潰瘍，所以血管發(fā)生是傷口愈合的必要環(huán)節(jié)。間充質(zhì)干細(xì)胞可分泌堿性成纖維細(xì)胞生長因子和血管內(nèi)皮生長因子-A，促進(jìn)微細(xì)血管內(nèi)皮的增生、遷移和分化，具有維持血管穩(wěn)定和血管保護(hù)作用[44]。研究發(fā)現(xiàn)，來源于血管周圍的間充質(zhì)干細(xì)胞具有重建血管微環(huán)境的功能[45]。體外研究表明，骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)血管生成，并作為血管周圍前體細(xì)胞促進(jìn)脈管系統(tǒng)形成[46]。

4.5 促進(jìn)皮膚細(xì)胞功能 真皮成纖維細(xì)胞和表皮角質(zhì)上皮細(xì)胞是創(chuàng)傷愈合過程中的主要功能細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液可促進(jìn)體外成纖維細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞的劃痕愈合[47]。真皮成纖維細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)或加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液可促進(jìn)成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原的分泌[48]，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液可趨化巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、表皮角質(zhì)細(xì)胞及真皮成纖維細(xì)胞的遷移[49]。

間充質(zhì)干細(xì)胞通過與微環(huán)境的相互作用，一方面經(jīng)自分泌/旁分泌細(xì)胞因子作用于其他效應(yīng)細(xì)胞促進(jìn)皮膚創(chuàng)面修復(fù)(圖1)[50]，另一方面間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為特定皮膚細(xì)胞而參與組織修復(fù)。

圖1 間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌效應(yīng)促進(jìn)愈合作用機(jī)制

5 展望

綜上所述，間充質(zhì)干細(xì)胞對慢性皮膚潰瘍具有明確治療作用，其作用機(jī)制可以歸結(jié)為間充質(zhì)干細(xì)胞的旁分泌效應(yīng)和向類皮細(xì)胞分化潛能;同時(shí)，作者以“stem cell and cutaneous ulcer”為關(guān)鍵詞在網(wǎng)址為www.clinicaltrials.gov中檢索到21項(xiàng)臨床試驗(yàn)，9項(xiàng)是間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚潰瘍臨床研究。這些都表明間充質(zhì)干細(xì)胞已成為慢性皮膚潰瘍治療研究的焦點(diǎn)。由于間充質(zhì)干細(xì)胞來源廣泛，培養(yǎng)簡單，圍繞間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)藥物或器械的開發(fā)具有可行性。同時(shí)，也看到美國食品和藥物管理局發(fā)布的《燒傷創(chuàng)面和慢性皮膚潰瘍治療藥物臨床研究指導(dǎo)原則》對于慢性皮膚潰瘍臨床研究中的終點(diǎn)評價(jià)指標(biāo)要求苛刻[51]，所以科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案對于最終能否獲批顯得十分關(guān)鍵[52]。

[1]Jiang Y，Huang S，F(xiàn)u X，et al.Epidemiology of chronic cutaneous wounds in China[J].Wound Repair Regen，2011，19(2):181-188.

[2]Yang W，Lu J，Weng J，et al.Prevalence of diabetes among men and women in China[J].N Engl J Med，2010，362(12):1090-1101.

[3]Snyder RJ，Hanft JR.Diabetic foot ulcers--effects on QOL，costs，and mortality and the role of standard wound care and advanced-care therapies[J].Ostomy Wound Manage，2009，55(11):28-38.

[4]Hocking AM，Gibran NS.Mesenchymal stem cells:paracrine signaling and differentiation during cutaneous wound repair[J].Exp Cell Res，2010，316(14):2213-2219.

[5]Kiwanuka E，Junker J，Eriksson E.Harnessing growth factors to influence wound healing[J].Clin Plast Surg，2012，39(3):239-248.

[6]Wieman TJ，Smiell JM，Su Y.Efficacy and safety of a topical gel formulation of recombinant human platelet-derived growth factor-BB(becaplermin)in patients with chronic neuropathic diabetic ulcers.A phase Ⅲ randomized placebo-controlled double-blind study[J].Diabetes Care，1998，21(5):822-827.

[7]Dionyssiou D，Demiri E，F(xiàn)oroglou P，et al.The effectiveness of intralesional injection of platelet-rich plasma in accelerating the healing of chronic ulcers:an experimental and clinical study[J].Int Wound J，2013，10(4):397-406.

[8]Veves A，F(xiàn)alanga V，Armstrong DG，et al.Graftskin，a human skin equivalent，is effective in the management of noninfected neuropathic diabetic footulcers:a prospective randomized multicenter clinical trial[J].Diabetes Care，2001，24(2):290-295.

