奧沙普秦分散片有關(guān)物質(zhì)方法的研究

賀 玲，劉德軍，冷 紅

（1.遼寧富東制藥有限公司，遼寧 本溪117004；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，遼寧 沈陽110031）

奧沙普秦分散片的化學(xué)成分為奧沙普秦，臨床上適用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩周炎、強(qiáng)直性脊椎炎、頸肩腕綜合征、痛風(fēng)及外傷和手術(shù)后消炎、鎮(zhèn)痛。奧沙普秦分散片的藥品標(biāo)準(zhǔn)中未收載有關(guān)物質(zhì)檢查方法［1］，現(xiàn)參考《中國藥典》2010年版二部奧沙普秦原料的有關(guān)物質(zhì)檢查方法（HPLC）進(jìn)行測定，方法如下。

1 材料與方法

1.1 材料

儀器：高效液相色譜儀1260（安捷倫科技有限公司）；紫外-可見分光光度計TU-1810（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。試藥：乙腈（色譜純，美國JTBaker）；娃哈哈純化水。樣品：奧沙普秦分散片（每片含奧沙普秦0.2g）批號為130901；130902；130903；奧沙普秦原料（符合《中國藥典》2010年版二部奧沙普秦原料的有關(guān)物質(zhì)測定）。

1.2 方法

1.2.1 有關(guān)物質(zhì)方法的確定

參考《中國藥典》2010年版二部奧沙普秦分散片藥品標(biāo)準(zhǔn)項下的有關(guān)物質(zhì)檢查方法［2］，采用HPLC法進(jìn)行試驗(yàn)。選用乙腈作為溶劑使溶解。

1.2.2 色譜條件

儀器：高效液相色譜儀安捷倫1260；色譜柱：迪馬C18（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：水（用磷酸調(diào) p H 值為2.5）：乙腈（50：50）；檢測波長：254nm；流速：1.0m L／min。

1.2.3 檢測波長的選擇［3］

稱取奧沙普秦適量，加乙腈使溶解，制成每1mL中約含2mg的溶液，取該溶液適量至紫外-可見分光光度計在190～400nm范圍掃描最大吸收峰。

1.2.4 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（用磷酸調(diào)p H值為2.5）（50：50）為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按奧沙普秦計算應(yīng)不低于2000。

1.2.5 輔料干擾試驗(yàn)

取除去主藥的空白輔料配成空白輔料加乙腈使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為陰性對照溶液，取20μL，按色譜條件，作為陰性對照試驗(yàn)。

1.2.6 耐用性試驗(yàn)

1.2.6.1 色譜柱：分別選用迪馬公司 C18（5μm，250mm×4.6mm）和江申C18（5μm，150mm×4.6mm）色譜柱，分別注入供試品溶液20μL。按色譜條件，作為色譜柱耐用性試驗(yàn)。

1.2.6.2 流動相：流動相中有機(jī)相的比例變更±5%，分別為水（用磷酸調(diào)p H 值為2.5）：乙腈（52.5：47.5）和（47.5：52.5）分別注入供試品溶液20μL。按色譜條件，作為流動相耐用性試驗(yàn)。

1.2.6.3 柱溫：調(diào)節(jié)柱溫10～30℃，分別注入供試品溶液20μL。按色譜條件，作為柱溫耐用性試驗(yàn)。

1.2.7 最低檢測限

逐級稀釋奧沙普秦對照品溶液，測定樣品峰的峰高，同時測定相同條件下的色譜基線噪聲，取基線噪聲的3倍值作為最低檢測限。計算最低檢測限。

1.2.8 專屬性［4］

1.2.8.1 酸降解試驗(yàn)：取本品1片研細(xì)至100m L容量瓶中加0.1mol／L的鹽酸10mL室溫放置24h后，加乙腈使溶解，照色譜條件測定。

1.2.8.2 堿降解試驗(yàn)：取本品1片研細(xì)至100m L容量瓶中加0.1mol／L的氫氧化鈉溶液10m L室溫放置24h后，加乙腈使溶解，照色譜條件測定。

1.2.8.3 光降解試驗(yàn)：取本品適量研細(xì)置日光下直接照射24h后，取約1片至100m L容量瓶中加乙腈使溶解，照色譜條件測定。

1.2.8.4 高溫試驗(yàn)：取本品適量研細(xì)置130℃烘箱8h后，取約1片至100mL容量瓶中加乙腈使溶解，照色譜條件測定。

1.2.8.5 氧化降解試驗(yàn)：取本品1片研細(xì)至100m L容量瓶中分別加15%、30%的雙氧水10m L室溫放置后，加乙腈使溶解，照色譜條件測定。

