骨刺膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝海萍++++劉柳毅

[摘要] 目的 建立和提高骨刺膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用顯微鑒別法對骨刺膠囊中的杜仲、牛膝、熟地和續(xù)斷進(jìn)行鑒別；采用薄層色譜法（TLC）對骨刺膠囊中的獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸藥材進(jìn)行定性鑒別。 結(jié)果 顯微特征明顯；建立了獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸藥材的薄層鑒別法，TLC斑點清晰，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾。 結(jié)論 顯微鑒別方法操作簡便、準(zhǔn)確可靠，耗費少；TLC方法簡便可行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為骨刺膠囊的質(zhì)量控制方法。

[關(guān)鍵詞] 骨刺膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；獨活；續(xù)斷；牛膝；當(dāng)歸

[中圖分類號] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）07（a）-0009-04

骨刺膠囊是由當(dāng)歸、鹿角膠、龜甲膠、杜仲、懷牛膝、熟地、威靈仙、獨活、狗脊、續(xù)斷等10味中藥組成，具有補(bǔ)腎、益精健骨，祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)等功效，臨床上主要用于腰及腰部以下部位骨質(zhì)增生、腰間盤突出癥[1-5]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，收載了杜仲和續(xù)斷的顯微鑒別和杜仲、鹿角膠的理化鑒別和狗脊的薄層鑒別，且原標(biāo)準(zhǔn)的薄層鑒別方法均存在陰性干擾和重現(xiàn)性差等問題，故不可作為本產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。為了能更加有效地控制骨刺膠囊的質(zhì)量，筆者對本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，刪去了原標(biāo)準(zhǔn)中鹿角膠的理化鑒別項和狗脊的薄層色譜鑒別項，對杜仲和續(xù)斷的顯微特征進(jìn)行了補(bǔ)充和完善，并增加了牛膝和熟地的顯微鑒別項和獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸的薄層色譜鑒別項。結(jié)果表明，建立的方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，為該制劑建立可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1儀器

WFH-203B三用紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公司）；奧林巴斯顯微鏡；KQ3200B型超聲波清洗器（常熟市雙杰測試儀器廠）；JJ300型電子天平（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

獨活對照藥材（120940-201111）、續(xù)斷對照藥材（121033-201110 ）、牛膝對照藥材（121066-201106）、當(dāng)歸對照藥材（120917-201014）均購自中國藥品生物制品檢定所；骨刺膠囊（規(guī)格：0.4 g/粒，批號：20130601、20130602、20130603）。薄層層析用硅膠G（青島海洋化工有限公司）；薄層層析用硅膠GF254 （青島海洋化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

取本品置顯微鏡下觀察：可見膠絲，多散離，呈灰色（圖1a-1）；石細(xì)胞成群或單個，類圓形、長圓形、類三角形，紋孔明顯[6]（圖1a-2，杜仲）。薄壁細(xì)胞內(nèi)有大量草酸鈣砂晶，使細(xì)胞界限不清晰[6]（圖1b，牛膝）。另一種薄壁組織的細(xì)胞皺縮，內(nèi)含棕色物質(zhì)[6]（圖1c，熟地）。第三種薄壁細(xì)胞呈紡錘形，表面具有斜向交錯的細(xì)紋理（圖1d）；皺縮的薄壁細(xì)胞中具有成行排列的草酸鈣簇晶[6]（圖1e，續(xù)斷）。

圖1 骨刺膠囊粉末圖（標(biāo)尺為50 μm）

a.杜仲的顯微鑒別特征（1.膠絲；2.石細(xì)胞）；b.牛膝的薄壁細(xì)胞顯微鑒別特征；c.熟地的薄壁組織顯微鑒別特征；d.熟地呈紡錘形的薄壁細(xì)胞顯微鑒別特征；e.續(xù)斷的薄壁細(xì)胞顯微鑒別特征

2.2 薄層鑒別

2.2.1 獨活的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇10 ml，超聲處理15 min，靜置，取上清液作為供試品溶液[6]。另取獨活對照藥材0.52 g，同法制成對照藥材溶液。另取除去獨活按處方和工藝制得的陰性對照樣品4.48 g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗（《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B），吸取上述3種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（7∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液相同位置無干擾。結(jié)果見圖2。

