吳茱萸致肝毒性研究

臧寶珊，孫向明，李文蘭

(1. 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076; 2. 國(guó)家教育部 抗腫瘤天然藥物工程研究中心，哈爾濱150076)

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，中藥取材于天然的植物、動(dòng)物、礦物，安全性高，不良反應(yīng)少，且對(duì)一些西藥無(wú)效的疾病具有一定的療效，往往忽略了其潛在的毒副作用.李文蘭、薛佳等[1-2]等研究發(fā)現(xiàn)，穿心蓮提取物和穿心蓮內(nèi)酯對(duì)雄性小鼠具有生殖毒性作用，并呈現(xiàn)一定的“時(shí)-毒”、“量-毒”關(guān)系.

隨著中藥在東西方國(guó)家中日益廣泛的應(yīng)用，有關(guān)中藥誘發(fā)藥源性肝損傷(DILI)的報(bào)道也逐漸增多[3-5].藥源性肝損傷是指藥物在治療過(guò)程中，肝臟由于藥物的毒性損傷或?qū)λ幬镞^(guò)敏反應(yīng)所致的疾病.在全球死亡原因中，根據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)顯示，藥源性損傷導(dǎo)致的肝毒性因素位于第五位[6].在我國(guó)，中藥所致的急性肝損傷僅次于抗結(jié)核藥物位列第二[7-8]，近年來(lái)已引起臨床高度重視.

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸(Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.)、石虎(Evodia rutaecarpa(Juss)Benth Var.officinalis(Dode)Huang.)或疏毛吳茱萸(Evodia rutaecarpa(Juss)Benth Var.bodinier(Dode)Huang.)的干燥近成熟果實(shí).辛、苦、熱，有小毒.歸肝、脾、胃、腎經(jīng).具有散寒止痛，降逆止嘔，助陽(yáng)止瀉的功效[9].吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，屬傳統(tǒng)的中藥溫理藥.在歷代中醫(yī)藥書(shū)籍中記載其有小毒，《別錄》言其“大熱，有小毒”；《藥性論》記載：“吳茱萸，味苦、辛，大熱，有毒”；李時(shí)珍認(rèn)為吳茱萸“有小毒，動(dòng)脾火，病目者忌之”等.隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)吳茱萸的化學(xué)成分及藥理作用的深入研究，已為揭示吳茱萸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了一定的基礎(chǔ)[10-14].近年來(lái)，吳茱萸的臨床應(yīng)用日趨廣泛，臨床上因服用吳茱萸不當(dāng)而產(chǎn)生中毒的報(bào)道也時(shí)有發(fā)生[15-18]，亦有部分文獻(xiàn)指出其可以引起肝毒性[19]，吳茱萸的用藥安全引起了人們的高度重視.因此，筆者對(duì)近年來(lái)吳茱萸所致的肝毒性及其作用機(jī)制進(jìn)行綜述，以便為吳茱萸臨床安全用藥和科學(xué)研究提供依據(jù)及方法.

1 吳茱萸不同部位致肝毒性作用

目前已經(jīng)從吳茱萸植物中分離得到了100多個(gè)化合物，研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸植物所含的化學(xué)成分種類較多，包括生物堿、黃酮類、萜類、香豆素、甾體、精油、木脂素、核苷酸及其他成分，其中生物堿、苦味素為主要成分[20-22].

1.1 吳茱萸水提物致肝毒性

通過(guò)收集近些年關(guān)于吳茱萸水提物致肝毒性的研究發(fā)現(xiàn)，吳茱萸水提物引起的肝毒性多呈現(xiàn)一定的急性毒性.研究發(fā)現(xiàn)[18]，多次灌胃吳茱萸水提物可導(dǎo)致明顯的肝損傷，且存在一定的肝毒性的“量-時(shí)-毒”關(guān)系.吳茱萸水提物的劑量的不同會(huì)對(duì)肝臟造成不同程度的損傷，伴隨著肝臟指數(shù)的變化、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的明顯升高，且呈現(xiàn)劑量依賴相關(guān)性.周璐等[23]報(bào)道，吳茱萸水提取物影響大、小鼠部分肝藥酶亞型的活性具有一定的差異性.根據(jù)大、小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，吳茱萸水提取物可以誘導(dǎo)大、小鼠CYP1A、CYP2C和CYP2E1的活性，且對(duì)CYP1A活性的誘導(dǎo)更為顯著.吳茱萸水提取物可以誘導(dǎo)小鼠CYP3A活性，抑制大鼠CYP2D的活性，而對(duì)小鼠CYP2D、大鼠CYP3A的活性無(wú)顯著影響.

