癌基因c-fos、c-myc蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌皮損中的表達(dá)及意義

耿春杰 張國(guó)強(qiáng) 王正想 李美洲 高順強(qiáng)

·論著·

癌基因c-fos、c-myc蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌皮損中的表達(dá)及意義

耿春杰 張國(guó)強(qiáng) 王正想 李美洲 高順強(qiáng)

目的研究關(guān)于c-fos、c-myc兩個(gè)癌基因在皮膚鱗癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)情況。方法選擇79例皮膚鱗癌病例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)c-fos、c-myc的表達(dá)情況，并比較與正常皮膚組織的表達(dá)情況進(jìn)。結(jié)果在正常皮膚組織中c-fos、c-myc兩個(gè)癌基因不表達(dá)，而在皮膚鱗癌中兩者分別有70.9%和78.5%陽(yáng)性表達(dá)，癌組織的分化程度與兩者表達(dá)水平密切相關(guān)(P<0.05)，分化程度越高的腫瘤c-fos表達(dá)水平越高，而在分化程度越高的腫瘤中c-myc表達(dá)水平越低。結(jié)論可用c-fos、c-myc的表達(dá)水平判定皮膚鱗癌及分化程度及指導(dǎo)臨床預(yù)后。

癌基因蛋白質(zhì)c-fos；癌基因蛋白質(zhì)c-myc； 鱗狀細(xì)胞癌；皮膚腫瘤

皮膚鱗狀細(xì)胞癌相對(duì)肺部等其他部位的鱗癌發(fā)病率較低，但在皮膚惡性腫瘤中發(fā)病率最高，其發(fā)病率在我國(guó)占皮膚科惡性腫瘤的78.5%～90.9%,嚴(yán)重威脅著人們的身體健康[1]。本文探討了c-fos和c-myc蛋白在皮膚鱗癌中的表達(dá)與病理分化程度關(guān)系，以尋找有效可行的早期診斷和預(yù)后指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科2000至2010年間手術(shù)切除皮膚鱗癌的標(biāo)本79例，其中男51例，女28例；年齡28～83歲，平均年齡(65±3)歲。其中高分化鱗癌27例， 中分化鱗癌30例， 低分化鱗癌22例。隨機(jī)選擇8例非腫瘤性患者正常皮膚標(biāo)本作為對(duì)照。

1.2 方法 蠟塊標(biāo)本，病理科切片。經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化后，微波抗原修復(fù)。選用中杉金橋公司兔抗人c-fos和c-myc多克隆抗體。采用DAB染色切片。陰性對(duì)照用 PBS(磷酸鹽緩沖液)代替一抗。

1.3 結(jié)果判斷 陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕-深棕色顆粒，c-fos陽(yáng)性顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)，c-myc在細(xì)胞核內(nèi)及細(xì)胞漿中均見(jiàn)陽(yáng)性顆。根據(jù)細(xì)胞著色深淺將其表達(dá)強(qiáng)弱分為：(1)陽(yáng)性(++):細(xì)胞內(nèi)棕色顆粒為≥50%;(2)陽(yáng)性(+):細(xì)胞內(nèi)有明顯棕色顆粒但<50%；(3)陰性(-):細(xì)胞內(nèi)無(wú)明顯棕色顆粒；每張標(biāo)本于高倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，觀察陽(yáng)性顆粒細(xì)胞占總體細(xì)胞的比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-fos、c-myc蛋白的表達(dá)情況 試驗(yàn)組表達(dá)率分別為70.9%(42/73)和78.5%(55/73)，對(duì)照組中均未見(jiàn)兩種蛋白表達(dá)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1～4。

2.2 C-fos蛋白的表達(dá)與皮膚鱗癌的分化程度呈正相關(guān)(r=0.42，P<0.05)，分化程度降低C-fos表達(dá)也隨之降低，而c-myc蛋白的表達(dá)則相反，與皮膚鱗癌的分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.87，P<0.05)。不同分化程度的皮膚鱗癌中蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.26和7.47，P<0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 C-myc蛋白表達(dá)與皮膚鱗癌癌細(xì)胞分化程度的關(guān)系 例

