糞便輪狀病毒檢測(cè)及臨床意義

張 敏

(江蘇省揚(yáng)州市第一人民醫(yī)院, 江蘇 揚(yáng)州, 225001)

腹瀉病是對(duì)小兒健康威脅較大的常見多發(fā)病，輪狀病毒(RV)引起的嬰幼兒腹瀉現(xiàn)已成為世界范圍內(nèi)兒童急性腹瀉病最重要的病原之一，幾乎所有兒童在5歲以前都曾感染過[1]。本文對(duì)2013年9月—2014年3月來院就診的門診腹瀉患兒糞便標(biāo)本輪狀病毒檢查結(jié)果進(jìn)行觀察分析，探討輪狀病毒腹瀉的性質(zhì)和引起腹瀉的原因及流行病學(xué)狀況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年9月—2014年3月來本院就診的門診腹瀉患兒糞便標(biāo)本437例，年齡0～14歲，分為0～6個(gè)月階段，6個(gè)月～2歲階段，2歲～14歲階段，均為初診患兒，取材前未使用任何抗菌藥物。

1.2 試劑與儀器

日本Olympus顯微鏡。艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司的輪狀病毒抗原檢測(cè)試劑盒(乳膠法)，檢測(cè)原理采用雙抗體夾心法及免疫層析技術(shù)，試劑含有被預(yù)先固定于膜上檢測(cè)區(qū)(T)的輪狀病毒抗體和包被在聚酯膜上的輪狀病毒抗體乳膠混合物。陽性時(shí)，樣本中的輪狀病毒抗原和乳膠顆粒包被的輪狀病毒抗體結(jié)合形成Ag-Ab-乳膠復(fù)合物，在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析，到達(dá)檢測(cè)區(qū)(T)與事先包被的輪狀病毒抗體反應(yīng)，出現(xiàn)一條紅色的條帶。

1.3 研究方法

留取患兒糞便進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)和輪狀病毒檢測(cè)。糞便常規(guī)檢測(cè)嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行[2]，觀察糞便顏色和性狀后，挑取異常部分用生理鹽水適當(dāng)稀釋，滴加到載玻片上，顯微鏡下觀察10個(gè)低倍和高倍視野；輪狀病毒檢測(cè)，水樣便和蛋花湯樣便用一次性塑料吸管吸取50 μL、糊狀便挑取50 mg至裝有稀釋緩沖液的塑料小瓶，充分搖勻，折斷蓋帽，棄去前2滴，將測(cè)試卡平放，垂直滴加2滴(約80 μL)與加樣孔(S)，10～20 min內(nèi)判斷結(jié)果。

測(cè)試卡出現(xiàn)兩條紅色條帶，一條位于質(zhì)控區(qū)(C)，一條位于檢測(cè)區(qū)(T)內(nèi)為陽性，表明樣本中含有輪狀病毒；只出現(xiàn)紅色質(zhì)控線為陰性，表明樣本中未檢測(cè)出輪狀病毒；測(cè)試卡不出現(xiàn)紅色質(zhì)控線為無效，應(yīng)重新檢測(cè)。

2 結(jié) 果

對(duì)437例糞便標(biāo)本進(jìn)行輪狀病毒檢測(cè)，陽性184例，檢出率42.1%。將0～6個(gè)月嬰兒階段、6個(gè)月～2歲嬰幼兒階段、2歲～14歲幼兒階段進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，可以認(rèn)為6個(gè)月～2歲嬰幼兒階段為輪狀病毒感染的高發(fā)年齡段。見表1。

表1 不同年齡階段輪狀病毒檢出率

輪狀病毒陽性檢出率以11、12、1月份最高，分布構(gòu)成比分別為22.3%、31.5%、21.2%，且陽性標(biāo)本的糞便性狀多為蛋花樣和稀水樣，鏡檢脂肪球陽性率最高達(dá)99%。本組資料陽性率高于其他文獻(xiàn)報(bào)道[3]，可能與所收集的標(biāo)本均為未經(jīng)任何治療的門診患兒，且臨床醫(yī)生要求糞便輪狀病毒檢測(cè)有關(guān)。見表2。

表2 不同月份輪狀病毒檢出率及其鏡檢結(jié)果

3 討 論

輪狀病毒(RV)屬呼腸病毒科輪狀病毒屬，最早由澳大利亞學(xué)者Bishop于1973年在電鏡下觀察急性腹瀉兒童腸上皮細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，因形似車輪而得名[4]。完整的病毒顆粒呈圓球形，由衣殼蛋白包繞基因組核心構(gòu)成，基因組由11個(gè)不連續(xù)的dsRNA節(jié)段組成，分別編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP4，VP6、VP7)和5個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-NSP5)，根據(jù)VP6的抗原性，將其分為A-G 7個(gè)組。其中，A組輪狀病毒是秋冬季嬰幼兒腹瀉的最重要病原，俗稱“秋季腹瀉”。在發(fā)展中國(guó)家，每年約有87萬兒童死于輪狀病毒感染；B組輪狀病毒由中國(guó)洪濤等人發(fā)現(xiàn)，主要感染青壯年，70年代在中國(guó)曾造成大規(guī)模爆發(fā)性腹瀉流行[5]; C組輪狀病毒主要感染青少年，引起散發(fā)病例。