1.2 吳茱萸醇提物致肝毒性

李波等[24]等研究發(fā)現(xiàn)，吳茱萸乙醇提物灌胃給予大鼠后，對(duì)其會(huì)產(chǎn)生不同程度的毒性.實(shí)驗(yàn)將80只SD雌雄各半的大鼠隨機(jī)分成4組，分別給予吳茱萸乙醇提物15、30、60 g(原生藥)/kg及等量蒸餾水灌胃14 d，于第3、14 d測(cè)定血液生化學(xué)、血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)，觀察肝臟組織病理變化，計(jì)算臟器系數(shù).給藥3 d后，吳茱萸乙醇提物30、60 g(原生藥)/kg組尿素氮(BUN)、血清總膽紅素(TBIL)和堿性磷酸酶(ALP)較對(duì)照組升高，白蛋白(ALB)和血清總蛋白(TP)明顯降低，肝臟系數(shù)顯著增大.給藥14 d后，與對(duì)照組相比，吳茱萸乙醇提物30、60 g(原生藥)/kg組血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)升高，吳茱萸乙醇提物60 g(原生藥)/kg組臟器系數(shù)較正常組明顯增大.根據(jù)對(duì)各組大鼠肝臟病理組織學(xué)的觀察，如圖1、2所示，主要表現(xiàn)為肝臟中央靜脈及小葉下靜脈周圍肝細(xì)胞變形、灶性壞死，毒性無(wú)性別差異，并呈現(xiàn)一定的“時(shí)-毒”、“量-毒”關(guān)系.

圖1 吳茱萸乙醇提取物一次灌胃急性毒性試驗(yàn)肝臟病例變化(給藥3 d后)

圖2 吳茱萸乙醇提取物一次灌胃急性毒性試驗(yàn)肝臟病例變化(給藥14 d后)

由此可知吳茱萸乙醇提物具有一定毒性，肝臟是其主要毒性靶器官之一，推測(cè)吳茱萸醇提物的肝毒性是通過(guò)其吸收代謝的產(chǎn)物影響肝藥酶活性來(lái)?yè)p害肝臟.

1.3 吳茱萸揮發(fā)油致肝毒性

吳茱萸揮發(fā)油會(huì)產(chǎn)生一定程度的肝損傷.孫蓉等[25]用小鼠研究吳茱萸揮發(fā)油肝毒性“量-時(shí)-毒”關(guān)系，發(fā)現(xiàn)單次灌胃小鼠6 h后血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)達(dá)到峰值，8～72 h內(nèi)造成明顯肝損傷，且呈一定劑量依賴相關(guān)性.黃偉等[26]研究發(fā)現(xiàn)，多次灌胃小鼠吳茱萸揮發(fā)油會(huì)導(dǎo)致一定程度的肝損傷，與時(shí)間、劑量呈現(xiàn)一定相關(guān)性.根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥7 d之內(nèi)小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)及總膽紅素(TBI)升高，白蛋白(ALB)降低，臟器系數(shù)增大，以及不同程度的肝細(xì)胞水腫、脂肪變性和間質(zhì)充血.

2 吳茱萸致肝毒性機(jī)制的研究

吳茱萸致肝毒性的機(jī)制復(fù)雜，其毒理學(xué)基礎(chǔ)尚不完全明確，目前研究認(rèn)為，吳茱萸致肝毒性機(jī)制可能與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān).

2.1 與其引起機(jī)體氧化應(yīng)激有關(guān)

正常情況下，機(jī)體內(nèi)的氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài).谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等都是抗氧化系統(tǒng)的重要成員.GSH-Px可以催化GSH變?yōu)镚SSG，使有毒的過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，同時(shí)促進(jìn)H2O2的分解，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過(guò)氧化物的干擾及損害的目的.GSH是機(jī)體內(nèi)主要的低分子清除劑，保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基，它是GSH-Px和GST兩種酶的底物GSH，GSH含量的降低會(huì)產(chǎn)生毒性作用，因此GSH的含量是影響機(jī)體抗氧化作用的重要因素.

