抗炎止血軟膏中沒食子酸含量的測定*

★ 陳浩 何小女 徐歡 張莉艷

(1.江西省中醫(yī)院 南昌330006；2.江西中醫(yī)藥大學 南昌330004)

肛腸疾病術(shù)后傷口疼痛、出血等并發(fā)癥是臨床上一大常見難題。筆者在《新疆中草藥單方驗方選編》基礎(chǔ)上研發(fā)出的復(fù)方止血消炎軟膏可用于保護術(shù)后肛腸患者創(chuàng)面及黏膜，減輕術(shù)后肛腸疾病疼痛及出血，減輕肛門墜脹及排便，作為肛腸外科手術(shù)后的局部用藥臨床效果良好。本文對處方中五倍子中的成分沒食子酸的含量進行了測定，為該藥的質(zhì)量標準的制定提供了科學依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器)，超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司)，微型植物試樣粉碎機KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司)，恒溫鼓風干燥箱DHG-9070A 型(海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑 對照品：沒食子酸(110831-201204中國藥品生物制品檢定所)，色譜甲醇：西隴化工股份有限公司(130106)，水為超純水，其余實驗所用化學試劑均為分析純試劑。

1.3 色譜條件 儀器：安捷倫1260，色譜柱：C-18安捷倫液相色譜柱4.6mm×150mm，流動相：甲醇∶ 0.1%磷酸(5∶95)，檢測波長：270nm，流速：1mL/分，柱溫：25℃。

2 含量的測定[1-5]

2.1 沒食子酸對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品17mg于100mL量瓶中，加適量50%甲醇使溶解定容至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過微孔濾頭于小瓶，即得儲備液。

2.2 供試品溶液的制備 稱取抗炎止血軟膏10g于研缽中研勻，精密稱取0.4g于圓底燒瓶中，精密加入4mol/L鹽酸溶液50mL，稱定重量，水浴加熱3.5小時，放冷，補重，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，加50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過微孔濾頭，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密吸取沒食子酸對照品適量，加50%的甲醇制成每1mL含102μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密取儲備液1、2、3、5、7mL，溶解于5個10mL量瓶中，取50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，以儲備液及稀釋的5個濃度的沒食子酸溶液建立標準曲線，每次進樣量10μL，以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，求得回歸方程：Y=197 35X-5.808 3r=0.999 1(n=6)。結(jié)果表明：沒食子酸在進樣量0.17-1.7μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4 陰性干擾試驗 取陰性樣品適量，按2.2供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中，記錄色譜圖(見下圖1-3)。結(jié)果表明：在與沒食子酸對照品色譜相應(yīng)的位置上無色譜峰出現(xiàn)，方中其他組分對測定結(jié)果無影響。

圖1 沒食子酸對照品

圖2 抗炎止血軟膏樣品

圖3 抗炎止血軟膏陰性樣品

2.5 精密度試驗 精密吸取2.2項的對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次進樣10μL，測得精密度RSD% =1.87%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液，各進樣10μL記錄峰面積，結(jié)果RSD%為1.33%，說明本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液10uL分別于0、1、3、5、7、10小時注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值，結(jié)果其RSD為1.42%。實驗結(jié)果表明供試品溶液在10小時內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率實驗 精密稱取已知含量的同批抗炎止血軟膏樣品各0.2g，分別在6份樣品中加入沒食子酸標準品14.96mg，按“供試品溶液的制備”法處理，按設(shè)定的方法測定，平均回收率為99.6%，RSD為1.66%，結(jié)果良好。

2.9 樣品測定 取本品3批樣品(20121115、20121219、20130103)，按2.2供試品方法制備溶液，按含量測定方法測定，用外標法計算供試品沒食子酸的含量，結(jié)果分別為71.85mg/g、71.68mg/g、71.10mg/g。

3 討論

取樣品在200-350 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，在270 nm處有最大吸收，故選擇270 nm為檢測波長。在供試品取樣中軟膏研細的均勻度決定著樣品含量測定的精確性，樣品在鹽酸水浴中提取性質(zhì)穩(wěn)定且高效液相測定中無陰性干擾。通過實驗研究，本文建立了抗炎止血軟膏中沒食子酸含量的HPLC測定法。該方法簡單并具有良好的準確性與重現(xiàn)性，有利于藥品質(zhì)量控制的下一步完善。

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