ROC曲線評(píng)價(jià)T細(xì)胞亞群在肝癌中的診斷價(jià)值

高翠紅，高慶雙，范志娟，王景豐

(1.唐山市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，河北 唐山063000；2.天津市第三中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，天津300170；3.唐山市工人醫(yī)院)

肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的發(fā)病率在我國居惡性腫瘤發(fā)病率的第2位。研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體的免疫功能狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，原發(fā)性肝癌患者在荷瘤狀態(tài)下機(jī)體的免疫功能發(fā)生紊亂。一般認(rèn)為腫瘤的免疫主要是細(xì)胞免疫[1,2]，T淋巴細(xì)胞亞群是反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的一個(gè)指標(biāo)。為了探討全血T淋巴細(xì)胞亞群在肝癌患者中的診斷意義，本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞術(shù)分析了外周血淋巴細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值的變化，并將其診斷效率進(jìn)行了評(píng)估。

1 對象與方法

1.1對象

選取我院和唐山市工人醫(yī)院2012年5月至10月肝癌住院病人125例,其中男性68例，女性57例，平均年齡60歲。所有病例均為臨床確診病例,均經(jīng)過病理學(xué)明確診斷，并排除其他疾病。肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)依照1999年第四屆全國肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議的標(biāo)準(zhǔn)。正常人50例為唐山市工人醫(yī)院健康體檢人員，其中男性30例，女性20例，平均年齡55.4歲。所有受試者均經(jīng)體檢和實(shí)驗(yàn)室檢測證實(shí)心、肝、腎和胰臟功能正常，實(shí)驗(yàn)前未服用任何藥物，符合NCCLS要求的健康人群標(biāo)準(zhǔn)。在對照組病例的選取上，我們挑選一些與肝癌病人年齡、性別相匹配的健康人的樣本與肝癌病人進(jìn)行比較，從而盡量減少疾病以外的因素帶來的誤差。兩組性別、年齡經(jīng)方差分析及卡方檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

1.2方法

取受檢者經(jīng)EDTA鉀鹽抗凝的空腹靜脈血2 ml，采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測外周血中的T淋巴細(xì)胞亞群，儀器為美國BeckmanCoulter 公司EPICS-XL型流式細(xì)胞儀，試劑為Coulter公司進(jìn)口試劑。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1肝癌患者和正常人血T淋巴細(xì)胞亞群的比較見表1。

表1 肝癌患者和正常人血T淋巴細(xì)胞亞群的比較

由表1得出，肝癌患者CD8+明顯高于健康對照組(P<0.05)，而CD3+、CD4+及CD4+/ CD8+比值則顯著低于健康對照組(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2T淋巴細(xì)胞亞群對肝癌患者的診斷價(jià)值見圖1、表2。

3 討論

評(píng)價(jià)診斷效率的兩個(gè)最基本指標(biāo)為靈敏度和特異性。ROC曲線恰能從這兩個(gè)方面評(píng)價(jià)一個(gè)試驗(yàn)的效能并通過曲線下面積直觀表示，便于不同方法間的比較。ROC曲線描述了診斷試驗(yàn)區(qū)分患者與非患者的固有能力，不受患病率的影響，綜合了靈敏度、特異性兩個(gè)指標(biāo)，而且考慮了所有可能的診斷界值得影響，因而能更客觀全面地評(píng)價(jià)診斷試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，可用于診斷臨界點(diǎn)的正確選擇，對臨床實(shí)驗(yàn)室工作尤為重要[3]。用ROC曲線下面積(AUC)評(píng)價(jià)診斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，根據(jù)Sweets的判斷標(biāo)準(zhǔn)，AUC在0.5以下，說明實(shí)驗(yàn)沒有診斷價(jià)值，在0.5-0.7之間有較低的準(zhǔn)確性，在0.7-0.9之間有一定的準(zhǔn)確性，>0.9則有較高的準(zhǔn)確性。本研究ROC分析結(jié)果見表2，以AUC值來判斷，提示CD4+、CD8+有較高的診斷價(jià)值，CD3+診斷價(jià)值較低，CD4+/CD8+比值診斷價(jià)值最高。

