不同劑量復(fù)方青黛顆粒對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠血清IL-6、IL-10水平的影響

劉 偉, 劉 剛, 冷駿峰

(1.湖北省直屬機(jī)關(guān)醫(yī)院 藥劑科, 湖北 武漢, 430071; 2.湖北省人民醫(yī)院 藥劑科, 湖北 武漢, 430060;3.邁德高武漢生物醫(yī)學(xué)信息科技有限公司, 湖北 武漢, 430075)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種直腸、結(jié)腸黏膜的慢性非特異性炎癥性疾病，以腹痛、腹瀉、黏液膿血便等為主要臨床表現(xiàn)，常反復(fù)發(fā)作，遷延不愈。目前，促炎性細(xì)胞因子與抗炎性細(xì)胞因子之間的失衡狀態(tài)被視為UC發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)[1-2]。復(fù)方青黛顆粒是中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科研發(fā)的治療UC的有效驗(yàn)方，臨床應(yīng)用中獲得了良好療效。本研究通過對UC模型大鼠給予不同劑量的復(fù)方青黛顆粒灌胃給藥，觀察其對大鼠血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)等細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年SD大鼠70只，平均體質(zhì)量(251.37±48.25) g, 購于湖北省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 主要試劑與儀器：大鼠IL-6、IL-10酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒(批號(hào)：SM200911，上?；顦飞锟萍加邢薰?、P-selection兔抗大鼠多克隆抗體(批號(hào)：BA0617，武漢博士德生物工程有限公司)、濃縮型二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色試劑盒(批號(hào)：ZLI-9032，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、免疫組化SP試劑盒(批號(hào)：1386323，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、復(fù)方青黛顆粒由中國醫(yī)科大學(xué)提供，柳氮磺胺吡啶(SASP)片(國藥準(zhǔn)字H31020450, 上海三維制藥有限公司)。

1.2 分組及模型制備

將70只大鼠隨機(jī)分為6組：空白對照組、模型對照組、SASP組、低劑量組、中劑量組及高劑量組。除空白對照組10只外，其余60只大鼠采用三硝基苯磺酸(TNBS)法制備UC模型[3]，造模完成第2天隨機(jī)取大鼠5只，處死后取結(jié)腸，以生理鹽水清洗后，觀察結(jié)腸潰瘍發(fā)生情況以確定造模成功。

1.3 給藥方法

造模后第3天起給藥：SASP組給予SASP 500 mg/kg、低、中、高劑量組分別給予復(fù)方青黛顆粒300 mg/kg、600 mg/kg及1 200 mg/kg?？瞻讓φ占澳Ｐ蛯φ战M分別給予等量生理鹽水灌胃。各組均連續(xù)給藥10 d。

1.4 指標(biāo)測定

末次給藥后24 h, 于大鼠眼眶采血，離心后取血清，采用酶聯(lián)免疫ELISA法測定血清IL-6、IL-10水平，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。隨后處死大鼠，取全段結(jié)腸，觀察充血點(diǎn)、潰瘍點(diǎn)及黏膜損害深度，測定結(jié)腸組織病理學(xué)評分[3]。

2 結(jié) 果

2.1 各組給藥后結(jié)腸組織病理學(xué)評分比較

各組給藥10 d后，空白對照組、模型對照組、SASP組、低、中、高劑量組的結(jié)腸組織病理學(xué)評分分別為: 0.42±0.32、4.32±0.85、3.27±1.13、3.47±0.44、3.06±0.38、2.29±0.51。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，空白對照組評分顯著低于其他各組(P<0.01), 模型對照組評分顯著高于其他各組(P<0.05或P<0.01), SASP組與低、中劑量組之間無顯著差異(P>0.05), SASP組與高劑量組之間均有顯著差異(P<0.01), 中劑量與低劑量及高劑量之間均有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。見圖1。