1.2.9 有關(guān)物質(zhì)測定

避光操作。取本品，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1m L中約含2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用乙腈定量稀釋制成每1mL中約含20μg的溶液作為對照品溶液。照色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。取對照溶液20μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的30%；再精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的5倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰的面積和不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%）。原料同法操作。記錄色譜圖，計算雜質(zhì)含量。

2 結(jié)果

2.1 最大吸收

在190～400nm范圍掃描結(jié)果表明本品在254nm處有最大吸收，因此選擇254nm作為有關(guān)物質(zhì)測定的檢測波長。

2.2 陰性對照

空白輔料制成的陰性對照溶液色譜圖無雜質(zhì)峰，對測定結(jié)果無干擾。

2.3 耐用性試驗(yàn)

選用不同的色譜柱進(jìn)行測定，供試品溶液色譜圖的理論板數(shù)、分離度及出峰順序基本一致，均滿足系統(tǒng)適應(yīng)性的要求。流動相、柱溫變化，供試品溶液色譜圖的理論板數(shù)、分離度及出峰順序基本一致，雜質(zhì)檢出無明顯變化。結(jié)果顯示色譜柱、流動相、柱溫對有關(guān)物質(zhì)的檢出無影響。

2.4 最低檢測限

根據(jù)圖譜求得奧沙普秦的最低檢測限為1.25ng，實(shí)驗(yàn)中有關(guān)物質(zhì)測定的奧沙普秦進(jìn)樣量為40μg，即樣品中雜質(zhì)含量大于0.003%可被檢出。

2.5 專屬性

2.5.1 酸降解試驗(yàn)：結(jié)果顯示，雜質(zhì)色譜峰無較大增加，該供試品對酸穩(wěn)定。見圖1。

2.5.2 堿降解試驗(yàn)：結(jié)果顯示，雜質(zhì)色譜峰無較大增加，該供試品對堿穩(wěn)定。見圖1。

圖1 酸降解、堿降解、高溫、氧化圖譜

2.5.3 光降解試驗(yàn)：結(jié)果顯示，出現(xiàn)較多新雜質(zhì)色譜峰（相對保留時間分別約為 0.25、0.34、0.38、0.41、0.70、0.80等），原有相對保留時間1.75倍雜質(zhì)峰峰面積增大，故光照對供試品影響較大，應(yīng)注意避光操作。見圖2。

圖2 光照試驗(yàn)圖譜

2.5.4 高溫試驗(yàn)：結(jié)果顯示，雜質(zhì)峰無較大增加，該供試品對高溫穩(wěn)定。見圖1。

2.5.5 氧化降解試驗(yàn)：結(jié)果顯示，雜質(zhì)色譜峰無較大增加，該供試品對堿穩(wěn)定。見圖1。

2.6 有關(guān)物質(zhì)的測定

結(jié)果顯示，自制樣品與原料藥有關(guān)物質(zhì)的種類基本一致。見表1。

表1 有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

2.7 有關(guān)物質(zhì)限度的確定

參考《中國藥典》奧沙普秦標(biāo)準(zhǔn)項下的有關(guān)物質(zhì)檢查限度，并根據(jù)本品三批樣品和原料藥樣品的實(shí)測結(jié)果，確定本品的有關(guān)物質(zhì)的限度即供試品溶液的色譜圖中主成分峰之后如顯雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰的面積和不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%），三批樣品有關(guān)物質(zhì)均符合上述限度。

3 討論

3.1 奧沙普秦分散片藥品標(biāo)準(zhǔn)中未收載有關(guān)物質(zhì)檢查方法，現(xiàn)參考《中國藥典》2010版二部奧沙普秦原料的有關(guān)物質(zhì)檢查方法（HPLC）進(jìn)行測定［2］，采用 HPLC法測定有關(guān)物質(zhì)，操作簡便、快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而能有效地控制該藥的質(zhì)量。

3.2 專屬性試驗(yàn)表明：光照對奧沙普秦影響較大，光照使奧沙普秦有關(guān)物質(zhì)降解，產(chǎn)生大量雜質(zhì)，影響主藥含量，影響藥效。故檢驗(yàn)過程應(yīng)該避免光照，在遮光棕色瓶中試驗(yàn)。藥品生產(chǎn)貯藏時也應(yīng)注意避光。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）WS-454（X-390）-2000.中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局.2000年12月22日

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［M］.北京：中國中醫(yī)藥科技出版社，2010，1037

［3］郭宏，高金波，邱樹勇.高效液相色譜法測定惡丙嗪片的含量［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2001，24（2）：16

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［M］.北京：中國中醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄194