宮內(nèi)感染致腦損傷對(duì)仔鼠認(rèn)知發(fā)育和海馬神經(jīng)發(fā)生的影響*

江佩芳， 朱 濤， 楊翠微， 高 峰， 顧偉忠， 袁天明， 俞惠民△

(1浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，浙江 杭州 310003； 2浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院ICU，浙江 杭州 310016)

妊娠期宮內(nèi)感染導(dǎo)致的胎兒炎癥反應(yīng)綜合征是造成早產(chǎn)和早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷(white matter damage, WMD)的最常見(jiàn)原因，是兒童認(rèn)知功能發(fā)育障礙的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素[1]。WMD臨床病理特點(diǎn)主要是腦白質(zhì)出現(xiàn)彌漫的反應(yīng)性星形細(xì)胞膠質(zhì)化、成髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷和腦室周圍白質(zhì)軟化(periventri-cular leukomalacia, PVL)[2]。它將會(huì)影響神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，造成語(yǔ)言、視覺(jué)、空間、記憶和注意力等認(rèn)知功能損害。因此，宮內(nèi)感染與兒童認(rèn)知功能發(fā)育密切相關(guān)。

炎癥反應(yīng)猶如一把雙刃劍，其過(guò)程中釋放的一些細(xì)胞因子可以增加血腦屏障通透性，引起腦水腫，加重腦損傷，抑制神經(jīng)發(fā)生[3]。還有一些細(xì)胞因子可以刺激神經(jīng)發(fā)生，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)缺氧缺血能誘導(dǎo)海馬神經(jīng)前體細(xì)胞增殖，神經(jīng)干細(xì)胞向損傷區(qū)域遷移，分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞；并功能性整合到海馬神經(jīng)環(huán)路中，促進(jìn)神經(jīng)軸突、樹突發(fā)育，以及突觸生成和功能性修飾[4]。雖然缺氧缺血可以誘導(dǎo)海馬神經(jīng)發(fā)生，但是宮內(nèi)感染與神經(jīng)發(fā)生的相關(guān)性研究未見(jiàn)報(bào)道。我們旨在確證宮內(nèi)感染致仔鼠腦損傷對(duì)認(rèn)知發(fā)育和海馬神經(jīng)發(fā)生的影響，為這類患兒的病理學(xué)和治療學(xué)研究提供理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)健康成年Sprague-Dawley孕鼠(胎齡15 d)，購(gòu)自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重400～450 g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為造模組(8只)和對(duì)照組(7只)。繁殖后的2組新生雄性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為宮內(nèi)感染組(35只)和對(duì)照組(35只)。實(shí)驗(yàn)期間，室溫控制在(24±1) ℃，濕度控制在60%左右，大鼠自由飲食、飲水，晝夜周期12 h/12 h(光照時(shí)間為8：00-20：00)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中人道主義對(duì)待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，盡量減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用量，設(shè)法在處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)使其少受痛苦。

2 方法

2.1宮內(nèi)感染模型制備 參照本課題組先前的成功造模方法[5]，取胎齡15 d 的Sprague-Dawley孕鼠15只，隨機(jī)分為2組：(1) 造模組(n=8)予腹腔內(nèi)注射2%戊巴比妥鈉2 mL/kg，麻醉后于左右兩側(cè)宮頸內(nèi)各注射大腸桿菌(E.coli)稀釋液0.2 mL，術(shù)后置于清潔籠內(nèi)，常規(guī)喂養(yǎng)；(2) 對(duì)照組(n=7)于麻醉后左右兩側(cè)宮頸內(nèi)各注射無(wú)菌生理鹽水0.2 mL。

根據(jù)文獻(xiàn)[6]的標(biāo)準(zhǔn)，凡宮內(nèi)感染組鼠的子宮及胎盤內(nèi)血管充血、水腫，并見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)者判斷為宮內(nèi)感染。

待孕鼠自然分娩(胎齡約20 d)，2組雄性仔鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為宮內(nèi)感染組(E.coli)和對(duì)照組(control)。

2.2Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮DMS-2系統(tǒng)由浙江大學(xué)紫金港動(dòng)物房中心實(shí)驗(yàn)室提供，包括一個(gè)圓形不銹鋼水池，直徑為120 cm，高60 cm。池壁上標(biāo)有4個(gè)不同符號(hào)，將水池等分為4個(gè)象限，代表4個(gè)入水點(diǎn)。目標(biāo)象限的中央放置一高度50 cm直徑10 cm的圓形隱藏平臺(tái)，平臺(tái)低于水面1 cm，水溫保持在(22±0.5) ℃。預(yù)先在水池中注入清水，加入炭素墨水使池水變?yōu)椴煌该鞯暮谏噪[藏平臺(tái)并便于攝像。迷宮上方安置帶有顯示系統(tǒng)的攝像機(jī)，計(jì)算機(jī)自動(dòng)跟蹤計(jì)時(shí)并同步記錄大鼠的游泳軌跡，Morris水迷宮數(shù)據(jù)采集和分析軟件記錄相關(guān)數(shù)據(jù)及圖像結(jié)果。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間水池、光源、鼠籠等實(shí)驗(yàn)室各物件的位置保持不變，實(shí)驗(yàn)在隔音的房間內(nèi)進(jìn)行。

