mTOR在HER-2陰性乳腺癌中的表達及意義

王立波，王彥榮*，席 妍，李曉萌

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院 內(nèi)二科，吉林 長春130012；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 內(nèi)鏡中心)

乳腺癌的分子靶向治療已經(jīng)取得了突飛猛進的發(fā)展，并應(yīng)用到臨床，但主要針對Her-2陽性乳腺癌，而Her-2陰性乳腺癌的靶向治療仍于探索研究階段，未廣泛應(yīng)用到臨床實踐中。本研究觀察mTOR在Her-2陰性乳腺癌中的表達及與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性，探討其在Her-2陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的意義，為Her-2陰性乳腺癌尋找預(yù)后因素及新的治療靶點。

1 資料與方法

1．1一般資料選取我院2012年6月-2013年8月期間65例Her-2陰性女性乳腺癌患者，中位年齡54歲(32-73歲)。術(shù)前均未接受化療、 放療。 按全國乳腺病理專題學(xué)術(shù)研討會(2003)推薦的乳腺癌組織學(xué)分類:浸潤性導(dǎo)管癌 52例,浸潤性小葉癌13例。按2009年第七版 A J CC乳腺癌TNM分期:Ⅰ期11例,Ⅱ期42例,Ⅲ期 12例。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例,無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。標本均為手術(shù)后立即取材,每例標本均分別取癌組織、 距癌組織1厘米處的癌旁組織和正常乳腺組織。

1．2免疫組化染色方法

采用EnvisionTM二步法對Her-2陰性乳腺癌組織、癌旁組織及正常組織進行mTOR免疫組化染色，染色步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作，選用已知陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。兔抗人mTOR多克隆抗體(1∶100)購自武漢博士德生物工程有限公司。

1．3評判標準

(1)Her-2標準：根據(jù)中國乳腺癌Her-2檢測指南2009版：0：無著色；1+：任何比例的浸潤癌細胞膜的呈現(xiàn)微弱、不完整的細胞膜著色；2+：>10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)弱—中等強度、完整但不均勻的細胞膜棕黃著色或<30%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強且完整的細胞膜棕褐著色；3+：>30%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)強且完整的細胞膜棕褐著色。由于未對Her-2( ++) 的病例進一步進行FISH檢測，本研究將Her-2(++)及以下者定義為陰性。(2)mTOR 蛋白表達主要在細胞質(zhì)中，以高倍鏡(400×) 觀察5個視野，每個視野觀察100個細胞染色強度分級為：陰性(-) ：細胞不顯色或顯色<25%；弱陽性(+) ：25%-50%細胞顯色；中度陽性(++) ：51%-75%細胞顯色，著色較深；強陽性(+++) ：>75%細胞顯色，著色深。弱陽性、中度和強陽性均記為陽性。

1．4統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用χ2檢驗和秩和檢驗。相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1mTOR蛋白在Her-2陰性乳腺癌﹑癌旁及正常乳腺組織中的表達Her-2陰性乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織mTOR 蛋白陽性表達分別為42例(64.6%)、15例(23.1%)、8例(12.3%),癌組織中mTOR蛋白表達陽性率高于癌旁及正常乳腺組織(P均<0.05)。

2.2mTOR的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系見表1。

表1 mTOR 的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

mTOR 的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。

3 討論

我國近年來乳腺癌發(fā)病率以每年3%的速度遞增，成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一,乳腺癌也是城市中死亡率增長最快的癌癥,嚴重威脅女性的健康[1]。20世紀80年代Her-2原癌基因在乳腺癌中被發(fā)現(xiàn)，研究表明它參與抑制細胞凋亡，維持或促進腫瘤細胞生長；上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)，促進腫瘤新生血管生成；增加腫瘤細胞的侵襲力，破壞機體組織抗侵襲屏障，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，針對Her-2的研究逐步成為熱點，赫賽汀的問世開啟了Her-2陽性乳腺癌的分子靶向治療時代，并納入臨床治療規(guī)范，提高了Her-2陽性乳腺癌患者的療效，延長生存期。而Her-2陰性乳腺癌無相應(yīng)的治療靶點，并不適用赫賽汀、拉帕替尼等藥物的治療，有關(guān)Her-2陰性乳腺癌的分子靶向治療仍沒有取得突破性進展，值得我們?nèi)ミM一步研究探討。

