血型血清學檢查方法在交叉配血中的應用

龔衛(wèi)鋒(西安市中心醫(yī)院輸血科，西安 710003)

交叉配血試驗包括主試驗和副試驗兩種。前者用受血者血清與供血者紅細胞懸液作試驗以發(fā)現(xiàn)受血者血清中是否含有與供血者紅細胞反應的抗體，又稱直接配合或主側(cè)配合;后者則用供血者血清與受血者紅細胞作試驗以發(fā)現(xiàn)供血者血清中是否有不合抗體，又稱間接配合。交叉配血試驗有多種方式，如鹽水法、膠體介質(zhì)配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。據(jù)報道，每輸一個單位的血使受血者致敏的風險為1.0% －1.6%，多次輸血產(chǎn)生同種抗體的幾率為15% －20%［1］。一些疑難血型交叉配血尚需更多的辦法加以驗證，IgG+C3多抗試劑37℃恒溫箱溫浴可發(fā)現(xiàn)血型不配合及意外抗體，該方法主要優(yōu)點是既能檢出不相配合的完全抗體，又能檢出不完全抗體，較好地解決了疑難血型交叉配血中結(jié)果難以正確判斷的問題，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 對象

選擇2006－06～2013－08西安市中心醫(yī)院20 136例住院需輸血患者，其中有95例交叉配血不相合患者。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 抗人球蛋白IgG+C3試劑，3%標準A、B、O型紅細胞，均為上海血液中心產(chǎn)品。BASO 2002—2型血庫專用離心機。

1.2.2 抗人球法檢測凝血情況 靜脈抽取受血者和供血者血液各3 ml，按常規(guī)方法分離血清。將受血者和供血者紅細胞用生理鹽水制成5%的洗滌紅細胞生理鹽水懸液。取兩支試管，分別注明“主”、“次”或“+”、“－”號字樣，主側(cè)滴入供血者洗滌紅細胞懸液一滴和受血者血清兩滴;次側(cè)加入受血者洗滌紅細胞懸液一滴和供血者血清兩滴?；旌瞎?受血者洗滌紅細胞懸液一滴和供血者血清兩滴，供血者洗滌紅細胞懸液一滴和受血者血清兩滴，混勻，37℃恒溫箱內(nèi)溫浴30 min－2 h后取出，3 000 r/min離心1－2 min;觀察上清液的顏色，然后再觀察有無紅細胞凝集或溶血現(xiàn)象發(fā)生［2］。隨后加入抗人球蛋白IgG+C3試劑1滴，混勻，1 000 r/min離心1 min，觀察結(jié)果。

若試管內(nèi)紅細胞呈均勻混濁無顆粒出現(xiàn)，顯微鏡下紅細胞分散存在，即無凝集，上清液呈正常血清狀顏色為交叉配血試驗相合，可以發(fā)血;若試管內(nèi)紅細胞出現(xiàn)溶血或凝集現(xiàn)象可用凝膠配血法(又稱微管(板)凝膠抗球蛋白試驗)進一步印證，若仍然有溶血或凝集現(xiàn)象，則需要進一步檢測抗體類型，另外尋找相合血源。

2 結(jié)果

本院20 136例住院需輸血患者中檢出95例交叉配血不相合患者，95例交叉配血不相合患者中包括92例意外抗體陽性患者和3例A2B亞型血患者。

92例意外抗體陽性患者(其中包括O型30例，B型32例，A型28例，AB型2例)與同型獻血者試管法交叉配血實驗結(jié)果表明，30 min后出現(xiàn)輕度溶血或凝集，1 h后出現(xiàn)中度溶血或凝集，2 h后出現(xiàn)重度溶血或凝集。

凝膠配血法印證92例意外抗體陽性患者經(jīng)凝膠配血法復檢均有輕度到重度溶血或凝集現(xiàn)象。

3例A2B型血患者與B型、AB型供血者加入IgG+C3多抗試劑37℃溫浴后結(jié)果表明，A2B型血患者與B型供血者交叉配血結(jié)果無凝集無溶血，A2B型血患者與AB型供血者交叉配血結(jié)果輕度凝集，輕度溶血。用凝聚胺法做此亞型患者與供血者交叉配血有同樣的結(jié)果，但沒有抗人球法容易判斷結(jié)果。

