改善骨髓微環(huán)境與脂質(zhì)體藥物相結(jié)合干預(yù)白血病的實(shí)驗(yàn)研究

周及紅，劉 東*,李 彤

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院 1.放射科;2.超聲科，吉林 長(zhǎng)春130041)

白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,是國(guó)內(nèi)十大高發(fā)惡性腫瘤之一,占腫瘤發(fā)病率的第六位。白血病發(fā)病機(jī)制主要是患者的造血干細(xì)胞異常、免疫異常及骨髓造血微環(huán)境異常。本研究通過改善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物髂骨骨髓微環(huán)境及應(yīng)用脂質(zhì)體阿霉素，以提高白血病的干預(yù)效果。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：采用逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)建立人慢性粒細(xì)胞性白血病兔模型。將60只符合人慢性粒細(xì)胞性白血病實(shí)驗(yàn)兔模型隨機(jī)分成兩組(基礎(chǔ)治療組、山莨菪堿組)；實(shí)驗(yàn)試劑：山莨菪堿、脂質(zhì)體阿霉素；實(shí)驗(yàn)設(shè)備：穿刺針、導(dǎo)管、流式細(xì)胞儀、顯微鏡。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均進(jìn)行脂質(zhì)體阿霉素治療，250 ml 5%葡萄糖注射液稀釋，靜脈滴注，劑量20 mg/m2，10天后重復(fù)給藥，4周為一療程。 山莨菪堿組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均進(jìn)行經(jīng)股動(dòng)脈穿刺，旋髂深動(dòng)脈注入山莨菪堿，5-10 mg/kg，每7天一次，4周為一療程。治療后第4周進(jìn)行髂骨取髓，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨髓象、骨髓病理及FCM檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 骨髓病理觀察 干預(yù)前及干預(yù)后第4周取髂后上棘骨髓組織，直徑不小于0.5 cm，Giemsa染色，高倍鏡下觀察微血管數(shù)量、脂肪細(xì)胞數(shù)、骨髓造血組織容量百分比。

1.3.2 髂骨骨髓象 干預(yù)前及干預(yù)后第4周取髂后上棘骨髓組織，觀察骨髓增生程度，粒紅細(xì)胞比例。

1.3.3 骨髓細(xì)胞CD33+陽(yáng)性率 FCM治療前后髂骨骨髓細(xì)胞CD33+檢測(cè)陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨髓增生度、粒紅細(xì)胞比變化情況

兩組實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣?dòng)物在治療前無顯著差異性，治療后山莨菪堿組骨髓增生程度減低、粒紅細(xì)胞比例下降至正常幅度明顯高于基礎(chǔ)治療組(P<0.05)。兩組比較效果見表1。

表1 基礎(chǔ)干預(yù)組與山莨菪堿組干預(yù)前后骨髓增生程度、粒紅細(xì)胞比例比較

注:同時(shí)期與基礎(chǔ)治療組相比*P<0.05

2.2 骨髓病理切片組織學(xué)觀察結(jié)果

低倍鏡下觀察骨髓微血管數(shù)量顯示,山莨菪堿組骨髓微血管的數(shù)量(低倍視野)及造血組織容量(%),較基礎(chǔ)干預(yù)組有明顯增多(P<0.05) ,如表2。兩組干預(yù)前及基礎(chǔ)干預(yù)組干預(yù)后血管擴(kuò)張、瘀血及斷裂明顯,脂肪細(xì)胞較多仍呈慢性粒細(xì)胞性白血病的組織學(xué)改變；山莨菪堿組干預(yù)后僅見輕度微血管擴(kuò)張,無血管斷裂、瘀血,脂肪細(xì)胞比例減少。

表2 兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)后骨髓微血管數(shù)量變化比較

注:同時(shí)期與基礎(chǔ)干預(yù)組相比*P<0.05; 同組內(nèi)與干預(yù)前比較ΔP<0.05

2.3 骨髓細(xì)胞CD33陽(yáng)性率檢測(cè)

