HSD17B1和HSD17B2基因多態(tài)性與四川漢族人群肝癌的關(guān)聯(lián)性研究

劉 博，馬 偉，陳 博，甘 莉，劉冬梅，陳柯宇，張錄順

HSD17B1和HSD17B2基因多態(tài)性與四川漢族人群肝癌的關(guān)聯(lián)性研究

劉 博1，馬 偉1，陳 博2，甘 莉3，劉冬梅3，陳柯宇4，張錄順5

目的探討性激素17β-羥甾類固醇脫氫酶(HSD17B1和HSD17B2)基因單核苷酸多態(tài)性與四川地區(qū)漢族人群肝癌之間的關(guān)系，為肝癌的預(yù)防、篩查、治療及預(yù)后提供理論依據(jù)。方法以136例漢族肝癌患者，200例漢族健康人群為對(duì)象，選取HSD17B1rs676387、HSD17B2rs8191246兩個(gè)位點(diǎn)作為遺傳標(biāo)志，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)技術(shù)檢測HSD17B1和HSD17B2基因多態(tài)性及其分布頻率。結(jié)果與健康人群相比HSD17B1rs676387的T等位基因顯著增加肝癌患病風(fēng)險(xiǎn)(P<0.05)。結(jié)論HSD17B1rs676387與四川漢族HCC的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，該研究結(jié)果有待在多民族、多中心、大樣本研究中進(jìn)一步證實(shí)。

HSD17B1；HSD17B2；肝癌；單核苷酸多態(tài)性

17β-羥甾類固醇脫氫酶(17-beta dehydrogenase 1,HSD17B)屬于雌激素代謝酶，它參與調(diào)節(jié)組織中雄激素和雌激素水平。HSD17B1是NADPH依賴的還原酶，可將雌酮(E1)轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的17B-雌二醇(E2)。HSD17B1基因位于染色體17q12，其基因多態(tài)位點(diǎn)rs676387(G/T)與雌激素相關(guān)疾病，如乳腺癌、前列腺癌以及子宮肌瘤的相關(guān)[1-3]。HSD17B2是NADPH依賴的氧化酶，它能催化高活性的17B-羥類固醇與低活性酮類固醇之間的轉(zhuǎn)換。HSD17B2基因位于16號(hào)染色體長臂的24號(hào)1區(qū)位點(diǎn)的編碼區(qū)，存在一個(gè)同義突變位點(diǎn)rs8191246(A/G,Ter388Trp)。目前有研究發(fā)現(xiàn)HSD17B2rs8191246與子宮肌瘤和精子缺乏癥有關(guān)[3-4]。

基于前人的研究基礎(chǔ)，推測HSD17B1和HSD17B2基因多態(tài)性可能與肝癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但迄今為止，尚未查見相關(guān)研究報(bào)道。因此，本研究擬采用PCR-RFLP技術(shù)進(jìn)行基因分型，計(jì)算基因型頻率和等位基因頻率，探討HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因座多態(tài)性與四川漢族人群肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，為肝癌的篩查和治療提供理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1資料收集2008 年10月～2010年10月在四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院就診的肝癌患者136例(男112例，女24例，平均年齡50歲)，所有病例均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。收集病人性別、年齡、家庭肝癌史、乙肝表面抗原的狀態(tài)等臨床指標(biāo)。同期收集對(duì)照組200例(四川漢族，男166例，女34例，平均年齡50.3歲)，來自于四川大學(xué)華西醫(yī)院體檢中心健康人群。對(duì)照組人群排除具有個(gè)人或家族癌癥史或其他嚴(yán)重的疾病史，排除肝炎病毒感染史。本研究經(jīng)四川大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2DNA提取、擴(kuò)增及分型常規(guī)采集5 mL外周靜脈血，經(jīng)EDTA抗凝，使用全血基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA。PCR擴(kuò)增引物序列及擴(kuò)增條件參照文獻(xiàn)[3](詳見表1)，總擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切、聚丙酰胺凝膠電泳、硝酸銀銀染后進(jìn)行基因型分析。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，隨機(jī)選取擴(kuò)增樣本測序。