2.2 各組給藥后血清IL-6及IL-10水平

方差分析表明，空白對照組血清IL-6、IL-10水平與其他各組均有顯著差異(P<0.01), 各給藥組血清IL-6水平均較模型對照組降低，其中SASP組及高劑量組顯著低于空白對照組以外的其他3組(P<0.05或P<0.01), SASP組與高劑量組之間無顯著差異(P>0.05)。各給藥組血清IL-10水平均較模型對照組有不同程度升高，其中高劑量組IL-10水平最高，且與其他各組差異顯著(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 各組給藥后血清IL-6及IL-10水平±s) pg/mL

3 討 論

UC的病因及發(fā)病機(jī)制目前尚未得到清晰闡明，目前認(rèn)為免疫系統(tǒng)異常是結(jié)腸黏膜炎癥及組織損傷的內(nèi)在因素，尤其是機(jī)體抗炎性細(xì)胞因子與促炎性細(xì)胞因子之間的失衡是其發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)[4-7]。白細(xì)胞介素(IL)是一組具有多種生物活性的淋巴因子，在免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化、免疫應(yīng)答及某些細(xì)胞的激活過程中發(fā)揮重要作用。其中IL-6屬于促炎性細(xì)胞因子，參與機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)，與其他細(xì)胞因子共同作用，通過誘導(dǎo)T細(xì)胞活性而參與UC的發(fā)病與反復(fù)發(fā)作。多項(xiàng)研究表明，UC患者血清IL-6濃度顯著升高，且與患者病變嚴(yán)重程度和病變范圍成正相關(guān)[8-10]。IL-10主要由單核細(xì)胞、Th2細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化的B細(xì)胞產(chǎn)生，屬于抗炎與免疫抑制性細(xì)胞因子。研究表明UC患者體內(nèi)IL-10合成減少，小鼠敲除IL-10基因后可出現(xiàn)自發(fā)性結(jié)腸炎[11]，提示IL-10在維持正常腸道黏膜的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。因此本研究通過觀察UC模型大鼠血清IL-6、IL-10表達(dá)水平的變化來反映其免疫系統(tǒng)變化，結(jié)果表明，UC模型大鼠血清IL-6水平顯著高于正常大鼠, IL-10表達(dá)水平顯著低于正常大鼠(P<0.05)，與上述報(bào)道一致。

UC屬祖國醫(yī)學(xué)“泄瀉”、“腸風(fēng)”、“久痢”、“休息痢”等范疇，多因外感暑濕熱毒等邪氣侵入大腸；或脾虛失運(yùn)，水濕下注大腸；或脾虛肝旺、肝氣乘脾，肝脾不和；或泄瀉日久、脾腎陽虛，關(guān)門不固所致。復(fù)方青黛顆粒由青黛、黃柏、枯礬、兒茶、珍珠等組成，其中青黛為君藥，長于清熱解毒涼血，尤擅清腸胃邪熱；黃柏為臣藥，可清熱燥濕；枯礬、兒茶、珍珠等可收斂生肌，增加止瀉功效。杜立陽等[12-13]一系列研究表明，復(fù)方青黛顆粒能減輕UC模型大鼠的癥狀，降低充血指數(shù)、血清淀粉酶和乳酸脫氫酶，并具有抑制腸蠕動(dòng)、鎮(zhèn)痛抗炎的作用。馮春霞等[14]采用中藥理腸湯口服及潰瘍靈灌腸治療UC患者，結(jié)果表明療效顯著，患者癥狀顯著改善，并可抑制腸黏膜中IL-6的表達(dá)，提高IL-10的表達(dá)。本研究結(jié)果表明，復(fù)方青黛顆粒可有效改善UC模型大鼠的癥狀，并改善其血清IL-6及IL-10的表達(dá)，但低、中劑量給藥時(shí)療效并不優(yōu)于SASP組，僅高劑量給藥時(shí)大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)評分顯著低于SASP組(P<0.01), 且對IL-10表達(dá)水平的提高作用顯著優(yōu)于SASP組(P<0.05)。

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