原發(fā)性肝癌患者介入治療前后血清Dickkopf-1表達變化

劉旭超 陳 鵬 黃清秀 張木根

原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，近年來肝癌死亡率呈明顯上升之勢。2008年我國肝癌患者死亡病例數(shù)約37.2萬，在所有惡性腫瘤中居第2位[1]。由于其起病隱匿、早期癥狀體征多不明顯，因此發(fā)現(xiàn)時大多已是晚期并伴有轉(zhuǎn)移，失去了手術(shù)時機，一般統(tǒng)計5年存活率不足5%，因而提高早期診斷率對改善患者預(yù)后、降低肝癌死亡率至關(guān)重要[2]。目前臨床肝癌診斷多采取病理結(jié)合影像學(xué)和特定血清學(xué)腫瘤標記物的方法。但影像學(xué)和病理檢查對直徑較小的癌組織容易漏診，并且病理檢查對早期疑似患者較難實施。腫瘤標記物的檢測，雖然經(jīng)濟、方便、容易被患者接受，但是單純依賴甲胎蛋白(AFP)診斷早期肝癌敏感性、特異性尚不理想[3]。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相繼發(fā)現(xiàn)了許多新的生物腫瘤相關(guān)分子。DKK1是Andrei Glinka等在1998年發(fā)現(xiàn)的在Wnt信號通路中起抑制作用的分子。Wnt信號通路在腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中起重要作用，其可以促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化、生長、侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成等過程[4]。因此DKK1在惡性腫瘤中的表達和作用也引起了研究者的極大興趣，目前已知的研究發(fā)現(xiàn)DKK1在肺癌、食管癌、胃癌等多種腫瘤患者的血清中存在異常表達的情況，因此通過本研究，我們希望明確DKK1在原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)表達情況以及其是否可以作為評價患者治療效果和預(yù)后的指標。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月-2014年1月在我院確診并接受介入治療的原發(fā)性肝癌患者共87例，其中按照其臨床分期分為Ⅱ期組41例、Ⅲ期組46例，其中男性60例，女性27例，年齡40～71歲，平均年齡(53.8±9.2)歲，所有患者均經(jīng)過影像學(xué)、病理檢查，診斷和分期符合2001年制定的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標準》[5]，所有入選的患者均排除繼發(fā)性肝癌或原發(fā)性肝癌肝外轉(zhuǎn)移，凝血功能正常，無碘油過敏史和心腎等其他器官功能障礙，患者均接受至少2次介入治療；同時選擇同期在健康查體中心體檢的研究對象40例作為對照組，其中男性27例，女性13例，年齡41～73歲，平均年齡(54.3±8.7)歲。

1.2 方法

采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，檢測原發(fā)性肝癌患者及正常對照者血清DKK1水平，其中肝癌患者于介入治療前和治療后第28天進行血清DKK1水平檢測。所有檢測對象均抽取清晨空腹靜脈血2 ml，室溫下靜置4 h，3 000 r/min離心10 min分離血清，-80℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂肦&D公司生產(chǎn)的DKKl檢測試劑盒，操作嚴格按照試劑盒操作說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，設(shè)定P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清DKK1水平與原發(fā)性肝癌患者性別、年齡的關(guān)系

男性患者血清DKK1水平為(9.16±0.91)μg/L，女性患者為(9.35±1.13)μg/L，不同性別患者血清DKKl水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；年齡<55歲和≥55歲患者血清DKKl水平分別為(9.07±0.89)μg/L和(9.38±1.16)μg/L，兩者比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 三組患者介入治療前血清DKK1水平比較

治療前對照組血清DKK1水平[(3.07±0.53)μg/L]低于其余兩組，[Ⅱ期組和Ⅲ期組分別為(7.51±1.09)μg/L和(10.74±0.97)μg/L]，Ⅱ期組低于Ⅲ期組，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。

