乳腺癌組織中SPARC和Her—2的表達

孫孝媛+于國華+張居民

[摘要] 目的 探討富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）和人表皮生長因子受體（Her-2）在乳腺癌組織中的表達及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測70例乳腺癌和20例乳腺纖維腺瘤中SPARC和Her-2的表達。 結(jié)果 SPARC在乳腺癌間質(zhì)細胞的高表達率為68.6%（48/70）明顯高于腫瘤細胞表達率為37.1%（26/70）（P<0.05）；間質(zhì)細胞中乳腺癌的SPARC表達率為68.6%（48/70）明顯高于乳腺纖維腺瘤的表達率為40.0%（8/20）（P<0.05）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ期的乳腺癌中SPARC的表達率升高（P<0.05）。乳腺癌中SPARC的高表達率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。Her-2在乳腺癌腫瘤細胞中的高表達率為45.7%（32/70）明顯高于乳腺纖維腺瘤表達率的10.0%（2/20）（P<0.05）。Her-2在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高（P<0.05）。 結(jié)論 乳腺癌中SPARC、Her-2的高表達與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] SPARC；Her-2；乳腺腫瘤

[中圖分類號] R737.9 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）12-18-04

乳腺癌是目前女性發(fā)病最高的惡性腫瘤，且發(fā)病率越來越高，對女性患者的健康和生活造成嚴(yán)重影響，在乳腺癌的病理類型中浸潤性導(dǎo)管癌最常見，惡性程度高，預(yù)后差。SPARC和Her-2在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用。本研究應(yīng)用免疫組化法檢測SPARC和Her-2在乳腺癌組織中的表達情況，并進一步分析SPARC、Her-2與臨床病理因素之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月1日～11月20日濰坊市人民醫(yī)院收治的經(jīng)病理證實為乳腺癌浸潤性導(dǎo)管癌的患者70例、乳腺纖維腺瘤患者20例，均為女性，年齡33～73歲，平均（53±20）歲，均為首診初治的患者，平均病程（30±15）d，且乳腺癌組和乳腺纖維腺瘤組具有可比性。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期患者共22例，Ⅱ期患者共27例和Ⅲ期患者共21例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者共30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者共40例。每例標(biāo)本均有免疫組化法檢測的ER和PR的表達情況。

1.2 試劑、方法

兔抗人SPARC單克隆抗體（Ⅰ抗）購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（工作濃度1∶200）；抗Her-2單克隆抗體（Ⅰ抗）、二步法檢測試劑盒（PV-6000） （Ⅱ抗）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。通用型二步法免疫組化染色，將標(biāo)本連續(xù)4μm切片，常規(guī)脫蠟入水，3% H2O2處理20min，高壓熱修復(fù)2min，順序加入Ⅰ抗（4℃過夜）、Ⅱ抗（30min），DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。用已知陽性切片做為陽性對照，用PBS代替Ⅰ抗做為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定

由兩位病理科醫(yī)師雙盲閱片。SPARC在細胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，Her-2在細胞膜上呈棕黃色為陽性。根據(jù)著色程度和著色細胞占總細胞計數(shù)的百分率綜合進行評分：無著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分；著色細胞占計數(shù)細胞的百分率：≤5%記為0分，>5%～25%記為1分，≥25%～50%記為2分，>50%記為3分；將每張切片的著色程度與著色細胞的百分率的得分相乘，其乘積為最后得分。0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為陽性（++），>6分為強陽性（+++）。Her-2根據(jù)美國乳腺癌HER2檢測指南[1]，HER2陽性為（+++）（>30%浸潤癌細胞的細胞膜呈完整的強著色），不確定為（++）（至少10%腫瘤細胞有完整的細胞膜著色，但染色不均勻或強度較弱）。陰性為（-）或（+）（任何比例的腫瘤細胞有微弱的、不完整的細胞膜著色或無著色）。在統(tǒng)計分析中將表達（-）～（+）劃為低表達組，（++）～（+++）劃為高表達組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPASS21.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，SPARC和Her-2的表達及其與臨床病理因素的分析采用x2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)ɑ=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織和乳腺纖維腺瘤組織中SPARC的差異性表達