輪狀病毒呈世界范圍分布，腹瀉患者與無癥狀帶毒者是其主要的傳染源。主要通過糞-口途徑傳播，還可通過呼吸道傳播。患者急性期糞便中含有大量病毒顆粒，病后可持續(xù)排毒4～8 d。輪狀病毒引起的腹瀉有明顯的季節(jié)性，在全球以寒冷季節(jié)為高發(fā)，中國(guó)多發(fā)生于秋冬季，但高峰季節(jié)在不同地區(qū)存在差異。本研究結(jié)果顯示，揚(yáng)州地區(qū)輪狀病毒的發(fā)病高峰始于11月至次年1月中旬，高峰期最高檢出率達(dá)78.3%。

本研究中年齡最小者27 d，最大14歲，將437例腹瀉患兒分成3個(gè)年齡段，由表1可知輪狀病毒陽性檢出率最高為6個(gè)月～2歲段，高達(dá)66.7%，與有關(guān)報(bào)道基本相符[6]。不同年齡段輪狀病毒感染發(fā)病率不同，可能與機(jī)體內(nèi)輪狀病毒特異性抗體消長(zhǎng)有關(guān)。6個(gè)月以內(nèi)的嬰兒多為母乳喂養(yǎng)，可通過乳汁獲得分泌型IgA、非免疫球蛋白性病毒抑制劑、胰蛋白酶抑制劑，以及通過胎盤從母體帶來的特異性抗體，使得嬰兒不易感染或感染后無癥狀或癥狀很輕[7]。而6個(gè)月～2歲嬰幼兒體內(nèi)來自母體的獲得性抗體自6個(gè)月后逐漸消失，而且這個(gè)時(shí)期開始減少或完全停止母乳喂養(yǎng)，嬰幼兒自身免疫系統(tǒng)尚未健全，加上與外界接觸日益廣泛，又缺乏聽從指導(dǎo)意識(shí)，于是形成輪狀病毒感染高發(fā)期，且最嚴(yán)重的癥狀都會(huì)出現(xiàn)在這個(gè)年齡階段。2歲以上小兒隨著機(jī)體免疫系統(tǒng)的日益成熟，曾經(jīng)有過感染史的兒童體內(nèi)還產(chǎn)生了抗體，對(duì)一部分再次接觸者有一定的保護(hù)作用，故感染率有所下降。

輪狀病毒侵入機(jī)體后，會(huì)在小腸絨毛頂端的柱狀上皮細(xì)胞上復(fù)制，造成細(xì)胞的空泡變性和壞死，小腸微絨毛腫脹、排列紊亂、不規(guī)則縮短，致使小腸黏膜回吸收水分和電解質(zhì)的能力受損，腸液在腸腔內(nèi)大量積聚而引起水樣腹瀉[8]，同時(shí)發(fā)生病變的腸黏膜細(xì)胞分泌雙糖酶(特別是乳糖酶)不足，且活性降低，造成脂肪消化不良，導(dǎo)致糞便中脂肪球增多。因病毒未直接侵襲腸壁造成腸壁局部炎癥的發(fā)生，無黏液膿血便。本研究結(jié)果顯示，在輪狀病毒發(fā)病高峰季節(jié)，陽性糞便標(biāo)本的性狀幾乎都是稀水樣和蛋花樣，鏡檢脂肪球陽性率最高達(dá)99%。因此，糞便標(biāo)本的性狀與輪狀病毒陽性率有明顯的關(guān)系，在高發(fā)季節(jié)，對(duì)稀水樣或蛋花樣便，鏡檢見脂肪球，無或偶見白細(xì)胞的糞便標(biāo)本還要檢測(cè)輪狀病毒，以明確診斷，指導(dǎo)臨床用藥，有效地避免抗生素的濫用。

目前輪狀病毒引起的嬰幼兒腹瀉無特效藥物，主要采取對(duì)癥治療，衛(wèi)生條件及營(yíng)養(yǎng)狀況的改善并不能減少其發(fā)病率，因此預(yù)防顯得極為重要。特別是2歲以下的嬰幼兒，應(yīng)鼓勵(lì)母乳喂養(yǎng)，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，切斷糞-口傳播途徑，臨床醫(yī)生應(yīng)重視輪狀病毒的檢測(cè)，早期發(fā)現(xiàn)和隔離患者，避免交叉感染。

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