2.2.2 續(xù)斷的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物5 g，加水100 ml，加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至10 ml，加在D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為10 cm）上，用水100 ml洗脫，棄去洗脫液，再用30%乙醇100 ml洗脫，棄去洗脫液，再用50%乙醇100 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇溶液200 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液[7-9]。另取續(xù)斷對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。另取除去續(xù)斷按處方和工藝制得的陰性對照樣品4.5 g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點。陰性對照溶液無此斑點。結(jié)果見圖3。

圖3 續(xù)斷薄層圖譜（日光下）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.續(xù)斷對照藥材；5.缺續(xù)斷陰性對照

2.2.3 牛膝的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物16.7 g，加70%乙醇120 ml，加熱回流3 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 ml使溶解，用三氯甲烷20 ml振搖提取，棄去三氯甲烷液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水20 ml洗滌，棄去水洗滌液，正丁醇液經(jīng)適當(dāng)濃縮后，加入1 g中性氧化鋁拌勻，揮盡溶劑，置中性氧化鋁柱（100～200目，4 g，內(nèi)徑為10～15 mm，干法裝柱）上，用乙酸乙酯-乙醇（4∶1）的混合溶液40 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用40 ml無水乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液[10-13]。另取牛膝對照藥材2 g，加70%乙醇50 ml，同法制成對照藥材溶液。另取除去牛膝按處方和工藝制得的陰性對照樣品14.7 g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗（《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B），吸取上述3種溶液各15 μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照溶液相同位置無干擾。結(jié)果見圖4。

圖4 牛膝薄層色譜（紫外254 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.牛膝對照藥材；5.缺牛膝陰性對照

2.2.4 當(dāng)歸的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超聲處理30 min，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚層，揮干乙醚，用甲醇1 ml溶解作為供試溶液[6，14-16]。另取當(dāng)歸對照藥材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得對照藥材溶液。另取除去當(dāng)歸按處方和工藝制得的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，至紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果見圖5。

圖5 當(dāng)歸薄層色譜圖（紫外 365 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.當(dāng)歸對照藥材；5.缺當(dāng)歸陰性對照

3 討論

3.1 顯微鑒別

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只收載了杜仲和續(xù)斷的顯微鑒別，為了能更加有效地控制骨刺膠囊的質(zhì)量，對杜仲和續(xù)斷的顯微特征進(jìn)行了補(bǔ)充和完善，并增加了牛膝和熟地的顯微鑒別項。

3.2 獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸的薄層鑒別

本鑒別項均為增加項。在對方中全部藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別后，制訂了重現(xiàn)性較好且無陰性干擾的獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸為薄層色譜鑒別內(nèi)容，列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對其他藥材杜仲、熟地和威靈仙等都進(jìn)行了薄層方案考察，但均因本品藥味多，成分復(fù)雜，互相干擾嚴(yán)重，而未能得到滿意結(jié)果，故其薄層色譜鑒別內(nèi)容不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 黃傳俊，胡麗婭，楊茂文.骨刺膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥， 2006，17（6）：1013.

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[14] 陳巖，謝培山，顏玉貞.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集[M].廣州：廣東科技出版社，1993：110.

[15] 郭亮，郭劍華，馬善治，等.膝舒膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].實用中醫(yī)藥雜志，2012，28（12）：1070.

[16] 鄧小玉，殷嬋玉，趙吉平.少林風(fēng)濕跌打膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2012，34（2）：73.

（收稿日期：2014-04-16 本文編輯：許俊琴）

圖4 牛膝薄層色譜（紫外254 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.牛膝對照藥材；5.缺牛膝陰性對照

2.2.4 當(dāng)歸的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超聲處理30 min，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚層，揮干乙醚，用甲醇1 ml溶解作為供試溶液[6，14-16]。另取當(dāng)歸對照藥材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得對照藥材溶液。另取除去當(dāng)歸按處方和工藝制得的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，至紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果見圖5。

圖5 當(dāng)歸薄層色譜圖（紫外 365 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.當(dāng)歸對照藥材；5.缺當(dāng)歸陰性對照