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT/PKB)/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 信號傳導(dǎo)通路是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要信號通路之一，其主要作用是抑制細胞凋亡、調(diào)節(jié)細胞周期、促進腫瘤新生血管的形成以及侵襲與轉(zhuǎn)移，研究表明與乳腺癌的關(guān)系密切，成為乳腺癌新的治療靶點[2]。

mTOR 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，位于PI3K/Akt通路的下游，mTOR信號通路主要參與細胞生長和分化的調(diào)控并在翻譯水平控制以上過程。其下游主要包括2 種信號分子：核糖體p70 S6(S6K1)和真核細胞翻譯起始因子4E 結(jié)合蛋白(4E-BP1)[3]，通過上述兩種信號分子發(fā)揮作用。在許多惡性腫瘤中，PI3K/Akt信號通路過度激活，反之使下游的mTOR信號通路上調(diào)[4]。在調(diào)節(jié)mTOR 活性過程中也存在負向調(diào)控因子，如抑癌基因PTEN可以使PIP3 在D3 位去磷酸化生成PIP2，從而負調(diào)節(jié)PI3K 下游AKT/mTOR 信號通路的活性[5]。乳腺癌細胞尤其是在三陰乳腺癌中mTOR的代謝途徑受到破壞，PTEN常常會發(fā)生缺失[6]，引起mTOR的活性增高，這就為mTOR抑制劑治療三陰乳腺癌提供了理論基礎(chǔ)，直接阻斷mTOR信號通路是乳腺癌治療的一個新靶點。

本研究觀察到在Her-2陰性乳腺癌中mTOR表達明顯高于癌旁組織及正常乳腺組織，mTOR 蛋白陽性表達分別為42例(64.6%)、15例(23.1%)、8例(12.3%) (P均<0.05)，有統(tǒng)計學(xué)差異，提示在Her-2陰性乳腺癌中發(fā)生發(fā)展過程中存在PI3K/Akt信號通路過度激活及mTOR信號通路上調(diào)，mTOR抑制劑可能成為Her-2陰性乳腺癌新的靶向治療藥物。同時觀察到mTOR 蛋白陽性表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，mTOR有可能是Her-2陰性乳腺癌的不良預(yù)后因子。由于本研究樣本量較小，上述結(jié)論還有待進一步研究探討。

參考文獻：

[1]黃哲宙，陳萬青，吳春曉，等．中國女性乳腺癌的發(fā)病和死亡現(xiàn)況—全國32個腫瘤登記點2003-2007年資料分析報告[J]．腫瘤，2012，6，32：435．

[2]Ghayad SE，Cohen PA.Inhibitors of the PI3K/Akt /mTOR pathway:new hope for breast cancer patients[J]．Recent Pat Anticancer DrugDiscov，2010，5(1):29.

[3]Margariti N,Fox SB,Bottini A,et al.“Overcoming breast cancer drug resistance with mTOR inhibitors”.Could it be a myth or a real possibility in the short-term future[J]．Breast Cancer Res Treat,2011,128(3):599.

[4]Shaw RJ,Cantley LC.Ras,PI(3)K and mTOR signalling controls tumour cell growth[J].Nature,2006,441(7092):424.

[5]Urano J，Sato T，Matsuo T，et al.Point mutations in TOR confer Rheb-independent growth in fission yeast and nutrient-independent mammalian TOR signaling in mammalian cells[J]．Proc Natl Acad Sci USA，2007，104(9):3514.

[6]ChaconRD，CostanzoMV.Triple negative bresst cancer[J].Breast CancerRes,2010,12(Suppl2)：S3．