[9]Marston WA，Hanft J，Norwood P，et al.The efficacy and safety of Dermagraft in improving the healing of chronic diabetic foot ulcers:results of a prospective randomized trial[J].Diabetes Care，2003，26(6):1701-1705.

[10]da Silva Meirelles L，Chagastelles PC，Nardi NB.Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues[J].J Cell Sci，2006，119(Pt 11):2204-2213.

[11]Dominici M，Le Blanc K，Mueller I，et al.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells.The International Society for Cellular Therapy position statement[J].Cytotherapy，2006，8(4):315-317.

[12]Kupcova Skalnikova H.Proteomic techniques for characterisation of mesenchymal stem cell secretome[J].Biochimie，2013，95(12):2196-2211.

[13]Sze SK，de Kleijn DP，Lai RC，et al.Elucidating the secretion proteome of human embryonic stem cell-derived mesenchymal stem cells[J].Mol Cell Proteomics，2007，6(10):1680-1689.

[14]Fathke C，Wilson L，Hutter J，et al.Contribution of bone marrow-derived cells to skin:collagen deposition and wound repair[J].Stem Cells，2004，22(5):812-822.

[15]Deng W，Han Q，Liao L，et al.Engrafted bone marrowderived flk-(1+)mesenchymal stem cells regenerate skin tissue[J].Tissue Eng，2005，11(1/2):110-119.

[16]Maharlooei MK，Bagheri M，Solhjou Z，et al.Adipose tissue derived mesenchymal stem cell(AD-MSC)promotes skin wound healing in diabetic rats[J].Diabetes Res Clin Pract，2011，93(2):228-234.

[17]Huang SP，Hsu CC，Chang SC，et al.Adipose-derived stem cells seeded on acellular dermal matrix grafts enhance wound healing in a murine model of a full-thickness defect[J].Ann Plast Surg，2012，69(6):656-662.

[18]Kim SW，Zhang HZ，Guo L，et al.Amniotic mesenchymal stem cells enhance wound healing in diabetic NOD/SCID mice through high angiogenic and engraftment capabilities[J].PLoS One，2012，7(7):e41105.

[19]Kong P，Xie X，Li F，et al.Placenta mesenchymal stem cell accelerates wound healing by enhancing angiogenesis in diabetic Goto-Kakizaki(GK)rats[J].Biochem Biophys Res Commun，2013，438(2):410-419.

[20]Kuo YR，Wang CT，Cheng JT，et al.Bone marrow-derived mesenchymal stem cells enhanced diabetic wound healing through recruitment of tissue regeneration in a rat model of streptozotocin-induced diabetes[J].Plast Reconstr Surg，2011，128(4):872-880.

[21]O'Loughlin A，Kulkarni M，Creane M，et al.Topical administration of allogeneic mesenchymal stromal cells seeded in a collagen scaffold augments wound healing and increases angiogenesis in the diabetic rabbit ulcer[J].Diabetes，2013，62(7):2588-2594.

[22]Tark KC，Hong JW，Kim YS，et al.Effects of human cord blood mesenchymal stem cells on cutaneous wound healing in leprdb mice[J].Ann Plast Surg，2010，65(6):565-572.

[23]Skardal A，Mack D，Kapetanovic E，et al.Bioprinted amniotic fluid-derived stem cells accelerate healing of large skin wounds[J].Stem Cells Transl Med，2012，1(11):792-802.

[24]Kim JW，Lee JH，Lyoo YS，et al.The effects of topical mesenchymal stem cell transplantation in canine experimental cutaneous wounds[J].Vet Dermatol，2013，24(2):242-e53.

[25]Azari O，Babaei H，Derakhshanfar A，et al.Effects of transplanted mesenchymal stem cells isolated from Wharton's jelly of caprine umbilical cord oncutaneous wound hea-ling;histopathological evaluation[J].Vet Res Commun，2011，35(4):211-222.

[26]Badiavas EV，F(xiàn)alanga V.Treatment of chronic wounds with bone marrow-derived cells[J].Arch Dermatol，2003，139(4):510-516.

[27]Vojtassák J，Danisovic L，Kubes M，et al.Autologous biograft and mesenchymal stem cells in treatment of the diabetic foot[J].Neuro Endocrinol Lett，2006，27(Suppl 2):134-137.

[28]Falanga V，Iwamoto S，Chartier M，et al.Autologous bone marrow-derived cultured mesenchymal stem cells delivered in a fibrin spray accelerate healingin murine and human cutaneous wounds[J].Tissue Eng，2007，13(6):1299-1312.

[29]Yoshikawa T，Mitsuno H，Nonaka I，et al.Wound therapy by marrow mesenchymal cell transplantation[J].Plast Reconstr Surg，2008，121(3):860-877.

