正交試驗(yàn)篩選平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基

劉西周　郭成金

摘要：采用正交試驗(yàn)對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干質(zhì)量）可達(dá)13.52 g/L。

關(guān)鍵詞：平田頭菇；液體培養(yǎng)基；菌絲體；生物量；正交分析

中圖分類號： S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者簡介：劉西周（1984—），男， 甘肅隴南人，碩士，助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

通信作者：郭成金，教授，研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營養(yǎng)生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]屬糞傘科（Bolbitiaceae）田蘑屬（Agrocybe），因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值，受到越來越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域，但近些年由于濕地面積不斷萎縮，環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對平田頭菇的研究鮮見報(bào)道，未見其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選，旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開發(fā)提供支持。

1材料與方法

1.1供試菌種

平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地，菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L瓊脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L維生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基：分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）為供試碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1，pH值自然，配制碳源初選培養(yǎng)基，分裝于100 mL錐形瓶中，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用。

1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基：分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩（浸提液）、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分裝于100 mL錐形瓶，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用[4]。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端，接于平板培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng) 4～5 d 備用。

從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊，接種于對應(yīng)的液體培養(yǎng)基，每瓶3塊，28 ℃靜置2 d，搖瓶 5 min/d。

將濾紙編號、稱重，恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾，于80 ℃烘干至恒重并稱重，2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量（干質(zhì)量）。

1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果，從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源，按L9（34）設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選，與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方，正交因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

3結(jié)論

研究表明，平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干重）可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]戴玉成，楊祝良. 中國藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2008，27（6）：801-824.

[2]周會(huì)明，柴紅梅，趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，2005：159.

[4]劉西周，郭成金.采 用L9（34）正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢來君，李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京：科學(xué)出版社，1997：263-265.

[7]王振河，萬學(xué)東，武忠偉，等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J]. 中國野生植物資源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王戰(zhàn)勇，張建東，李瑩，等. 北蟲草液體培養(yǎng)基的研究[J]. 遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陳文強(qiáng)，鄧百萬，陳永剛，等. 用L9（34）正交試驗(yàn)篩選裂褶菌液體培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2005，24（4）：38-41.endprint

摘要：采用正交試驗(yàn)對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干質(zhì)量）可達(dá)13.52 g/L。

關(guān)鍵詞：平田頭菇；液體培養(yǎng)基；菌絲體；生物量；正交分析

中圖分類號： S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者簡介：劉西周（1984—），男， 甘肅隴南人，碩士，助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

通信作者：郭成金，教授，研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營養(yǎng)生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]屬糞傘科（Bolbitiaceae）田蘑屬（Agrocybe），因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值，受到越來越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域，但近些年由于濕地面積不斷萎縮，環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對平田頭菇的研究鮮見報(bào)道，未見其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選，旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開發(fā)提供支持。

1材料與方法

1.1供試菌種

平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地，菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L瓊脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L維生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基：分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）為供試碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1，pH值自然，配制碳源初選培養(yǎng)基，分裝于100 mL錐形瓶中，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用。

1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基：分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩（浸提液）、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分裝于100 mL錐形瓶，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用[4]。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端，接于平板培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng) 4～5 d 備用。

從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊，接種于對應(yīng)的液體培養(yǎng)基，每瓶3塊，28 ℃靜置2 d，搖瓶 5 min/d。

將濾紙編號、稱重，恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾，于80 ℃烘干至恒重并稱重，2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量（干質(zhì)量）。

1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果，從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源，按L9（34）設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選，與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方，正交因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

3結(jié)論

研究表明，平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干重）可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]戴玉成，楊祝良. 中國藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2008，27（6）：801-824.

[2]周會(huì)明，柴紅梅，趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，2005：159.

[4]劉西周，郭成金.采 用L9（34）正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢來君，李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京：科學(xué)出版社，1997：263-265.

[7]王振河，萬學(xué)東，武忠偉，等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J]. 中國野生植物資源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王戰(zhàn)勇，張建東，李瑩，等. 北蟲草液體培養(yǎng)基的研究[J]. 遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陳文強(qiáng)，鄧百萬，陳永剛，等. 用L9（34）正交試驗(yàn)篩選裂褶菌液體培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2005，24（4）：38-41.endprint

摘要：采用正交試驗(yàn)對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干質(zhì)量）可達(dá)13.52 g/L。

關(guān)鍵詞：平田頭菇；液體培養(yǎng)基；菌絲體；生物量；正交分析

中圖分類號： S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者簡介：劉西周（1984—），男， 甘肅隴南人，碩士，助理實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

通信作者：郭成金，教授，研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營養(yǎng)生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]屬糞傘科（Bolbitiaceae）田蘑屬（Agrocybe），因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值，受到越來越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域，但近些年由于濕地面積不斷萎縮，環(huán)境受到嚴(yán)重破壞，野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對平田頭菇的研究鮮見報(bào)道，未見其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選，旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開發(fā)提供支持。

1材料與方法

1.1供試菌種

平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地，菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L瓊脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L維生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基：分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）為供試碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1，pH值自然，配制碳源初選培養(yǎng)基，分裝于100 mL錐形瓶中，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用。

1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基：分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩（浸提液）、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分裝于100 mL錐形瓶，每瓶50 mL，每個(gè)處理3次重復(fù)，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用[4]。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端，接于平板培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng) 4～5 d 備用。

從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊，接種于對應(yīng)的液體培養(yǎng)基，每瓶3塊，28 ℃靜置2 d，搖瓶 5 min/d。

將濾紙編號、稱重，恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾，于80 ℃烘干至恒重并稱重，2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量（干質(zhì)量）。

1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果，從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源，按L9（34）設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選，與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方，正交因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

3結(jié)論

研究表明，平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干重）可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]戴玉成，楊祝良. 中國藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2008，27（6）：801-824.

[2]周會(huì)明，柴紅梅，趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，2005：159.

[4]劉西周，郭成金.采 用L9（34）正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢來君，李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京：科學(xué)出版社，1997：263-265.

[7]王振河，萬學(xué)東，武忠偉，等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J]. 中國野生植物資源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王戰(zhàn)勇，張建東，李瑩，等. 北蟲草液體培養(yǎng)基的研究[J]. 遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陳文強(qiáng)，鄧百萬，陳永剛，等. 用L9（34）正交試驗(yàn)篩選裂褶菌液體培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2005，24（4）：38-41.endprint