基礎(chǔ)干預(yù)組和山莨菪堿組干預(yù)前后骨髓細(xì)胞CD33陽(yáng)性率檢測(cè)，兩組干預(yù)前骨髓細(xì)胞CD33陽(yáng)性率檢測(cè)無明顯差異(P>0.05);干預(yù)后山莨菪堿組較基礎(chǔ)干預(yù)者骨髓細(xì)胞平均CD33陽(yáng)性率低，有顯著差異性(P<0.05)，如表3。

表3 骨髓細(xì)胞CD33陽(yáng)性率檢測(cè)

注:同時(shí)期干預(yù)后與基礎(chǔ)干預(yù)組相比ΔP<0.05; 同組內(nèi)與干預(yù)前比較*P<0.05

3 討論

骨髓微環(huán)境：骨髓造血微環(huán)境[1]包括:①小動(dòng)脈、毛細(xì)血管、血竇、小靜脈組成的微血管部分②由基質(zhì)纖維和基質(zhì)細(xì)胞組成的結(jié)締組織部分③與血管結(jié)締組織伴隨的神經(jīng)纖維。每個(gè)干細(xì)胞的增殖分化所依賴的局部環(huán)境是骨髓造血微環(huán)境。骨髓微環(huán)境的異常表現(xiàn)[2]在骨髓微血管的減少、斷裂及基質(zhì)細(xì)胞(主要是成纖維細(xì)胞)的生成減少。骨髓微血管是供給骨髓營(yíng)養(yǎng)成分、氧氣、排出骨髓細(xì)胞代謝產(chǎn)物及二氧化碳的重要通道,是維持骨髓正常造血的重要結(jié)構(gòu)。骨髓微血管是否完整通暢,決定著骨髓造血細(xì)胞能否獲取營(yíng)養(yǎng)成分及氧氣而正常分化,白血病患者的骨髓基質(zhì)病變主要有水腫、 血竇充血、 出血、 血竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹及微血管減少,微血管減少程度與造血組織減少量成正比,微血管的數(shù)量的多少、 結(jié)構(gòu)的完整性及能否發(fā)揮正常功能與骨髓的造血功能有密切關(guān)系。目前干預(yù)白血病[3]主要是針對(duì)干細(xì)胞生產(chǎn)藥物，而針對(duì)改善微環(huán)境的藥物應(yīng)用藥物較少。本研究應(yīng)用山莨菪堿藥物改善髂骨骨髓微環(huán)境，同時(shí)應(yīng)用脂質(zhì)體藥物達(dá)到干預(yù)白血病目的。本實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)顯示注入山莨菪堿藥物組，髂骨骨髓微血管的數(shù)量、管徑及造血組織容量較基礎(chǔ)干預(yù)組明顯增加(P<0.05),與干預(yù)前相比骨髓微血管的擴(kuò)張、瘀血明顯減輕，微血管的斷裂消失,而基礎(chǔ)干預(yù)組則無明顯的改善,說明山莨菪堿能較好地促進(jìn)骨髓微血管的再生及修復(fù),從而改善了骨髓的血液流通,增加了骨髓造血細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分及氧氣的供應(yīng),有利于骨髓造血細(xì)胞的增殖分化。

白血病干預(yù)的目的[5]是控制血液學(xué)和遺傳學(xué)異常、消除癥狀、最大限度地延長(zhǎng)生存。近年來干預(yù)手段和策略有較大進(jìn)展。主要干預(yù)方法有化學(xué)干預(yù)、信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑、造血干細(xì)胞移植干預(yù)、自體骨髓移植等，但傳統(tǒng)干預(yù)方法效果不佳，對(duì)白血病的各期療效不佳。目前藥物脂質(zhì)體作為靶向干預(yù)劑已開始受到廣泛的關(guān)注，由于脂質(zhì)體藥物[7]起到長(zhǎng)效作用、較傳統(tǒng)方法提高療效、降低了毒副作用因而臨床較廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)在人慢性粒細(xì)胞性白血病兔模型的干預(yù)中，比較了脂質(zhì)體阿霉素和山莨菪堿、脂質(zhì)體阿霉素聯(lián)合應(yīng)用干預(yù)的療效，結(jié)果表明聯(lián)合兩種方法慢性粒細(xì)胞性白血病兔模型的骨髓CD33明顯減少，一般情況迅速恢復(fù)，提示此種方法明顯優(yōu)于脂質(zhì)體阿霉素干預(yù)的效果。

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