表1 HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246引物序列、退火溫度及內(nèi)切酶

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算基因型和等位基因頻率。正常對(duì)照組Hardy-Weinberg平衡分析，基因型和等位基因頻率分析均采用χ2檢驗(yàn)，結(jié)果用相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度比值比(Odds ratio,OR)及95%可信區(qū)間(Confidence interval,CI)表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)均使用SPASS 17.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)包括136例HCC患者和200例健康對(duì)照人群，兩組年齡和性別構(gòu)成無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。正常組基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，表明納入人群具有群體代表性。HSD17B1rs676387的T等位基因分布與正常對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(95%CI=1.47～2.85,P<0.001)，未發(fā)現(xiàn)HSD17B2rs8191246等位基因和基因型頻率分布與正常對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。遺傳模式分析結(jié)果如表3所示，HSD17B1rs676387 T等位基因攜帶者及TT基因型與HCC組顯著相關(guān)，HSD17B2rs8191246遺傳模式與正常對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

HSD17B1廣泛分布于人體的各個(gè)組織，包括激素分泌組織如胎盤、卵巢，還包括脂肪、皮膚、乳腺、子宮內(nèi)膜、肝臟等組織，以參與調(diào)節(jié)靶器官局部組織E2水平，調(diào)整雌激素對(duì)靶組織的作用。近年來，越來越多的研究關(guān)注于HSD17B1rs676387基因多態(tài)性與激素相關(guān)疾病的關(guān)聯(lián)性。Kraft等[1]對(duì)來自歐洲、拉丁美洲、美國的8 290例前列腺癌病人和9 367例正常人進(jìn)行對(duì)照研究，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387與前列腺癌存在相關(guān)性。Feigelson等[2]在5 370例乳腺癌和7 480例正常對(duì)照中，未發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387與乳腺癌的相關(guān)性。同樣，Gaudet等[5]通過對(duì)11 074例乳腺癌和13 605例正常對(duì)照進(jìn)行meta分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387與乳腺癌的相關(guān)性。在子宮肌瘤患者中，Cong等[3]未發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387與四川漢族婦女子宮肌瘤病存在相關(guān)性。然而，Lamp等[6]通過150例子宮內(nèi)膜異位癥病人和199例正常生育婦女的研究發(fā)現(xiàn)，HSD17B1rs676387基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥患者的生育狀況有關(guān)。另外，Dumas等[7]通過回顧性研究發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387多態(tài)性顯著增加乳腺密度；由于乳腺密度與乳腺癌密切相關(guān)，因此，HSD17B1rs676387也被認(rèn)為與乳腺癌的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)性。近期研究表明，HSD17B1rs676387基因多態(tài)性與唐氏綜合癥婦女早期阿爾茲海默病發(fā)生有關(guān)[8]。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HSD17B1rs676387 T等位基因及TT基因型增加肝癌發(fā)病易感性，該結(jié)果提示HSD17B1rs676387參與了四川漢族人群肝癌的發(fā)病過程。

HSD17B2是雌二醇的失活轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に赝闹饕蛩亍SD17B2同工酶可抑制肝臟，胎盤和子宮內(nèi)膜中的性類固醇激素。Elo等[9]對(duì)50例前列腺癌病人的研究發(fā)現(xiàn)，HSD17B2基因座區(qū)域缺失與前列腺癌患者的生育狀況有關(guān)。Su等[4]在180例生精缺陷和120例正常男性對(duì)照的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，HSD17B2rs8191246等位基因及基因型基因多態(tài)性與臺(tái)灣男性生精缺陷有關(guān)。然而，在子宮肌瘤患者中，Cong等[3]未發(fā)現(xiàn)HSD17B2rs8191246與四川漢族婦女子宮肌瘤病的關(guān)聯(lián)性。本次針對(duì)四川漢族人群肝癌的研究，也未發(fā)現(xiàn)HSD17B2rs8191246等位基因及基因型與肝癌發(fā)展的關(guān)聯(lián)性。然而，考慮到納入樣本數(shù)量的局限性，該結(jié)果尚需在大樣本中進(jìn)一步證實(shí)。