3 討論

需要輸血的患者除單純型外傷大出血外，大多伴隨某些疾病，再加上患者身體素質(zhì)、病情不同，用藥情況的差異及其他因素，往往會導致臨床配血困難［3］，血液標本中含有肝素、肺炎支原體抗體、抗人球蛋白抗體等均會導致交叉配血失敗［4］。隨著溫浴時間延長，各種影響交叉配血因素充分作用，試管內(nèi)紅細胞溶血或凝集程度隨之增加。

對于亞型患者A1抗原能與抗A、抗A1抗體發(fā)生凝集反應，而A2B抗原與抗A凝集弱，與抗B凝集強。A2B亞型的血清中含少量抗A1抗體，把A2B亞型血定為AB血型，在臨床輸血過程中若將AB型血輸給患者，其中患者的抗A1抗體會與大部分AB型獻血者血液反應，出現(xiàn)溶血性輸血反應。Ax型紅細胞與B型血清(抗A抗體)凝集較弱，但與O型血清可發(fā)生程度不一的凝集，這是因為O型血中抗A效價比B型血抗A效價高，故做ABO血型鑒定時，應加O型血清(內(nèi)含抗A、抗B及抗AB)，以防將Ax型誤定為O型或AxB亞型誤定為B型;若找不到合適A2B亞型血，給患者輸B型懸液或O型洗滌紅細胞是妥當?shù)?，但須征得患者同意并簽署知情同意書?/p>

微柱凝膠技術(shù)在交叉配血中敏感、操作方便，更有效地保證了輸血安全［5］，微柱凝膠技術(shù)與試管法需要相互印證。當交叉配血不相合時，首先要復查受血者和供血者的ABO血型和Rh血型，觀察抗體篩檢結(jié)果。通常情況下，受血者和獻血者的樣本在輸血后，需要在2－6℃保存3－7 d時間，對于ABO血型正反定型不符血樣，必須嚴格按照操作規(guī)程，保障試劑質(zhì)量，另外抽取患者新鮮標本重新檢測，排除技術(shù)和責任問題是必要的［6］。在血型正確的情況下，還要注意避免意外抗體對交叉配血的影響，篩查出具體抗體類型，選擇不含該抗體所針對抗原的獻血者進行交叉配血，近來，由于激素等免疫抑制劑在臨床中的使用，意外抗體陽性患者已明顯減少。

不完全抗體為ABO系統(tǒng)以外的其他血型抗體，多為IgG抗體，分子量較小，在鹽水介質(zhì)中只能致敏相應抗原的紅細胞，而不能使之凝集，必須通過特定的方法(如加入IgG+C3多抗試劑37℃恒溫水浴)使致敏紅細胞發(fā)生凝集。通常情況下，IgM抗體在4℃比在22℃或37℃更容易被吸收，IgG抗體在37℃吸收效果最好［7］。所以IgG抗體在37℃更易產(chǎn)生抗原與抗體間的中和反應，加入IgG+C3多抗試劑促進了抗原與抗體反應的進行，隨著反應時間的延長，抗原與抗體反應進行的更加充分完全。此方法對IgG抗體檢出及疑難交叉配血均有顯著效果。對交叉配血不合患者，可采用隨機配血法尋找合適同型供血者，也可進一步篩查IgG抗體類型，再尋找不含該類型IgG抗體的相應抗原的供血者來解決。

［1］ 林瓊琳，李建華，彭燕，等.1038例患者輸血前不規(guī)則抗體篩檢分析［J］.臨床輸血與檢驗，2005，7(3):200 －201.

［2］ 葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.南京:東南大學出版社，2006:100 －102.

［3］ 王志紅，陳善華，馬紅麗，等.探討疑難配血三步法在實際工作中的應用［J］.中國輸血雜志，2011，24(3):246 －247.

［4］ 朱莉，扎洛.49例交叉配血不合的分析及意義［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2011，38(10):1919 －1921.

［5］ 陳迎榮.微柱凝膠技術(shù)在交叉配血中的應用2586例分析［J］.中國誤診學雜志，2011，11(3):647 －648.

［6］ 龔衛(wèi)鋒，白艷麗.影響ABO血型鑒定結(jié)果的因素分析［J］.山西醫(yī)藥雜志，2010，39(12):1176 －1177.

［7］ 夏琳，楊江存，謝偉.臨床輸血診斷技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:75－76.