蛋白質(zhì)芯片與化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)糖尿病自身抗體結(jié)果對(duì)比分析

曹青梅 (延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000)

不同實(shí)驗(yàn)室的血清IAA檢測(cè)結(jié)果差異較大，原因考慮為檢測(cè)方法不同，不同生產(chǎn)廠家的試劑質(zhì)量有差別，實(shí)驗(yàn)設(shè)備性能不一樣，實(shí)驗(yàn)人員操作技術(shù)熟練程度等待不一樣等存在密切關(guān)系［1］。探討化學(xué)發(fā)光酶免疫法(CLISA)和蛋白芯片法(PROTEINCHIP)兩種方法的敏感性和特異性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:所有患者均為延安大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科的確診患者，均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)1999年的診斷標(biāo)準(zhǔn)。55例患者其中男27例，女28例，年齡22～48歲，平均35歲。健康對(duì)照組50例為延安大學(xué)附屬醫(yī)院的體檢者，男27例，女23例，年齡14～55歲，平均34.5歲。所有對(duì)照者空腹血糖均在6.1 mmol/L以下，且所有患者均沒(méi)有糖尿病家族史和自身免疫病史。

1.2 檢測(cè)方法:所有被檢標(biāo)本均是空腹靜脈采血2 ml，離心分離血清，分裝后置－20℃保存待統(tǒng)一檢測(cè)，蛋白芯片法的試劑購(gòu)置于深圳市塞爾生物技術(shù)有限公司。化學(xué)發(fā)光免疫試劑購(gòu)置于深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司。所有操作均嚴(yán)格按照儀器及試劑說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:用SPSS 8.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，各組間陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

蛋白芯片法與學(xué)發(fā)光法檢測(cè)IAA、ICA、GAD陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)表1。蛋白芯片法與學(xué)發(fā)光法檢測(cè)敏感性和特異性均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，詳見(jiàn)表2。

表1 兩種方法檢測(cè)各組血清結(jié)果比較

表2 兩種方法檢測(cè)各組血清1AA、1CA、GAD的敏感性、特異性比較(%)

3 討論

本組資料中蛋白芯片法與化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)IAA敏感性分別為31.4%、33.2%，特異性分別為100%、99%，檢測(cè)結(jié)果與報(bào)道基本一致。ICA陽(yáng)性預(yù)示了β細(xì)胞的自身免疫損傷，僅僅作為DM的高危指標(biāo)，其對(duì)T1DM的較高預(yù)測(cè)性體現(xiàn)在兒童陽(yáng)性或高水平持續(xù)陽(yáng)性的時(shí)候。因此對(duì)少年起病的T1DM早期有較高的診斷價(jià)值，而非糖尿病群體中僅有0.1%～0.5%存在ICA。1型糖尿病患者一級(jí)親屬中5%ICA陽(yáng)性，這些個(gè)體構(gòu)成了患1型糖尿病的高危人群。ICA屬于針對(duì)胰島自身細(xì)胞的一種抗體，免疫反應(yīng)是在當(dāng)胰島細(xì)胞抗體和胰島細(xì)胞的表面抗原結(jié)合后引起的，同時(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)被激活，細(xì)胞的溶解和死亡隨之發(fā)生，進(jìn)而引起DM［2］。因此ICA的血清學(xué)檢測(cè)是早期診斷1型糖尿病強(qiáng)有力的工具。本次試驗(yàn)蛋白芯片法與化學(xué)發(fā)光酶免法敏感性分別為13.5%、11.2%，特異性分別為100%、100%;結(jié)果差異不大。

抗谷氨酸脫羧酶抗體(GAD)為1型糖尿病患者血中存在又一自身抗體，T1DM患者最早出現(xiàn)的抗體是GAD，該抗體出現(xiàn)在臨床癥狀出現(xiàn)之前的較長(zhǎng)一段時(shí)間，在初發(fā)T1DM患者血液中其陽(yáng)性率高達(dá)70% ～80%［3］，在單一抗體陽(yáng)性中，T1DM中的GAD陽(yáng)性率高于ICA和IAA，說(shuō)明GAD在糖尿病分型中的價(jià)值優(yōu)于ICA和IAA，是1型糖尿病較好的免疫預(yù)測(cè)和診斷指標(biāo)。本次試驗(yàn)蛋白芯片法與化學(xué)發(fā)光法敏感性分別37.5%、36%，特異性分別為98%、97%，結(jié)果差異不大。因此，GAD、ICA和IAA三種抗體可以作為預(yù)測(cè)和診斷T1DM的較好指標(biāo)，而三種抗體聯(lián)合檢測(cè)可以作為T(mén)1DM高危人群流行病學(xué)的篩選指標(biāo)。傳統(tǒng)的化學(xué)方法每次只能檢測(cè)單項(xiàng)指標(biāo)，若進(jìn)行多指標(biāo)檢測(cè)不僅用血量大且檢測(cè)費(fèi)用昂貴.用血量大。蛋白芯片技術(shù)把多種純化的檢測(cè)蛋白高密度排列在固定支持物表面上，使標(biāo)本中的靶蛋白特異性地與之結(jié)合，通過(guò)微加工技術(shù)和微電子技術(shù)在固體芯片表面構(gòu)建微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，對(duì)靶蛋白進(jìn)行定性、定量檢測(cè)［4－5］，一次試驗(yàn)即可檢測(cè)出3種糖尿病患者自身抗體的血清狀況。

從上述兩種檢測(cè)方法的原理和各自的優(yōu)缺點(diǎn)并結(jié)合本次的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，蛋白芯片法與學(xué)發(fā)光法的敏感性和特異性相近，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而蛋白芯片法具有省時(shí)、高效、高通量平行檢測(cè)、操作簡(jiǎn)單、不需要特殊儀器的優(yōu)點(diǎn)，由此可見(jiàn)，蛋白芯片法優(yōu)于化學(xué)發(fā)光法。

［1］吳藝捷.糖尿病患者自身抗體檢測(cè)的進(jìn)展及臨床運(yùn)用［J］.實(shí)習(xí)糖尿病雜志，2004，3(12):55.

［2］趙成玉.谷氨酰脫羧酶抗體和胰島細(xì)胞抗體測(cè)定的臨床意義［J］.青海醫(yī)藥雜志，2005，35(5):62.

［3］朱禧星.現(xiàn)代糖尿病學(xué)［M］.上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社，2000:1－95.

［4］Gutstein HB，Morr is JS，Annangud i SP，et a.l M icropro teom ics:ana ly sis o f prote in dive rs ity in sm all sam ples［J］.M ass Spectrom Rev，2008，27(4):316.

［5］Von Eggeling F，M e lleC，ErnstG.M icrodissecting thepro teom e［J］.Pro teom ics，2007，7(16):2729.