SPARC在乳腺癌的腫瘤細胞、間質(zhì)細胞的胞質(zhì)和（或）胞核中均有不同程度表達，呈彌漫或散在的棕黃色顆粒狀（見圖1A）。在乳腺癌的間質(zhì)細胞中SPARC的高表達率68.6%（48/70）明顯高于腫瘤細胞的高表達率37.1%（26/70）（P<0.05）；在乳腺纖維腺瘤中SPARC在間質(zhì)細胞的高表達率40.0%（8/20）高于腫瘤細胞的高表達率30.0%（6/20）（P>0.05）。在乳腺癌組織和乳腺纖維腺瘤中SPARC在腫瘤細胞的高表達率分別為37.1%（26/70）和30.0%（6/20）（P>0.05）；在乳腺癌組織和乳腺良性病變組織中SPARC在間質(zhì)細胞的高表達率分別為68.6%（48/70）和40.0%（8/20）（P<0.05）。

實驗表明，SPARC在乳腺癌間質(zhì)細胞中呈高表達，而在腫瘤細胞中呈低表達，并且實驗發(fā)現(xiàn)在乳腺癌浸潤邊緣的間質(zhì)細胞中SPARC的表達率較腫瘤實質(zhì)內(nèi)間質(zhì)細胞的表達率高，提示SPARC與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)。

2.2 乳腺癌組織中SPARC的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 乳腺癌組織中Her-2的表達

2.4 乳腺癌組織中Her-2的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

SPARC具有明顯的組織特異性。研究表明，SPARC在100%的原發(fā)及轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中高表達，在多數(shù)發(fā)育異常的痣中呈中等表達，在痣細胞中低表達，而在正常的黑色素細胞中不表達[1]。對人類結(jié)直腸癌的研究同樣表明SPARC基因的過度表達與腫瘤的惡化相關(guān)[2]。研究發(fā)現(xiàn)，SPARC在食管癌[3]、乳腺癌[4]、口腔癌[5]、神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤[6]、肝癌[7]、胃癌[8]等惡性腫瘤中呈高表達。但在卵巢癌[9]、胰腺癌[10]和非小細胞肺癌[11]等惡性腫瘤中的表達水平降低，在這些腫瘤中表現(xiàn)出一定的抑瘤性。Chlenski等[12]用SPARC來治療神經(jīng)細胞瘤，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療組的MVD明顯低于對照組，由此表明SPARC在神經(jīng)細胞瘤中具有抑制新生血管生成的作用，并且具有影響腫瘤生長的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，SPARC還具有調(diào)節(jié)腫瘤細胞生長、增殖及凋亡的作用。Puolakkainen等[13]研究表明在敲除了SPARC基因的小鼠中發(fā)現(xiàn)卵巢癌細胞和胰腺癌細胞的增殖作用得到加強，并且其凋亡作用下降。Yiu等[14]研究表明，SPARC可以使卵巢癌的正常上皮細胞和腫瘤細胞的增殖作用得到抑制，并且還可以加快腫瘤細胞的凋亡速率。Massi等[15]通過將SPARC mRNA轉(zhuǎn)染低表達SPARC的黑色素瘤細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低表達SPARC的黑色素瘤細胞的致瘤作用得到增強，這提示SPARC與黑色素瘤的發(fā)生可能有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果表明，SPARC在乳腺癌組織和乳腺纖維腺瘤組織中表達不同，SPARC在乳腺癌間質(zhì)細胞的表達率68.6%（48/70）和乳腺纖維腺瘤間質(zhì)細胞的表達率40.0%（8/20）進行比較（P<0.05）；SPARC在乳腺癌腫瘤細胞的表達率37.1%（26/70）和乳腺纖維腺瘤腫瘤細胞的表達率30.0%（6/20）進行比較（P<0.05）。表明SPARC在乳腺癌間質(zhì)細胞中表達率高于乳腺纖維腺瘤，這與張雪梅等[16]研究結(jié)果一致。SPARC在乳腺癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05）；SPARC在TNM分期為Ⅲ期的表達率高于Ⅰ期和Ⅱ期（P>0.05）。本實驗表明，SPARC在腫瘤細胞的表達與年齡、分期、ER、PR及C-erbB2表達無關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。SPARC在乳腺癌間質(zhì)細胞中高表達，這與Barth等[17]的研究結(jié)果相符。endprint