表2 C-fos蛋白表達(dá)與皮膚鱗癌癌細(xì)胞分化程度的關(guān)系 例

3 討論

原癌基因是一類重要“看家基因”，它在正常細(xì)胞內(nèi)普遍存在，并且調(diào)控細(xì)胞增殖和分化。它只有在受到各種因素(物理、化學(xué)、生物)的作用下被活化失控時(shí)，才能產(chǎn)生基因突變或過(guò)度表達(dá)，才會(huì)使正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞，腫瘤抑制基因和原癌基因控制正常細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化失調(diào)是導(dǎo)致人體惡性腫瘤發(fā)生的重要因素。基因產(chǎn)物表達(dá)異常和過(guò)度表達(dá)可引起腫瘤的惡性表型[1]。核蛋白癌基因中的研究熱點(diǎn)是轉(zhuǎn)錄因子類的原癌基因核蛋白c-fos， c-myc與腫瘤的關(guān)系，c-myc是一種核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,人c-myc定位于8q24,由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成,在靜止期幾乎不表達(dá)，它是快速早期反應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)的一類信使,早期由靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)入增殖狀態(tài)的細(xì)胞,各種因素的作用下c-myc表達(dá)明顯增加，同時(shí)它是早期細(xì)胞增殖的必備基因,調(diào)控轉(zhuǎn)錄的反式作用因子是其在細(xì)胞增殖過(guò)程中的表達(dá)產(chǎn)物,這個(gè)因子也是細(xì)胞增殖信號(hào)傳導(dǎo)的必不可少的因子[2]，另外c-myc還參與了多種基因表達(dá)和多種信號(hào)傳遞的啟動(dòng),由于該基因內(nèi)含多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn),因而它也是一種可調(diào)控基因,受到多種信號(hào)通路的調(diào)控[3,4]。

圖1 C-fos在皮膚鱗癌中的表達(dá)(SP×400)

圖2 C-myc在皮膚鱗癌中的表達(dá)(SP×400)

圖3 C-fos在正常皮膚中不表達(dá)(SP×100)

圖4 C-myc在正常皮膚中不表達(dá)(SP×100)

現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)c-myc基因?qū)ΣG丸、結(jié)腸、直腸、乳腺等惡性腫瘤的細(xì)胞分化具有作用[5-7]，但關(guān)于c-myc蛋白在皮膚鱗癌組織中的表達(dá)研究較少。另外雖然c-myc基因及c-myc蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)，但由于c-myc蛋白不穩(wěn)定，常規(guī)固定方法易出現(xiàn)胞漿彌散，故本實(shí)驗(yàn)中，免疫組化則出現(xiàn)胞漿著色。c-fos是編碼核蛋白的癌基因，屬于立早基因(early response genes，ERG)的成員，由5個(gè)外顯子組成，表達(dá)產(chǎn)物Fos由381個(gè)氨基酸組成，此類基因受到各種因素(物理、化學(xué)、生物)的作用下，生成的轉(zhuǎn)錄因子，作用于正常細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和分化[8]。Fos基因蛋白已知有四種 (c-fos、Fos B、Fra-1及Fra-2)參與構(gòu)成轉(zhuǎn)錄激活因子(Ap-1)，其中c-fos為主，其表達(dá)產(chǎn)物也定位于細(xì)胞核，另外以c-fos二聚體形式的Ap-1生物學(xué)活性最強(qiáng)。據(jù)相關(guān)報(bào)道，細(xì)胞增殖與Ap-1密切相關(guān)，在腫瘤轉(zhuǎn)化乃至逆轉(zhuǎn)中均起關(guān)鍵作用[9]。本研究用免疫組化方法發(fā)現(xiàn)，c-fos、c-myc蛋白在正常皮膚組織中不表達(dá)，在皮膚鱗癌中的表達(dá)分別為70.9%和78.5%。表明皮膚鱗癌的發(fā)生發(fā)展與癌基因c-fos、c-myc關(guān)系密切,這與黃炳臣等[10]的研究結(jié)果相似。同時(shí)，在高分化鱗癌中c-fos的表達(dá)明顯比低分化鱗癌高，而c-myc正好相反，在低分化鱗癌表達(dá)較高(P<0.05)，由此可見(jiàn)，在臨床上判定皮膚鱗癌分化程度可用這兩種基因的表達(dá)水平作為評(píng)判的指標(biāo)，另外，兩者可以為診斷早期皮膚鱗癌提供了一個(gè)新標(biāo)記。此外c-myc表達(dá)高陽(yáng)性者及c-fos表達(dá)低陽(yáng)性者預(yù)后較差。通過(guò)對(duì)c-fos和c-myc的表達(dá)情況的研究發(fā)現(xiàn)，二種核蛋白癌基因的表達(dá)無(wú)正相關(guān)關(guān)系，與Kanda等[11]認(rèn)為c-myc在高分化者中表達(dá)水平高的文獻(xiàn)報(bào)道相反。本研究發(fā)現(xiàn)高分化者中表達(dá)水平較低，與崔雪林[12]結(jié)果一致，進(jìn)一步說(shuō)明c-myc癌基因激活將引起細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。劉冬梅等[13]研究了c-fos,c-myc基因表達(dá)與外陰鱗癌的關(guān)系，結(jié)果c-fos表達(dá)陽(yáng)性率隨外陰浸潤(rùn)程度加深而降低,c-myc表達(dá)陽(yáng)性率隨外陰癌浸潤(rùn)程度加深而升高，與本研究結(jié)果也吻合。