根據(jù)研究報(bào)道[27]，吳茱萸水提物可引起血和肝中MDA含量的顯著升高，GSH-Px、SOD活性的降低，NO含量的升高，NOS活性的增大， GHS含量的下降，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴相關(guān)性.血和肝中MDA含量升高，阻礙線粒體氧化磷酸化，損害線粒體功能，導(dǎo)致自由基增多，損害肝細(xì)胞；GSH-Px、SOD活性的降低，機(jī)體內(nèi)自由基含量的升高，破壞了氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)之間的動(dòng)態(tài)平衡，引起細(xì)胞凋亡；NO含量的升高和NOS活性的增大導(dǎo)致自由基增多，產(chǎn)生肝毒性；GSH含量的減少，降低了抗氧化作用.由此推測(cè)，引起機(jī)體氧化應(yīng)激后誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化可能是吳茱萸致肝毒性機(jī)制之一.

2.2 與其引起機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān)

IL-1β、IL-6及TNF-α等均是與炎癥反應(yīng)十分相關(guān)的炎癥介質(zhì).IL-1β是致炎性的細(xì)胞因子，它可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，釋放炎性介質(zhì)，參與炎癥后期纖維化的形成.IL-1β會(huì)促進(jìn)病理性成纖維細(xì)胞分泌更多的IL-6和IL-8.IL-6是活化的T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子，能使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞；和集落刺激因子協(xié)同，能促進(jìn)原始骨髓源細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的裂解功能.TNF-α是一種由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的能抑制成骨細(xì)胞和刺激破骨細(xì)胞的細(xì)胞因子，其被證實(shí)在肝纖維化中發(fā)揮重要的作用，TNF-α的過(guò)度分泌會(huì)引起肝損傷.周璐等[28]在研究吳茱萸水煎液致小鼠肝毒性機(jī)制中發(fā)現(xiàn)，連續(xù)21 d給予高、中、低3個(gè)劑量的吳茱萸水煎液后，如表1所示，與正常組相比，給藥組的小鼠肝臟中IL-1β、IL-6及TNF-α的含量明顯增高.提示大量炎癥介質(zhì)釋放與產(chǎn)生，是吳茱萸致肝損傷的原因之一,見(jiàn)表1.

組別生藥劑量/(g·kg-1·d-1)IL-1β/(ng·L-1)IL-6/(pg·L-1)TNF-α/(ng·L-1)正常- 15.33±0.74 24.99±1.96104.89±8.86吳茱萸1018.71±1.03?27.14±1.71?125.04±8.722020.95±0.86?29.89±1.81? 131.13±9.963027.64±1.43?41.57±3.59?155.84±8.9?

與正常組比較*P<0.01

3 結(jié) 語(yǔ)

中藥是中國(guó)傳統(tǒng)文化和傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精華，中藥治療具有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)和獨(dú)特的理論體系，對(duì)人類健康做出了不可磨滅的貢獻(xiàn).近些年臨床上因服用了未炮制透的中藥或直接服用了生品中藥或因超劑量服用或因配伍不當(dāng)而引起肝臟毒性的報(bào)道日益增多.如何避免中藥可能存在的肝臟毒性，提高中藥臨床用藥安全，是中藥走向現(xiàn)代化、產(chǎn)業(yè)化、國(guó)際化的關(guān)鍵所在.

吳茱萸為臨床常用中藥，其水煎劑為常用劑型，歷代本草中一般記載其有小毒，從日益增多的吳茱萸臨床不良反應(yīng)報(bào)道中得知肝損害占大部分，吳茱萸的用藥安全引起了人們的重視.目前，認(rèn)為吳茱萸致肝毒性的作用機(jī)制為：一是與引起機(jī)體氧化應(yīng)激后誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)；二是與引起機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān).吳茱萸引起肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的進(jìn)一步深入的研究和明確，是解決吳茱萸致肝毒性問(wèn)題的有效途徑.

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