風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體測(cè)定的影響因素及質(zhì)量控制

宋 康 熊建明 劉思寨

(四川省雅安市疾病預(yù)防控制中心 625000)

風(fēng)疹是一種呼吸道傳染病，所致疾病分為兩種:風(fēng)疹和先天性風(fēng)疹綜合癥(CRS)，后者包括白內(nèi)障、心臟疾病和耳聾等［1］，孕婦在懷孕早期感染風(fēng)疹影響胎兒發(fā)育［2］，因此，風(fēng)疹的早期血清學(xué)檢測(cè)非常重要，檢測(cè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體的方法主要有酶聯(lián)免疫法(抗體捕獲ELISA法)，該法靈敏度高、特異性強(qiáng)，但在實(shí)際操作中有諸多干擾因素，為了得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，必須進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒由珠海海泰生物制藥有限公司生產(chǎn)，試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2 質(zhì)量控制陰性對(duì)照值介于0-0.15，陽性對(duì)照值介于0.3-1.8，臨界對(duì)照平均值介于0.15-0.8，證明實(shí)驗(yàn)成立;否則試驗(yàn)結(jié)果無效，重新試驗(yàn)。

1.3 結(jié)果判定樣品A值。

2 結(jié)果

影響試驗(yàn)因素及質(zhì)量控制

2.1 標(biāo)本

2.1.1 標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，因送檢時(shí)間與IgM抗體檢出率密切相關(guān)［3］。

2.1.2 標(biāo)本要避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血、高血脂和細(xì)菌污染，樣本溶血:以辣根過氧化酶為標(biāo)記的elisa測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果［4］，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血一樣，也可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾檢測(cè)結(jié)果［4］。

2.1.3 血清標(biāo)本2℃ -8℃下保存一周，若長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)置于-70℃保存。

2.1.4 要避免標(biāo)本反復(fù)凍融［5］，因反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。

2.2 實(shí)驗(yàn)過程

2.2.1 試劑盒使用前先在室溫平衡20min以上，以便在溫育時(shí)很快達(dá)到反應(yīng)要求溫度，避免弱陽性標(biāo)本產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

2.2.2 加樣時(shí)標(biāo)本要混勻，應(yīng)將液體及標(biāo)本加在孔底，不外濺，避免加在孔壁上部，加樣量要準(zhǔn)確。

2.2.3 洗板在ELISA試驗(yàn)中洗板非常關(guān)鍵，如果洗板不干凈將直接影響測(cè)定結(jié)果。

2.2.4 溫育過高過低都會(huì)影響試驗(yàn)，基層實(shí)驗(yàn)室有時(shí)用孵箱代替水浴鍋，冬天溫度低，開關(guān)門箱內(nèi)溫度迅速降低，孵箱內(nèi)溫度達(dá)不到37℃，測(cè)定時(shí)臨界對(duì)照平均值常常低于0.15，試驗(yàn)不成立，因此溫育要在水浴鍋里進(jìn)行。

2.2.5 酶標(biāo)儀測(cè)定測(cè)定前先用棉簽把酶標(biāo)板底部的水珠擦干凈，檢查各孔是否有氣泡，否則測(cè)定值會(huì)變高，有可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

2.3 儀器

2.3.1 移液器定期進(jìn)行校正。

2.3.2 水浴鍋要有外部溫度計(jì)對(duì)儀器溫度進(jìn)行校準(zhǔn)。

2.3.3 洗板機(jī)定期檢查加樣孔是否暢通，每次用完后立即用蒸餾水反復(fù)進(jìn)行內(nèi)部沖洗。

2.4 質(zhì)量控制

2.4.1 質(zhì)控圖法常規(guī)質(zhì)控圖(Levey-Jennings)將IHC血清放在常規(guī)樣本中，進(jìn)行20次檢測(cè)，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。并繪制質(zhì)控圖。一般不直接使用IHC檢測(cè)OD值，而使用IHC的OD值與該次檢測(cè)的Cutoff的比值。如換算成單位，則直接使用IHC的單位濃度來計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。IHC“失控”的該次檢測(cè)結(jié)果無效，要對(duì)該次試驗(yàn)所有的標(biāo)本進(jìn)行重新檢測(cè)。

常規(guī)質(zhì)控圖的優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單易行，便于基層使用 只需一個(gè)質(zhì)控。

常規(guī)質(zhì)控圖的缺點(diǎn):需要進(jìn)行20次IHC的檢測(cè)，才能做質(zhì)控圖只有一個(gè)質(zhì)控，規(guī)則簡(jiǎn)單。

2.4.2 “即刻法”質(zhì)控結(jié)果 即刻法質(zhì)控使用:先將IHC的測(cè)定值與Cutoff比值從小到大排列。計(jì)算均值(X)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。利用公式計(jì)算SDI上限和SDI下限值。將SDI上限、SDI下限值與SDI值中的數(shù)字比較。當(dāng)SDI上限值和SDI下限值＜n2SD時(shí)，表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測(cè)定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算當(dāng)SDI上限和SDI下限有一值處于n2SD和n3SD值之間時(shí)，說明該值在2SD～3SD范圍，處于“告警”狀態(tài)。當(dāng)SDI上限和SDI下限有一值＞n3SD時(shí)，說明該值已在3SD范圍之外，屬“失控”。IHC“失控”的該次檢測(cè)結(jié)果無效，要對(duì)該次試驗(yàn)所有的標(biāo)本進(jìn)行重新檢測(cè)。

即刻法質(zhì)控有三個(gè)以上的數(shù)值就可以判斷是否有異常值的存在［7］，但前三次結(jié)果對(duì)后續(xù)質(zhì)控結(jié)果影響較大［8］。

2.4.3 每次試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各一孔，臨界對(duì)照三孔、內(nèi)部質(zhì)控一孔。

2.5 人員素質(zhì)

2.5.1 檢驗(yàn)人員要定期接受培訓(xùn)，以提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。綜上所述，風(fēng)疹測(cè)定影響因素較多，故在實(shí)際操作中要加強(qiáng)質(zhì)量管理，認(rèn)真避免或減少影響因素，力求結(jié)果準(zhǔn)確，為疾病的診斷提供可靠的依據(jù)。

［1］Chapter 12.Rubella，in Epidemiology and Prevention of Vaccine-Preventable Diseases.2004，Centers for Disease Control and Prevention:Atlanta.p.145-158.

［2］Robertson，s.E，et al，Rubella and congental rubella syndronae:global update，Rev Panam Salud Publica，2003，14(s)p.306-15.

［3］李瑞忠，大理州2000-2001年麻疹實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果分析.中國初級(jí)衛(wèi)生保健，2002，16(增刊):49-51.

［4］岳獻(xiàn)榮，孟毓.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)各環(huán)節(jié)中應(yīng)注意問題［J］.中國臨床研究，2010.23(2):150-151.

［5］李會(huì)英.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)影響因素的分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4(10):985-986.

［6］周微雅、盧秋維，不同條件對(duì)酶聯(lián)吸附試驗(yàn)的影響［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2010，17.(8):744.

［7］王玉蘭.臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)［M］.北京:人們衛(wèi)生出版社出版，2003，253-270.

［8］賴玉潔.“即刻法”室內(nèi)質(zhì)控的局限性［J］.中國輸血雜志，2004，17(6):442.