Her-2在正常組織中呈陰性表達，而在乳腺、卵巢、肺等腫瘤組織中呈過表達。van研究發(fā)現(xiàn)，在侵襲性乳腺癌的疾病早期發(fā)現(xiàn)Her-2過表達；有學(xué)者認(rèn)為Her-2過表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)[18]。有研究表明，Her-2的過表達陽性率與組織學(xué)分級相關(guān)[19]，其表達預(yù)示腫瘤惡性程度高，提示與乳腺癌的發(fā)展有關(guān)。在臨床上有20%～30%的乳腺癌可以檢測到Her-2基因擴增[20]。Her-2過表達者表現(xiàn)為易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、惡性程度高。因此，Her-2是乳腺癌患者預(yù)后差的指標(biāo)。本實驗中Her-2主要表達于乳腺癌的腫瘤細胞，Her-2在乳腺癌的表達率為45.7%（32/70），Her-2與患者年齡、ER、PR無關(guān)，與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期呈正相關(guān)。Strauss等研究提示，Her-2基因過表達的乳腺癌惡性程度高、預(yù)后差，并與患者的無病生存和總生存期有關(guān)[21]。總之，Her-2擴增的乳腺癌患者傾向于早期復(fù)發(fā)，且生存期短。

總之，SPARC、Her-2在乳腺癌組織中均呈高表達。SPARC和Her-2與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，兩者之間的具體作用機理仍有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] Mok SC，Chan WY，Wong KK，et al.SPARC，an extracellular matrix protein with tumor-suppressing activity in human ovarian epithelial cells[J].Oncogene，2012，12：1895-19011.

[2] 戴芳芳、于國華、張居民，等.結(jié)直腸癌組織SPARC和MMP-2及VEGF的表達臨床意義分析[J].中華腫瘤防治雜志，2012，19（14）：1086-1090.

[3] 車軼群，齊新，郭健，等.食管鱗癌組織和細胞系中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白表達分析[J].中華檢驗醫(yī)學(xué) 雜志，2010，29（4）：314-316.

[4] 車軼群，王海，齊軍.乳腺癌中SPARC基因表達及臨床意義[J].實用癌癥雜志，2012，20（2）：120-122.

[5] 岳金.VEGF-C、PDGF-A和SPARC在口腔鱗癌中表達的研究[D].青島：青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，2012：130-135.

[6] Shi Q，Bao S，Song L，et al.Targeting SPARC expression decreases glioma cellular survival and invasion associated with reduced activities of FAK and ILK kinases[J].Oncogene，2011，26（28）：4084-4094.

[7] 陳科濟，王義，孫延富.肝細胞癌組織SPARC表達及其臨床意義[J].中國癌癥雜志，2010，18（10）：744-748.

[8] 董明霞，楊彥華，于建憲.胃癌組織SPARC表達及其意義[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（2）：105-107.

[9] Abeysinghe HR，Cao Q，Xu J，et al.THY1 expression is associated with tumor suppression of human ovarian cancer[J].Cancer Genet Cytogenet，2011，143（2）：125-132.

[10] Sato N，F(xiàn)ukushima N，Maehara N，et a1.SPARC/osteonectin is a frequent target for aberrant methylation in pancreatic adenocarcinoma and a mediator of tumor--stromal interactions[J].Oncogene，2012，22（32）：5021-5030.

[11] Koukourakis MI，Giatromanolaki A，Brekken RA，et al. Enhanced expression of SPARC/Osteonectin in the tumor-associated stroma of nonsmall cell lung cancer is correlated with markers of hypoxia/acidity and with poor prognosis of patients[J].Cancer Res，2011，63（17）：5376-5380.

[12] Chlenski A，Liu S，Crawford SE，et al.SPARC is a key Sehwannian-derived inhibitor controlling neuroblastoma tumor angiogenesis[J].Cancer Res，2011，62（24）：7357-7363.

[13] Puolakkainen PA，Brekken RA，Muneer S，et al. Enhanced growth of pancreatic tumors in SPARC-null mice is associated with decreased deposition of extracellular matrix and reduced tumor cell apoptosis[J]. Mol Cancer Res，2010，2（4）：215-224.

[14] Yiu GK，Chan WY，Ng SW，et al.SPARC（secreted protein acidic and rich in cysteine）induces apoptosis in ovarian cancer cells[J].Am J Pathol，2011，159（2）：609-622.endprint

[15] Massi D，F(xiàn)ranchi A，Borgognoni L，et al.Osteonectin expression correlates with clinical outcome in thin cutaneous malignant melanomas[J].Hum pathol，2010，30（3）：339-344.