3 討論

3.1 顯微鑒別

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只收載了杜仲和續(xù)斷的顯微鑒別，為了能更加有效地控制骨刺膠囊的質(zhì)量，對杜仲和續(xù)斷的顯微特征進(jìn)行了補(bǔ)充和完善，并增加了牛膝和熟地的顯微鑒別項。

3.2 獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸的薄層鑒別

本鑒別項均為增加項。在對方中全部藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別后，制訂了重現(xiàn)性較好且無陰性干擾的獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸為薄層色譜鑒別內(nèi)容，列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對其他藥材杜仲、熟地和威靈仙等都進(jìn)行了薄層方案考察，但均因本品藥味多，成分復(fù)雜，互相干擾嚴(yán)重，而未能得到滿意結(jié)果，故其薄層色譜鑒別內(nèi)容不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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[3] 曹玲，馮有龍，王亞超，等.骨刺片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（3）：191-195.

[4] 劉桂雙，李文軍.骨刺消痛膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報，2009，37（1）：45-48.

[5] 張湛睿，史亞軍，姜建東，等.骨刺消痛膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].陜西中醫(yī)，2009，30（6）：726.

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[8] 袁玲艷，趙永慧，趙嘉琳，等.續(xù)斷通絡(luò)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（2）：97.

[9] 陳寧，韋英杰，周學(xué)敏，等.復(fù)方續(xù)斷膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國新藥雜志，2009，18（23）：2283.

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[11] 黃榮增，孟軍華，吳娟.根痛平膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥師，2010， 18（4）：508.

[12] 金珠，位鴻，李秉鈞，等.骨痹靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥，2005，27（5）：529-532.

[13] 杜天信，李潔，杜志謙，等.桃仁膝康丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，6（6）：513.

[14] 陳巖，謝培山，顏玉貞.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集[M].廣州：廣東科技出版社，1993：110.

[15] 郭亮，郭劍華，馬善治，等.膝舒膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].實用中醫(yī)藥雜志，2012，28（12）：1070.

[16] 鄧小玉，殷嬋玉，趙吉平.少林風(fēng)濕跌打膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2012，34（2）：73.

（收稿日期：2014-04-16 本文編輯：許俊琴）

圖4 牛膝薄層色譜（紫外254 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.牛膝對照藥材；5.缺牛膝陰性對照

2.2.4 當(dāng)歸的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超聲處理30 min，過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），合并乙醚層，揮干乙醚，用甲醇1 ml溶解作為供試溶液[6，14-16]。另取當(dāng)歸對照藥材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得對照藥材溶液。另取除去當(dāng)歸按處方和工藝制得的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，至紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果見圖5。

圖5 當(dāng)歸薄層色譜圖（紫外 365 nm）

1.供試品（批號：20130601）；2.供試品（批號：20130602）；3.供試品（批號：20130603）；4.當(dāng)歸對照藥材；5.缺當(dāng)歸陰性對照

3 討論

3.1 顯微鑒別

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只收載了杜仲和續(xù)斷的顯微鑒別，為了能更加有效地控制骨刺膠囊的質(zhì)量，對杜仲和續(xù)斷的顯微特征進(jìn)行了補(bǔ)充和完善，并增加了牛膝和熟地的顯微鑒別項。

3.2 獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸的薄層鑒別

本鑒別項均為增加項。在對方中全部藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別后，制訂了重現(xiàn)性較好且無陰性干擾的獨活、續(xù)斷、牛膝和當(dāng)歸為薄層色譜鑒別內(nèi)容，列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對其他藥材杜仲、熟地和威靈仙等都進(jìn)行了薄層方案考察，但均因本品藥味多，成分復(fù)雜，互相干擾嚴(yán)重，而未能得到滿意結(jié)果，故其薄層色譜鑒別內(nèi)容不列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[參考文獻(xiàn)]

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[2] 胡世林，馮學(xué)鋒，唐曉軍.中國道地藥材原色圖說[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998：196，211，348.

[3] 曹玲，馮有龍，王亞超，等.骨刺片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（3）：191-195.

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（收稿日期：2014-04-16 本文編輯：許俊琴）