兩種核蛋白的癌基因的表達(dá)增強(qiáng)的方向不同，其作用機(jī)制可能有別，可能是細(xì)胞增殖的觸發(fā)點(diǎn)不同,具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。由于c-fos是立早基因，僅細(xì)胞周期早期發(fā)揮作用，腫瘤細(xì)胞形成后，其增殖就靠自主生長(zhǎng)能力，因此出現(xiàn)癌組織內(nèi)c-fos表達(dá)下降的情況，由此猜想c-myc可能是主要對(duì)細(xì)胞周期中晚期腫瘤細(xì)胞起作用，因而表現(xiàn)出隨著皮膚鱗癌分化程度的降低，c-fos表達(dá)逐漸減少，而c-myc表達(dá)逐漸增多。另外它們?cè)谄つw鱗癌的發(fā)生中都是高表達(dá)，只是階段不同，因此也可能存在相互作用，并最終影響其他基因的表達(dá)，使細(xì)胞增殖失控，發(fā)生癌變。采用免疫組化學(xué)技術(shù)對(duì)c-fos和c-myc進(jìn)行定位研究，有助于了解其功能，還可能有助于尋找新的高特異性的導(dǎo)向載體，在皮膚鱗癌的治療方面發(fā)揮作用。

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Expressions and significance of c-fos and c-myc protein in skin squamous cell carcinoma

GENGChunjie*,ZHANGGuoqiang,WANGZhengxiang,etal.*DepartmentofDermatology,TheThirdHospitalofXingtaiCity,Hebei,Xingtai054000,China

ObjectiveTo investigate the changes of expression levels of c-fos,c-myc during pathogenesis and development of skin cell squamous carcinoma.MethodsThe expression levels of c-fos,c-myc were detected by immunohistochemistry in 79 cases of skin squamous cell carcinoma,and the results were compared with those in normal tissues.ResultsThe c-fos and c-myc were not expressed in normal skin,however,which were expressed in skin squamous cell carcinoma,the positive rates of c-fos and c-myc were 70.9% and 78.5%,respectively.The expression levels of c-fos and c-myc were closely correlated to the differentiation degree of tumor tissue (P<0.05).The higher differentiation degree of tumor tissue,the higher expression levels of c-fos,however,the higher differentiation degree of tumor tissue,the lower expression levels of c-myc.ConclusionThe detection of expression levels of c-fos and c-myc can evaluate differentiation degree of skin squamous cell carcinoma and clinical prognosis.

oncogene protein c-fos; oncogene protein c-myc；carcinoma of squamous cell; skin neoplasms

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.006

054000 河北省邢臺(tái)市第三醫(yī)院皮膚科(耿春杰)；河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院(張國(guó)強(qiáng)、李美洲、高順強(qiáng))；河北省滄州市中心醫(yī)院皮膚科(王正想)

高順強(qiáng)，050011 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科；

E-mail: gshunqiang@medmail.com.cn

R 739.5

A

1002-7386(2014)06-0822-03

2013-10-23)