金福菇液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化

劉敏，白志芳，李媛，郭苗，王謙

（河北大學(xué)生物技術(shù)研究中心，河北保定 071002）

金福菇（TricholomalobayenseHeim），又名洛巴伊口蘑、大白口蘑、巨大口蘑［1］等，日本稱白色松茸，屬擔(dān)子菌亞門(mén)，層菌綱，傘菌目，口蘑科（白蘑科），口蘑屬（白蘑屬）［2］，是熱帶地區(qū)的大型真菌.金福菇是近年來(lái)新開(kāi)發(fā)的一種珍稀食藥用真菌，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值已經(jīng)逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，是一種深受消費(fèi)者喜愛(ài)的高品質(zhì)食用菌.

隨著人民生活水平的不斷提高，人們對(duì)食用菌的信任度和需求量有了很大幅度的提高.但是，傳統(tǒng)制種、栽培方式已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足食用菌產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展的要求，大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)，已成為不可抵擋的發(fā)展趨勢(shì).液體培養(yǎng)技術(shù)具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)，是食用菌產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的必然趨勢(shì).食用菌液體培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代生物工程技術(shù)之一，具有菌絲體生長(zhǎng)速度快、液體菌種的菌齡一致、接種方便、無(wú)季節(jié)性、適宜工廠化生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)，潛力巨大，前景廣闊［3－4］.

食用菌液體培養(yǎng)方面的研究很多，但關(guān)于金福菇液體培養(yǎng)方面的報(bào)道還很少，在食用菌的液體培養(yǎng)過(guò)程中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的選擇固然重要，但是培養(yǎng)條件對(duì)于菌絲體的產(chǎn)量、質(zhì)量等影響也較大，是食用菌液體培養(yǎng)過(guò)程中的重要內(nèi)容.本文旨在找到金福菇液體培養(yǎng)時(shí)較為適宜的培養(yǎng)條件.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

金福菇菌種由河北大學(xué)食藥用真菌研究所提供.

1.1.2 培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯150g，葡萄糖15g，玉米粉25g，麩皮10g，酵母膏10g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，維生素B10.01g，赤霉素1.0mg，水1 000mL，pH自然.

一級(jí)液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，麩皮30g，葡萄糖20g，酵母膏3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，維生素B10.01g，水1 000mL，pH自然，用于培養(yǎng)一級(jí)液體菌種.

二級(jí)液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯20g，葡萄糖30g，麩皮25g，酵母膏3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，水1 000mL，pH自然.

1.2 方法

1.2.1 一級(jí)液體菌種的制備方法

無(wú)菌操作取5塊大小約為0.5cm×0.5cm活化后的金福菇菌種塊，接種于裝有100mL一級(jí)搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，放置于25℃培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)24h，然后置于恒溫?fù)u床中，25℃，150r／min恒溫振蕩培養(yǎng)，制得金福菇一級(jí)液體菌種，然后以10%的接種量接入二級(jí)搖瓶培養(yǎng)基中。

1.2.2 適宜pH的選擇實(shí)驗(yàn)

用1mol／L的氫氧化鈉溶液和1mol／L的鹽酸溶液調(diào)整二級(jí)液體培養(yǎng)基的起始pH值，使培養(yǎng)基的pH值分別處于4.0，5.0，6.0，7.0，8.0.接種后，25℃，150r／min振蕩培養(yǎng)7d，直接測(cè)定菌絲體鮮質(zhì)量.菌絲體鮮質(zhì)量的測(cè)定采用本研究所以往的方法進(jìn)行［5］，比干質(zhì)量測(cè)定更實(shí)用、更快速.

1.2.3 培養(yǎng)溫度的選擇實(shí)驗(yàn)

接種后，分別在24，26，28，30，32℃的條件下150r／min進(jìn)行振蕩培養(yǎng)7d.培養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定菌絲體鮮質(zhì)量.

1.2.4 適宜搖床轉(zhuǎn)速的選擇實(shí)驗(yàn)

接種后，在1.2.2中所選出的溫度下振蕩培養(yǎng)7d，搖床轉(zhuǎn)速分別為140，160，180，200，220r／min.培養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定菌絲體鮮質(zhì)量.

1.2.5 適宜裝液量的選擇實(shí)驗(yàn)

分別在250mL三角瓶中裝入50，75，100，125，150mL的二級(jí)液體培養(yǎng)基，接種后，在1.2.3中選出的溫度及1.2.4中選出的搖床轉(zhuǎn)速的條件下振蕩培養(yǎng)7d，培養(yǎng)結(jié)束后，測(cè)定菌絲體鮮質(zhì)量.

2 結(jié)果與分析

2.1 適宜pH值的選擇

隨著液體培養(yǎng)基pH值的變化，金福菇菌絲體鮮質(zhì)量的變化情況如圖1.

由表1、圖1可以看出，當(dāng)液體培養(yǎng)基的pH值為6.0時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后菌絲體鮮質(zhì)量最大，為21.093 8g，與pH為7.0不存在顯著性差異，與其他pH存在顯著性差異，所以，pH 6.0～7.0是金福菇液體培養(yǎng)較為適宜的pH值.

