脂質(zhì)飲食對(duì)Beagle犬體內(nèi)左氧氟沙星藥動(dòng)學(xué)的影響

張成志，劉富春，宋 航

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400016；2.中國(guó)人民解放軍第三二四醫(yī)院藥劑科，重慶 400020；3.中國(guó)人民解放軍第三二四醫(yī)院，重慶 400020）

左氧氟沙星（levofloxacin，Lfox）是目前臨床上抗菌活性較高的一種廣譜抗菌藥物，在治療各種敏感菌引起的感染中是更為有效、更安全、治療時(shí)間較短、費(fèi)用相對(duì)較低、適宜廣泛使用的藥物。目前，在眼科、婦科、消化科、肺科等臨床科室用于治療常見(jiàn)病和多發(fā)病［1－8］。隨著人們生活水平的提高，食物中脂質(zhì)比例的增加是否影響Lfox的吸收呢？有文獻(xiàn)報(bào)道，脂質(zhì)可影響莫西沙星的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，但也有文獻(xiàn)認(rèn)為進(jìn)食不影響Lfox的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)［9－11］。因此，作者選用Beagle犬作為研究對(duì)象，探討了進(jìn)食脂質(zhì)對(duì)Lfox藥動(dòng)學(xué)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥 Lfox標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（純度：97.3%，批號(hào)：130455－200604，中國(guó)藥品生物制品檢定出品）。試驗(yàn)藥乳酸Lfox片劑（規(guī)格：100mg／片，10片×1板、盒，包裝：鋁塑包裝，由浙江醫(yī)藥股份有限公司提供；批號(hào)：091004）。環(huán)丙沙星（CF）（內(nèi)標(biāo)；純度：98.16%，批號(hào)：060402，重慶藥友制藥有限公司提供）。其余試劑均為分析純，水為雙蒸水；進(jìn)食脂質(zhì)為半肥瘦豬肉末。

1.1.2 動(dòng)物 健康合格Beagle犬6只，雌雄各半，體質(zhì)量9～10kg，由四川養(yǎng)麝研究所提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第63號(hào)；環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管第64號(hào)。

1.1.3 儀器 1100系列高效液相色譜（HPLC）儀，包括1100泵系統(tǒng)、1100可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和1100工作站（美國(guó)Agilent公司）。

1.2 方法 Beagle犬6只，分為空腹組和進(jìn)食脂質(zhì)組，每組3只，交叉進(jìn)行試驗(yàn)。Beagle犬于實(shí)驗(yàn)前禁食12h，實(shí)驗(yàn)時(shí)脂質(zhì)組給予脂質(zhì)（半肥瘦豬肉末），每只150g，同時(shí)給予Lfox 10 mg／kg（根據(jù)人體臨床常用劑量與動(dòng)物劑量換算）［12］?？崭菇M給予Lfox 10mg／kg和自來(lái)水每只100mL，服藥后送回籠中。8h后統(tǒng)一進(jìn)食。各組犬于給藥后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、48h經(jīng)大隱靜脈采血3mL，肝素抗凝，分離血漿，－20℃保存，待測(cè)。2周后兩組犬只交叉實(shí)驗(yàn)，取血量及取血時(shí)間均同前。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用中國(guó)藥理數(shù)理學(xué)會(huì)編制的3p97計(jì)算機(jī)軟件，計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血藥濃度測(cè)定

2.1.1 色譜條件 Phenomenex Gemini C18色譜柱（250mm×4.6nm，5μm），柱溫為35℃，流動(dòng)相為甲醇∶0.008mol／L磷酸鹽緩沖液∶0.5mol／L四丁基溴化銨＝25∶75∶4，流速1.2 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm，固定進(jìn)樣環(huán)100μL。內(nèi)標(biāo)（IS）：CF。

2.1.2 樣品處理 參照文獻(xiàn)［13］，取0.5mL犬血漿＋I(xiàn)S 50 μL（CF：33.6μg／mL）＋4mL CH2Cl2，旋搖1min，3 000r／min離心2min，取CH2Cl2層于5mL離心管內(nèi)，置于40℃水浴中，氮?dú)獯蹈伞＜尤?.1mL流動(dòng)相復(fù)融，進(jìn)樣40μL。