[16] 張雪梅，陳嘉薇，胡宏慧，等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中SPARC、KISS-1和KALL的表達和意義[D].上海：上海交通大學(xué)，2011：1445-1448.

[17] Barth PJ，Moll R，Ramaswamy A.Stromal remodeling and SPARC（secreted protein acid rich in cysteine）expression in in -vasive ductal carcinomas of the breast[J].Virchows Arch，2012，446（5）：532-536.

[18] Kamil M，Yusuf N，Khalid I，et al.Association between HER-2/neu over-expression and clinico-pathologic parameters of breast cancer in northern Malaysia[J].Ceylon Med J，2010，55（1）：9-13.

[19] Toikkanen S，Helin H，Isola J，et al.Prognostic significance of HER-2 oncoprotein expression breast cancer：a 30-year follow-up[J].J Clin Oncol，2012，10（7）：1044-1048.

[20] Cooke T，Reeves J，Lanigan A，et al.HER2 as a prognostic and predictive marker for breast cancer[J].Ann Oncol，2010，12（1）：23-28.

[21] Strauss B.Best hope or last hope：access to phase III clinical trials of HER-2/neu for advanced stage breast cancer patients[J].J Adv Nurs，2011，31（2）：259-266.

（收稿日期：2014-04-11）endprint

[15] Massi D，F(xiàn)ranchi A，Borgognoni L，et al.Osteonectin expression correlates with clinical outcome in thin cutaneous malignant melanomas[J].Hum pathol，2010，30（3）：339-344.

[16] 張雪梅，陳嘉薇，胡宏慧，等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中SPARC、KISS-1和KALL的表達和意義[D].上海：上海交通大學(xué)，2011：1445-1448.

[17] Barth PJ，Moll R，Ramaswamy A.Stromal remodeling and SPARC（secreted protein acid rich in cysteine）expression in in -vasive ductal carcinomas of the breast[J].Virchows Arch，2012，446（5）：532-536.

[18] Kamil M，Yusuf N，Khalid I，et al.Association between HER-2/neu over-expression and clinico-pathologic parameters of breast cancer in northern Malaysia[J].Ceylon Med J，2010，55（1）：9-13.

[19] Toikkanen S，Helin H，Isola J，et al.Prognostic significance of HER-2 oncoprotein expression breast cancer：a 30-year follow-up[J].J Clin Oncol，2012，10（7）：1044-1048.

[20] Cooke T，Reeves J，Lanigan A，et al.HER2 as a prognostic and predictive marker for breast cancer[J].Ann Oncol，2010，12（1）：23-28.

[21] Strauss B.Best hope or last hope：access to phase III clinical trials of HER-2/neu for advanced stage breast cancer patients[J].J Adv Nurs，2011，31（2）：259-266.

（收稿日期：2014-04-11）endprint

[15] Massi D，F(xiàn)ranchi A，Borgognoni L，et al.Osteonectin expression correlates with clinical outcome in thin cutaneous malignant melanomas[J].Hum pathol，2010，30（3）：339-344.

[16] 張雪梅，陳嘉薇，胡宏慧，等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中SPARC、KISS-1和KALL的表達和意義[D].上海：上海交通大學(xué)，2011：1445-1448.

[17] Barth PJ，Moll R，Ramaswamy A.Stromal remodeling and SPARC（secreted protein acid rich in cysteine）expression in in -vasive ductal carcinomas of the breast[J].Virchows Arch，2012，446（5）：532-536.

[18] Kamil M，Yusuf N，Khalid I，et al.Association between HER-2/neu over-expression and clinico-pathologic parameters of breast cancer in northern Malaysia[J].Ceylon Med J，2010，55（1）：9-13.

[19] Toikkanen S，Helin H，Isola J，et al.Prognostic significance of HER-2 oncoprotein expression breast cancer：a 30-year follow-up[J].J Clin Oncol，2012，10（7）：1044-1048.

[20] Cooke T，Reeves J，Lanigan A，et al.HER2 as a prognostic and predictive marker for breast cancer[J].Ann Oncol，2010，12（1）：23-28.

[21] Strauss B.Best hope or last hope：access to phase III clinical trials of HER-2/neu for advanced stage breast cancer patients[J].J Adv Nurs，2011，31（2）：259-266.

（收稿日期：2014-04-11）endprint