表1 不同pH對(duì)金福菇菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.1 Multiple comparison of different pH on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.2 適宜溫度的選擇

當(dāng)液體培養(yǎng)的溫度不同時(shí)，金福菇菌絲體鮮質(zhì)量的變化情況如圖2.

圖1 起始pH值對(duì)金福菇液體菌絲培養(yǎng)的影響Fig.1 Effect of initiation pH on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

圖2 溫度對(duì)金福菇液體菌絲培養(yǎng)的影響Fig.2 Effect of temperature on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

由表2、圖2可以看出，當(dāng)液體培養(yǎng)的溫度為30℃時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后菌絲體鮮質(zhì)量最大，為23.741 3g.與溫度為32℃時(shí)不存在顯著性差異，與其他溫度條件存在顯著性差異，所以，30～32℃是金福菇液體培養(yǎng)較為適宜的溫度.

表2 不同溫度對(duì)金福菇液體菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.2 Multiple comparison of different temperature on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.3 適宜轉(zhuǎn)速的選擇

當(dāng)液體培養(yǎng)的搖床轉(zhuǎn)速不同時(shí)，金福菇菌絲體鮮質(zhì)量的變化情況如圖3.

由表3、圖3可以看出，當(dāng)液體培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為160r／min時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后菌絲體鮮質(zhì)量最大，為22.997 3g，與180r／min時(shí)不存在顯著性差異，與其他轉(zhuǎn)速存在顯著性差異，所以，160～180r／min是金福菇液體培養(yǎng)較為適宜的搖床轉(zhuǎn)速.

表3 不同搖床轉(zhuǎn)速對(duì)金福菇液體菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.3 Multiple comparison of different rotate speed on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

2.4 適宜裝液量的選擇

當(dāng)液體培養(yǎng)基的裝液量不同時(shí)，金福菇菌絲體鮮質(zhì)量的變化情況如圖4.

圖3 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)金福菇液體菌絲培養(yǎng)的影響Fig.3 Effect of rotate speed on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

圖4 裝液量對(duì)金福菇液體菌絲培養(yǎng)的影響Fig.4 Effect of medium volume on liquid culture of Tricholoma lobayense Heim

由表4、圖4可以看出，當(dāng)250mL的三角瓶中裝液量為100mL時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后菌絲體鮮質(zhì)量最大，為20.957 3g，并且與其他裝液量存在顯著性差異，所以，250mL的三角瓶中裝液量100mL為金福菇液體培養(yǎng)較適宜的裝液量.

表4 不同裝液量對(duì)金福菇液體菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.4 Multiple comparison of different medium volume on the mycelial fresh weight of Tricholoma lobayense Heim

3 討論

本實(shí)驗(yàn)從pH值、培養(yǎng)溫度、搖床轉(zhuǎn)速以及裝液量4個(gè)方面對(duì)金福菇的液體培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究.結(jié)果表明，金福菇液體培養(yǎng)適宜的條件為pH值6.0～7.0、培養(yǎng)溫度30～32℃、搖床轉(zhuǎn)速160～180r／min以及250mL三角瓶裝液量100mL.

［1] 應(yīng)建浙，卯曉嵐，馬啟明.中國(guó)藥用真菌圖鑒［M］.北京：科學(xué)出版社，1987：371.YING Jianzhe，MAO Xiaolan，MA Qiming.An illustrated handbook of medicinal fungi［M］.Beijing：Science Press，1987：371.

［2] 傅俊生，蔡衍山，柯麗娜，等.金福菇的交配型研究［J］.食用菌學(xué)報(bào)，2007，14（3）：10－12.FU Junsheng，CAI Yanshan，KE Lina，et al.Mating system ofTricholomagiganteum［J］.Acta Edulis Fungi，2007，14（3）：10－12.

［3] 王謙，賈震.食藥用菌的藥理作用研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究與教育，2010，27（5）：67－70.WANG Qian，JIA Zhen.Research prowess on pharmacological actions of edible and medicinal fungi［J］.Medical Research and Education，2010，27（5）：67－70.

［4] 王謙，劉敏，張亞從.大球蓋菇原生質(zhì)體制備及紫外誘變［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，31（4）：413－417.WANG Qian，LIU Min，ZHANG Yacong.Protoplast preparation and ultraviolet radiation investigatio ofStrophariarugosoannulata［J］.Journal of Hebei University：Natural Science Edition，2011，31（4）：413－417.

［5] 王謙，閆蕾蕾，王永利，等.金頂側(cè)耳的深層液體培養(yǎng)及相關(guān)檢測(cè)［J］.菌物系統(tǒng)，2002，21（1）：103－106.WANG Qian，YAN Leilei，WANG Yongli，et al.Submerged culture and related nutrient solution determination ofPleurotuscitrinopileatus［J］.Mycosystema，2002，21（1）：103－106.