2.1.3 色譜行為 取對(duì)照品溶液（含Lfox／CF為0.305／1.68 μg／mL甲醇溶液）直接進(jìn)樣；分別取空白血漿、空白血漿＋Lfox＋CF（含Lfox／CF為0.488／1.68μg／mL）和犬灌藥后1h血漿＋CF，按樣品處理方法操作，記錄色譜圖。在本實(shí)驗(yàn)所采用的色譜條件下，血漿中Lfox的tR為7min左右，CF的tR為10min左右，二者峰形良好，且不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，色譜詳見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性關(guān)系與最低定量濃度 在空白血漿中分別添加Lfox使血藥濃度相當(dāng)于9.760、4.880、2.440、1.220、0.610、0.305、0.0976μg／mL，按樣品處理方法操作，將所得Lfox峰面積／CF峰面積比（Y）與Lfox濃度（X）數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝2.083 3 X－0.142 1；在9.760%～0.097 6μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0.999 96（n＝5）；最低定量濃度為0.097 6μg／mL（RSD＝9.50%，n＝5）。

2.1.5 精密度和重復(fù)性 取高、中、低3種質(zhì)控樣本（4.880、1.220、0.305μg／mL），每個(gè)濃度5份，考察批內(nèi)和批間變異。批內(nèi)誤差（每個(gè)濃度同日內(nèi)測(cè)定5次）、日內(nèi)變異性結(jié)果及批間誤差（每個(gè)濃度2周內(nèi)測(cè)定5次）日間變異性結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度及重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.6 回收率 取高、中、低3種濃度的血漿質(zhì)控樣本（4.880、1.220、0.305μg／mL），每個(gè)濃度5份，按規(guī)定方法評(píng)價(jià)本法的回收率。結(jié)果，高、中、低濃度的回收率分別為（98.25±2.86）%、（100.16±4.28）%、（102.85±5.70）%。

表2 血漿中Lfox的穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n＝5）

2.1.7 穩(wěn)定性考察 取高、中、低3種血漿質(zhì)控樣本（4.880、1.220、0.305μg／mL），每個(gè)濃度3份，按樣品處理方法操作并測(cè)定。室溫25℃左右，放置24h測(cè)定5次；冷藏（4℃冰箱），10d內(nèi)測(cè)定5次；低溫（－20℃冰箱），反復(fù)冷凍、融化，3周內(nèi)測(cè)定5次。結(jié)果表明，在室溫、冷藏、反復(fù)凍融條件下，血漿中Lfox的穩(wěn)定性均良好，見(jiàn)表2。

2.2 血藥濃度－時(shí)間曲線 空腹組與進(jìn)食脂質(zhì)組Lfox的平均血藥濃度－時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。藥時(shí)數(shù)據(jù)經(jīng)3p97軟件自動(dòng)擬合，二組均數(shù)均符合二室模型。

圖2 兩組犬只平均血藥濃度－時(shí)間曲線（n＝6）

表3 兩組犬只藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較±s，n＝6）

表3 兩組犬只藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較±s，n＝6）

＊：P＜0.05；△：P＜0.01，與空腹組比較。

參數(shù) 空腹組 進(jìn)食脂質(zhì)組Ka（h） 0.410±0.074 0.730±0.071△β（h） 0.990±0.072 0.033±0.006 lag time（h） 0.430±0.059 0.360±0.067 t1／2Ka（h） 1.730±0.340 0.960±0.087△t1／2β（h） 11.070±8.460 21.790±4.590 V／F（c）（L） 1.930±0.560 1.990±0.290 Cl／F（s）（L／h） 0.310±0.039 0.240±0.055＊tmax（h） 3.420±0.410 2.000±0.320△Cmax（μg·mL－1） 2.710±0.600 2.520±0.380 AUC0→t（μg·h－1·mL－1）36.510±8.660 37.190±8.210

2.3 藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 每例受試犬血藥濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)采用計(jì)算機(jī)3p97程序自動(dòng)擬合，結(jié)果表明空腹和進(jìn)食脂質(zhì)狀態(tài)下Lfox的藥－時(shí)數(shù)據(jù)均符合二室藥動(dòng)學(xué)模型。求得有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表3。由圖1、表2可見(jiàn)，tmax加快，但對(duì)t1／2β、Cmax和 AUC0→t均無(wú)影響。

3 討 論

國(guó)內(nèi)外早期對(duì)Lfox血藥濃度測(cè)定采用微生物法，由于專屬性不強(qiáng)，誤差大。采用L／MS／MS價(jià)高，一般醫(yī)院難于承受；采用HPLC測(cè)定較為準(zhǔn)確，但HPLC法在配制流動(dòng)相中，配方各有不同。本文參照文獻(xiàn)［14］，采用甲醇、磷酸鹽緩沖液和離子極化劑四丁基溴化銨，其比例為25∶75∶4，結(jié)果Lfox和CF分離良好，準(zhǔn)確性高，其檢測(cè)范圍為9.760 0～0.097 6μg／mL，結(jié)果較為滿意，符合實(shí)驗(yàn)要求。

