鈉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子1和表皮生長(zhǎng)因子受體2 mRNA在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性

齊慧生 張志勇 吳晨鵬 王 曄 劉麗云 崔永興 徐晉珩 胡月明

(唐山市工人醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 唐山 063000)

在我國(guó)，結(jié)直腸癌(CRC)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人體健康。鈉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子1(SGLT-1)作為一種轉(zhuǎn)運(yùn)載體主要是介導(dǎo)葡萄糖和半乳糖的吸收，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收為其生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)〔1〕。表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)在腫瘤發(fā)展的不同階段過(guò)程中發(fā)揮作用。本研究擬檢測(cè)CRC組織及正常黏膜組織中SGLT-1和HER-2 mRNA表達(dá)，研究其臨床特點(diǎn)的差異及在預(yù)后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集唐山市工人醫(yī)院2008年CRC患者的腫瘤組織35例作為腫瘤組，離體后立即置于液氮凍存，存于-80℃冰箱備用。其中男20例，女15例，年齡31～82〔平均(64.7±12.3)〕歲。病理類型：黏液癌10例，非黏液癌25例(本組納入病例無(wú)其他組織學(xué)類型)；分化程度：高分化2例，中分化25例，低分化6例，資料缺失2例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例(根據(jù)術(shù)后病理確定有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)。隨機(jī)選取10例正常組織作為對(duì)照組。兩組病例性別構(gòu)成、年齡等常規(guī)指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要試劑 Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green均購(gòu)自GeneCopoeia公司。SGLT-1引物：正義5′-GCTGTTCATCCCTGGTGCT-3′，反義5′-ACATCTGGAATGGGCTTG-3′，HER-2引物：正義5′- TGCTGTCCTGTTCACCACTC-3′，反義：5′-TCATCCTCATCATCTTCACATTG-3′，內(nèi)參β-Actin引物：正義5′-GTCTTCCCCTCCATCGTG-3′，反義5′-AGGGTGAGGATGCCTCTC-3′，均為賽百盛公司合成。

1.2.2組織總RNA提取 在20 mg新鮮組織(CRC組織)中加入1 ml Trizol混勻，按說(shuō)明書操作提取總RNA，并計(jì)算RNA OD260/OD280比值，要求在 1.8～2.2。

1.2.3cDNA合成及real-time PCR檢測(cè) 以提取的組織總RNA為模板，以O(shè)ligo(dT)15為引物，按試劑盒說(shuō)明書合成cDNA，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)總體系20 μl。反應(yīng)條件：25℃ 10 min,40℃ 60 min,70℃ 10 min。取合成的cDNA 2 μl為模板，進(jìn)行real-time PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件：94℃ 4 min,94℃ 20 s,60℃ 30 s,72℃ 30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。以上各步驟中，反應(yīng)體系及試劑用量均按說(shuō)明書進(jìn)行操作。SGLT-1和HER-2的相對(duì)表達(dá)量采用2-△Ct法計(jì)算。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，組間比較應(yīng)用Mann-Whitney檢驗(yàn)，采用spearman進(jìn)行相關(guān)性研究。

2 結(jié) 果

2.1SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC組與中的表達(dá) SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC組中相對(duì)比分別為0.0424±0.049和0.003 4±0.009 23，在正常組中分別為0.007 2±0.004和0.000 8±0.000 77，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003 3，0.032 7)。

2.2CRC中 SGLT-1 mRNA的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 CRC組中SGLT-1 mRNA在不同性別、年齡、組織類型、分化程度以及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移中的表達(dá)量差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3CRC中HER-2 mRNA的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 HER-2 mRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)量明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，而在不同性別、年齡、組織類型、分化程度中的表達(dá)量差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

2.4CRC中SGLT-1和HER-2 mRNA相關(guān)性分析 CRC組中SGLT-1和HER-2 mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.416，P=0.016)。見圖1。

表1 結(jié)直腸癌中的SGLT-1 mRNA、HER-2 mRNA的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

圖1 CRC中SGLT-1和 HER-2 mRNA 表達(dá)的關(guān)系

3 討 論

SGLT-1可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收為其生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，可能成為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)〔2〕。Hanabata〔2〕在口腔鱗狀細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)SGLT-1蛋白均過(guò)度表達(dá)，由此認(rèn)為SGLT-1通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，影響口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。Casneuf等〔3〕研究結(jié)果顯示SGLT-1表達(dá)情況同胰腺癌患者的無(wú)病生存期密切相關(guān)，其可作為評(píng)估胰腺癌患者預(yù)后的分子標(biāo)記。Guo等〔4〕表明SGLT-1在CRC組織中的表達(dá)明顯高于正常組織且同臨床分期密切相關(guān)。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，需要足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持其生長(zhǎng)，因此需要大量的SGLT-1接到葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，故SGLT-1 mRNA在腫瘤中的表達(dá)量明顯增高。本實(shí)驗(yàn)提示其在CRC的形成過(guò)程中起重要的促進(jìn)作用。

近年有文獻(xiàn)報(bào)道原癌基因HER-2在CRC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，在人類腫瘤發(fā)生中HER-2基因是改變頻率最高的原癌基因之一，被激活后促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生。HER-2基因的致癌機(jī)制為抑制凋亡、促進(jìn)存活、促進(jìn)腫瘤新生血管形成和增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力〔5〕。Cunninglmm等〔6〕發(fā)現(xiàn)HER-2的表達(dá)與年齡、性別和部位無(wú)關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。張建賓等〔7〕對(duì)CRC患者進(jìn)行生存分析，HER-2過(guò)表達(dá)與CRC的不良預(yù)后有關(guān)，且可作為預(yù)后的獨(dú)立因素。HER-2可作為評(píng)估CRC患者惡性程度及預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)提示二者在CRC的形成過(guò)程中起重要的促進(jìn)作用。不僅如此，本實(shí)驗(yàn)還表明HER-2蛋白的表達(dá)在腫瘤細(xì)胞侵襲性生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移中起一定的作用。HER-2蛋白的表達(dá)與CRC病理特點(diǎn)和生物學(xué)行為有密切聯(lián)系，與CRC侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)，故檢測(cè)HER-2 mRNA的表達(dá)，可作為CRC侵襲轉(zhuǎn)移能力的評(píng)估依據(jù)〔8〕。本研究同時(shí)提示SGLT-1和HER-2 mRNA可能存在某種聯(lián)系，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

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