[30]Dash NR，Dash SN，Routray P，et al.Targeting nonhealing ulcers of lower extremity in human through autologous bone marrow-derived mesenchymalstem cells[J].Rejuvenation Res，2009，12(5):359-366.

[31]Lu D，Chen B，Liang Z，et al.Comparison of bone marrow mesenchymal stem cells with bone marrow-derived mononuclear cells for treatment of diabetic critical limb ischemia and foot ulcer:a double-blind，randomized，controlled trial[J].Diabetes Res Clin Pract，2011，92(1):26-36.

[32]Pǎunescu V，Deak E，Herman D，et al.In vitro differentiation of human mesenchymal stem cells to epithelial lineage[J].J Cell Mol Med，2007，11(3):502-508.

[33]Wu M，Yang L，Liu S，et al.Differentiation potential of human embryonic mesenchymal stem cells for skin-related tissue[J].Br J Dermatol，2006，155(2):282-291.

[34]Shokrgozar MA，F(xiàn)attahi M，Bonakdar S，et al.Healing potential of mesenchymal stem cells cultured on a collagenbased scaffold for skin regeneration[J].Iran Biomed J，2012，16(2):68-76.

[35]Djouad F，Charbonnier LM，Bouffi C，et al.Mesenchymal stem cells inhibit the differentiation of dendritic cells through an interleukin-6-dependent mechanism[J].Stem Cells，2007，25(8):2025-2032.

[36]Moore KW，de Waal Malefyt R，Coffman RL，et al.Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor[J].Annu Rev Immunol，2001，19:683-765.

[37]Liechty KW，Kim HB，Adzick NS，et al.Fetal wound repair results in scar formation in interleukin-10-deficient mice in a syngeneic murine model of scarless fetal wound repair[J].J Pediatr Surg，2000，35(6):866-872.

[38]Zanone MM，F(xiàn)avaro E，Miceli I，et al.Human mesenchymal stem cells modulate cellular immune response to islet antigen glutamic acid decarboxylase in type 1 diabetes[J].J Clin Endocrinol Metab，2010，95(8):3788-3797.

[39]Martinez FO，Helming L，Gordon S.Alternative activation of macrophages:an immunologic functional perspective[J].Annu Rev Immunol，2009，27:451-483.

[40]Aggarwal S，Pittenger MF.Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses[J].Blood，2005，105(4):1815-1822.

[41]Sato Y，Ohshima T，Kondo T.Regulatory role of endogenous interleukin-10 in cutaneous inflammatory response of murine wound healing[J].Biochem Biophys Res Commun，1999，265(1):194-199.

[42]Krasnodembskaya A，Song Y，F(xiàn)ang X，et al.Antibacterial effect of human mesenchymal stem cells is mediated in part from secretion of the antimicrobial peptide LL-37[J].Stem Cells，2010，28(12):2229-2238.

[43]Mei SH，Haitsma JJ，Dos Santos CC，et al.Mesenchymal stem cells reduce inflammation while enhancing bacterial clearance and improving survival insepsis[J].Am J Respir Crit Care Med，2010，182(8):1047-1057.

[44]Lozito TP，Taboas JM，Kuo CK，et al.Mesenchymal stem cell modification of endothelial matrix regulates their vascular differentiation[J].J Cell Biochem，2009，107(4):706-713.

[45]Bianco P，Robey PG，Simmons PJ.Mesenchymal stem cells:revisiting history，concepts，and assays[J].Cell Stem Cell，2008，2(4):313-319.

[46]Au P，Tam J，F(xiàn)ukumura D，et al.Bone marrow-derived mesenchymal stem cells facilitate engineering of long-lasting functional vasculature[J].Blood，2008，111(9):4551-4558.

[47]Walter MN，Wright KT，F(xiàn)uller HR，et al.Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing:an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays[J].Exp Cell Res，2010，316(7):1271-1281.

[48]Smith AN，Willis E，Chan VT，et al.Mesenchymal stem cells induce dermal fibroblast responses to injury[J].Exp Cell Res，2010，316(1):48-54.

[49]Gurtner GC，Werner S，Barrandon Y，et al.Wound repair and regeneration[J].Nature，2008，453(7193):314-321.

[50]Maxson S，Lopez EA，Yoo D，et al.Concise review:role of mesenchymal stem cells in wound repair[J].Stem Cells Transl Med，2012，1(2):142-149.

[51]Eaglstein WH，Kirsner RS，Robson MC.Food and Drug Administration(FDA)drug approval end points for chronic cutaneous ulcer studies[J].Wound Repair Regen，2012，20(6):793-796.

[52]Maderal AD，Vivas AC，Eaglstein WH，et al.The FDA and designing clinical trials for chronic cutaneous ulcers[J].Semin Cell Dev Biol，2012，23(9):993-999.