總之，本研究首次探討了HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因多態(tài)性與四川漢族人群肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSD17B1rs676387等位基因及基因型可增加肝癌的易感性，提示HSD17B1參與了肝癌的發(fā)生進(jìn)程。該結(jié)論有待在多民族、多中心、大樣本研究中進(jìn)一步證實(shí)。

表2 HCC和正常對(duì)照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246堿基分布

表3 HCC和正常對(duì)照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246基因型及遺傳模式分布

[1]Kraft P,Pharoah P,Chanock SJ,et al.Genetic variation in the HSD17B1 gene and risk of prostate cancer[J].PLoS Genet,2005,1(5):68.

[2]Feigelson HS,Cox DG,Cann HM,et al.Haplotype analysis of the HSD17B1 gene and risk of breast cancer:a comprehensive approach to multicenter analyses of prospective cohort studies[J].Cancer Res,2006,66(4): 2468-2475.

[3]Cong RJ,Huang ZY,Cong L,et al.Polymorphisms in genes HSD17B1 and HSD17B2 and uterine leiomyoma risk in Chinese women[J].Arch Gynecol Obstet,2012,286(3):701-705.

[4]Su MT,Chen CH,Kuo PH,et al.Polymorphisms of estrogen-related genes jointly confer susceptibility to human spermatogenic defect[J].Fertil Steril,2010,93(1): 141-149.

[5]Gaudet MM,Chanock S,Dunning A,et al.HSD17B1 genetic variants and hormone receptor-defined breast cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2008,17(10):2766-2772.

[6]Lamp M,Peters M,Reinmaa E,et al.Polymorphisms in ESR1,ESR2 and HSD17B1 genes are associated with fertility status in endometriosis[J].Gynecol Endocrinol,2011,27(6):425-433.

[7]Dumas I,Diorio C.Estrogen pathway polymorphisms and ma-mmographic density[J].Anticancer Res,2011,31(12): 4369-4386.

[8]Lee JH,Gurney S,Pang D,et al.Polymorphisms in HSD17B1:early onset and increased risk of Alzheimer′s disease in women with down syndrome[J].Curr Gerontol Geriatr Res,2012,2012:361218.

[9]Elo JP,Harkonen P,Kyllonen AP,et al.Loss of heterozygosity at 16q24.1-q24.2 is significantly associated with metastatic and aggressive behavior of prostate cancer[J].Cancer Res,1997,57(16):3356-3359.

AssociationofHSD17B1andHSD17B2GenePolymorphismswithHepatocellularCarcinomainSichuanHanPopulation

LIU Bo,MA Wei,CHEN Bo,et al

(School of Medical Laboratory Science,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China)

ObjectiveTo investigate the association between the sex hormone 17β- hydroxysteroid dehydrogenase (HSD17B1 and HSD17B2) gene single nucleotide polymorphisms in Sichuan Han population with HCC (Hepatocellular carcinoma).Methods136 cases of HCC and 200 healthy control subjects were enrolled in present study.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) methods were chosen to genotype theHSD17B1rs676387 andHSD17B2rs8191246 single nucleotide polymorphisms.ResultsThere was statistically significant difference between HCC patientsHSD17B1rs676387 and normal control groups (P<0.05).ConclusionHSD17B1rs676387 polymorphisms increased the susceptibility of HCC in the Sichuan Han population.Those findings should be further confirmed in a large sample of multi-ethnic multi-center study.

HSD17B1；HSD17B2；HCC；single nucleotide polymorphisms

成都醫(yī)學(xué)院“大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃”基金資助項(xiàng)目(CXJS201302)

2014-07-28

1.成都醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，四川成都 610500 2.成都醫(yī)學(xué)院康復(fù)治療系，四川成都 610500 3.中國人民解放軍成都軍區(qū)總醫(yī)院，四川成都 610083 4.成都醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)系，四川成都 610500 5.成都醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，四川成都 610500

劉博(1992-)，男，四川廣元人，從事檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作。

張錄順，男，博士，E-mail：zhangls2012@163.com

R735.7

A

1672-688X(2014)03-0164-03