文獻(xiàn)報(bào)道，空腹或進(jìn)食對(duì)口服Lfox藥動(dòng)學(xué)無(wú)影響［11］。而本研究結(jié)果顯示，進(jìn)食脂質(zhì)較空腹 Ka、t1／2Ka、tmax、t1／2β和 Cl／F（s）明顯改變，且（P＜0.05或P＜0.01）。脂質(zhì)使藥物吸收速度加快，達(dá)峰時(shí)間提前，消除延長(zhǎng)，其原因可能是藥物在脂質(zhì)的作用下，吸收迅速，達(dá)峰時(shí)間加快，更易達(dá)到組織，使藥物更快地到達(dá)血和周圍組織，如文獻(xiàn)報(bào)道［15－16］。Lfox相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)較小，脂溶性高，血漿蛋白結(jié)合率低，在結(jié)構(gòu)上具有促進(jìn)水溶性的惡嗪環(huán)與具有適度脂溶性的N－甲基哌嗪，使其穿透性增高，吸收不易受到食物的干擾，脂質(zhì)反而促進(jìn)了Lfox的吸收。就其t1／2β參數(shù)而言，與空腹組間雖無(wú)顯著差異，但明顯延長(zhǎng)，也符合Lfox廣泛分布于組織中，被動(dòng)轉(zhuǎn)移消除延緩。

總之，脂質(zhì)飲食同Lfox同時(shí)服用，可加快Lfox的吸收，而消除減慢。提示脂質(zhì)飲食對(duì)Lfox的吸收和消除有一定的幫助，有益于Lfox在體內(nèi)的儲(chǔ)留，與文獻(xiàn)［11］有不同的見(jiàn)解。

［1］邵蔚，張芳玲.左氧氟沙星滴眼液治療兒童急性結(jié)膜炎172例療效觀察［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（5）：87－88.

［2］曹小川.左氧氟沙星滴眼液治療細(xì)菌性角膜炎的臨床觀察［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（24）：111－112.

［3］周春霞.鹽酸左氧氟沙星治療盆腔炎的臨床效果及其安全性分析［J］.海峽醫(yī)學(xué)，2013，25（8）：131－133.

［4］肖玉鳳，李雪鵬，孫寶華，等.左氧氟沙星聯(lián)合甲硝唑輔助婦科治療儀治療慢性盆腔炎71例［J］.中國(guó)藥業(yè)，2013，22（19）：106－107.

［5］范金花，王義國(guó)，劉長(zhǎng)虹，等.左氧氟沙星三聯(lián)療法治療幽門螺桿菌感染的臨床研究［J］.中華消化病與影像雜志：電子版，2013，3（3）：26－29.

［6］肖清平，黃麗芳，劉輝英，等.左氧氟沙星治療幽門螺旋桿菌感染的應(yīng)用研究［J］.臨床探討，2013，51（31）：157－158.

［7］梁一娟.加替沙星和左氧氟沙星治療下呼吸道感染療效分析［J］.中國(guó)藥物與臨床，2013，13（7）：915－916.

［8］楊國(guó)華.左氧氟沙星治療下呼吸道感染86例療效觀察［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7（16）：109－110.

［9］陳力，唐玲，沈正澤，等.脂質(zhì)飲食對(duì)犬體內(nèi)莫西沙星藥代動(dòng)力學(xué)的影響［J］.中國(guó)藥房，2010，21（41）：3875－3876.

［10］岳建農(nóng)，李飛，羅斌，等.高蛋白飲食對(duì)犬體內(nèi)左氧氟沙星藥動(dòng)學(xué)的影響研究［J］.中國(guó)藥房，2013，24（5）：410－412.

［11］趙秀麗，王淑民，李嘉靜，等.進(jìn)食對(duì)口服甲磺酸左氧氟沙星片藥動(dòng)學(xué)的影響［J］.中國(guó)藥房，2006，17（2）：119－121.

［12］徐叔云，卞如廉，陳修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：404.

［13］曾洋，肖明朝，周遠(yuǎn)大，等.特拉唑嗪對(duì)左氧氟沙星治療前列腺炎藥動(dòng)學(xué)的影響［J］.中國(guó)抗生素雜志，2010，35（12）：941－944.

［14］孔令希，李秀英，楊輝，等.氨溴索對(duì)左氧氟沙星在大鼠血漿、肺組織、支氣管液中分布的影響［J］.中國(guó)新藥與臨床雜志，2013，32（10）：789－793.

［15］唐建國(guó).氟喹諾酮藥物左氧氟沙星［J］.國(guó)外醫(yī)藥：抗生素分冊(cè)，1996，17（5）：380－387.

［16］Wimer SM，Schoonover L，Garrison MW.Levofloxscin：a thearpevtic review［J］.Clin Ther，1998，20（6）：1049－1070.