2.3 介入治療前后原發(fā)性肝癌患者血清DKK1水平比較

Ⅱ期組、Ⅲ期組介入治療后血清DKK1水平均較治療前降低，介入治療前后組內(nèi)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，見表1。

表1 介入治療前后原發(fā)性肝癌患者血清DKK1水平比較

3 討論

Wnt信號通路是最重要、最經(jīng)典的細胞信號通路之一，其廣泛參與了細胞增殖、遷移、凋亡及血管生成等過程，不但在胚胎頭部發(fā)育調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而且與腫瘤的發(fā)生進展也密切相關(guān)，已經(jīng)成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點[6]。作為在Wnt信號通路發(fā)揮抑制性作用的重要分泌型因子，近年來DKK1在多種腫瘤中的作用也逐漸受到關(guān)注[7]。DKK1是Dickkopf基因家族成員之一，人類DKK1基因位于染色體10q11.2，編碼一個約266個氨基酸組成的分泌型糖蛋白。DKK1 在正常人體內(nèi)表達較少，難以被檢測到。多項研究表明，DKK1在肝癌、乳腺癌、食道癌、肺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑色素瘤等多種腫瘤中存在明顯異常表達，并且其表達水平與腫瘤分期、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)，提示DKK1可作為一個新的腫瘤標志物，在腫瘤診斷及預(yù)后評估中具有重要作用[8-12]。

目前多項研究通過免疫學(xué)及基因芯片技術(shù)已經(jīng)證明，DKK1 在原發(fā)性肝癌患者呈高表達，而在非癌性肝臟組織中表達量很低，并發(fā)現(xiàn)其可以用于肝癌早期診斷，DKK1與AFP聯(lián)合應(yīng)用可將肝癌診斷敏感度提高至88%[13]。本研究通過ELISA法檢測41例Ⅱ期和46例Ⅲ期肝癌患者血清DKK1水平發(fā)現(xiàn)，肝癌患者血清DKK1水平明顯高于正常組，并且Ⅲ期患者明顯高于Ⅱ期患者(P<0.05)，說明血清DKK1水平在肝癌患者明顯升高，并且與患者TNM分期有關(guān)，提示血清DKK1水平有望用于評價肝癌患者預(yù)后情況，但由于肝癌的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移是影響患者存活率的重要因素，我們還需要長期大規(guī)模的隨訪研究來評估DKK1在肝癌進展和預(yù)后方面的作用。本研究結(jié)果還顯示，血清DKK1水平在不同性別、年齡的肝癌患者間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

除了在腫瘤診斷及預(yù)后等方面的研究之外，DKK1還被用于評估腫瘤的治療效果。Heider等[14]發(fā)現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤患者接受抗腫瘤治療后，患者血清DKK1水平明顯下降。在肝癌治療方面，梁衛(wèi)明等[15]比較了20例肝癌I期患者手術(shù)治療前后及18例Ⅱ期患者介入治療前后的血清DKKl水平變化，發(fā)現(xiàn)手術(shù)及介入治療后肝癌患者血清DKKl水平與治療前比較明顯降低，并經(jīng)隨訪觀察后發(fā)現(xiàn)，治療后血清DKKl水平較高的患者肝癌復(fù)發(fā)比例更高。本研究通過檢測41例Ⅱ期肝癌患者和46例Ⅲ期患者介入治療前后的血清DKKl水平發(fā)現(xiàn)，血清DKKl水平與治療前比較明顯降低，介入治療前后各期組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，這提示DKK1可能在肝癌介入治療后評估治療效果方面具有重要作用。

綜上所述，分泌型糖蛋白DKK1在肝癌患者中表達明顯升高，血清水平與肝癌TNM分期存在明顯相關(guān)性，并且在介入治療后明顯降低，提示DKK1有可能作為肝癌的一個腫瘤標志物和治療靶點，在肝癌診斷、預(yù)后及治療效果評估中發(fā)揮重要作用。

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