圖1 CD3+、CD4+、CD8+ 及CD4+/ CD8+比值診斷肝癌的ROC曲線

項(xiàng)目AUC靈敏度特異性標(biāo)準(zhǔn)誤CD3+0.66523.0%95.0%0.054CD4+0.73025.2%96.3%0.051CD8+0.78428.4%96.7%0.046CD4+/CD8+0.94893.0%90.0%0.020

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)。T細(xì)胞在免疫應(yīng)答中起主導(dǎo)作用。T淋巴細(xì)胞按其表面標(biāo)志物和功能不同分為CD4+T細(xì)胞亞群和CD8+T細(xì)胞亞群，前者主要為輔助性 T細(xì)胞(Th),后者包括抑制性T細(xì)胞(Ts)及殺傷性T細(xì)胞(Tc)。CD4+T細(xì)胞促進(jìn)免疫應(yīng)答,其可影響B(tài)細(xì)胞抗體產(chǎn)生和促進(jìn)CD8+T細(xì)胞活性，增強(qiáng)細(xì)胞毒性反應(yīng)。CD8+抑制免疫反應(yīng),其為殺傷性T細(xì)胞，直接發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。細(xì)胞免疫的穩(wěn)定有賴于該兩亞群間的平衡。這種平衡失調(diào)將造成CD4+/CD8+比值的相應(yīng)改變,李菊香等[4]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)與正常對照組相比，肝癌患者CD4+細(xì)胞數(shù)量明顯減少，CD8+細(xì)胞數(shù)量增多，CD4+/CD8+比值下降，主要原因可能是肝癌患者體內(nèi)癌細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)化，生長因子 以及分泌一些體液性或可溶性因子，抑制-β(TGF-β) CD4+，T細(xì)胞應(yīng)答和活性細(xì)胞毒性 細(xì)胞的產(chǎn)生，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值失衡。患者總T細(xì)胞總數(shù)的CD3+下降,CD4+數(shù)量降低,CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)正常,是HCC患者細(xì)胞免疫功能失衡的一個(gè)表現(xiàn),在臨床中有必要使用能調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的藥物。本文結(jié)果表明,肝癌患者的CD3+、CD4+細(xì)胞百分比明顯低于正常人 (P<0.05),CD8+細(xì)胞百分比比正常人明顯升高(P<0.05),CD4+/CD8+比值比正常人顯著降低(P<0.05);與以往研究相符。說明肝癌患者的細(xì)胞免疫功能明顯下降,Th細(xì)胞減少,表明其免疫輔助功能降低。

由圖1ROC曲線分析結(jié)果顯示，在診斷效率上，全血CD3+的靈敏度和特異性較CD4+、CD8+低?？梢姫?dú)立測定全血CD3+水平對診斷肝癌意義不大。

從表2可知，全血CD4+/ CD8+比值對診斷肝癌較CD4+、CD8+高。ROC曲線上距離左上角最近一點(diǎn)，兼顧靈敏度和特異度最大，此時(shí)，CD4+/ CD8+=0.263，CD4+/ CD8+比值有最佳診斷效率，靈敏度=93.0%，特異性=90.0%。AUC=0.948.由此可見，在診斷肝癌時(shí)，測定CD4+/CD8+比值優(yōu)于CD4+、CD8+的單項(xiàng)檢測。由此我們認(rèn)為臨床檢測 T淋巴細(xì)胞亞群的含量對腫瘤的診斷起到一定的作用。由于CD4+細(xì)胞具有促進(jìn)B細(xì)胞功能，輔助B細(xì)胞產(chǎn)生免疫抗體作用，而CD4+細(xì)胞則可抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體或抑制細(xì)胞免疫反應(yīng),以 CD4+/CD8+比值為中心的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞是機(jī)體免疫狀態(tài)的中心環(huán)節(jié)[5，6]?？砂袰D4+/CD8+值作為機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的指標(biāo)用于判斷病情這對肝癌的早期發(fā)現(xiàn)和治療至關(guān)重要。

綜上所述，全血CD3+、CD4+、CD8+濃度及其CD4+/CD8+比值可作為臨床診斷肝癌的輔助指標(biāo)，但真正有診斷價(jià)值的指標(biāo)是CD4+/CD8+比值。

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