2.2.1迷宮適應(yīng)訓(xùn)練和游泳能力檢驗(yàn) 正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前1 d，撤去平臺(tái)，選擇池壁一固定點(diǎn)，讓大鼠面向池壁入水，自由游泳2 min，并錄下游泳軌跡。目的是讓大鼠適應(yīng)環(huán)境，并對(duì)大鼠游泳能力進(jìn)行初步檢驗(yàn)，對(duì)明顯異常者予以剔除。

2.2.2定位航行實(shí)驗(yàn) 用于檢測(cè)大鼠的近期學(xué)習(xí)記憶能力。2組28日齡大鼠(n=10)連續(xù)接受5 d訓(xùn)練，每天將大鼠面向池壁分別從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中，每次實(shí)驗(yàn)以120 s為限，記錄動(dòng)物尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間即逃避潛伏期(escape latency, EL)，以爬上平臺(tái)所需時(shí)間作為學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)。若設(shè)定時(shí)間內(nèi)未找到平臺(tái)，計(jì)算機(jī)停止跟蹤，記錄時(shí)間為120 s，未找到平臺(tái)的動(dòng)物由實(shí)驗(yàn)者將其引上平臺(tái)。每次訓(xùn)練間隔30 s，即做好一次訓(xùn)練后讓大鼠在平臺(tái)上休息停留30 s后再繼續(xù)下一次訓(xùn)練。當(dāng)天訓(xùn)練完成后，迅速將動(dòng)物洗凈擦干，置于加熱器旁，以防動(dòng)物低體溫。計(jì)算每天2組大鼠4次逃避潛伏期的平均值。

2.2.3遠(yuǎn)期記憶保持實(shí)驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，休息5 d，即水迷宮的第10天，再對(duì)全部大鼠進(jìn)行一次水迷宮測(cè)試，方法同前，測(cè)試其遠(yuǎn)期記憶保持能力。

2.3標(biāo)本制備 2組仔鼠隨機(jī)分組，每組每時(shí)點(diǎn)5只。從8：00開(kāi)始給1 d齡大鼠腹腔注射5-溴-2’-脫氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine, BrdU； 50 mg/kg, Sigma)，每天2次，連續(xù)注射3 d，標(biāo)記海馬S期先祖細(xì)胞，以反映齒狀回細(xì)胞的增殖情況。另外于生后1 d齡開(kāi)始連續(xù)腹腔注射相同劑量BrdU 7 d，待28 d齡時(shí)行細(xì)胞存活分析。大鼠斷頭處死，取出腦組織先進(jìn)行大體解剖學(xué)觀察，再將腦組織置于4%多聚甲醛中固定24～48 h后石蠟包埋，固定后冠狀切面連續(xù)切片每隔3張取1張切片組成1套，每套切片約5張，每片厚4 μm，然后對(duì)上述切片進(jìn)行TUNEL和免疫組化分析。

2.4TUNEL分析 對(duì)2組標(biāo)本進(jìn)行TUNEL染色，實(shí)驗(yàn)操作參照試劑說(shuō)明書進(jìn)行。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，乙醇水化，置3% H2O2中孵育15 min，蛋白酶K消化液作用20 min，加入TUNEL反應(yīng)混合物，于37 ℃烤箱中孵育60 min，滴加轉(zhuǎn)化劑POD，于37 ℃烤箱中孵育30 min，DAB顯色20 min，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。顯微鏡下觀察切片中細(xì)胞形態(tài)，TUNEL染色陽(yáng)性的凋亡細(xì)胞呈棕色。倒置顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野觀察陽(yáng)性細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取平均值，計(jì)算出細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)=(凋亡細(xì)胞數(shù)÷細(xì)胞總數(shù))×100%。

2.5Caspase-3免疫組化分析 按照SABC免疫組化試劑盒進(jìn)行操作。切片蒸餾水新鮮配制3%H2O2室溫10 min，PBS洗3次。滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min甩去多余液體不洗。滴加1∶100稀釋的Ⅰ抗，37 ℃1 h，4 ℃過(guò)夜。復(fù)溫l h，PBS洗3次，滴加生物素化Ⅱ抗，37 ℃ 20 min，PBS洗3次。滴加SABC，37 ℃ 30 min，PBS洗4次，DAB顯色。乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹酯封片。陰性對(duì)照用PBS代替Ⅰ抗。倒置顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野觀察陽(yáng)性細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取平均值。

2.6BrdU免疫組化 切片常規(guī)脫蠟、透明至水化。切片置于0.01 mol/L枸櫞酸鈉溶液(pH 6.0)高溫高壓抗原修復(fù)1 min，0.025% PBST(含Triton X-100)漂洗3次。3% H2O2室溫下消化10 min以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，0.025% PBST漂洗3次。羊血清37 ℃封閉20 min。以小鼠抗BrdU抗體(1∶50, Santa Cruz)37 ℃孵育1 h；0.025% PBST漂洗3次。滴加Envision 檢測(cè)試劑，37 ℃孵育1 h；0.025% PBST漂洗3次。室溫下DAB顯色，鏡控2 min。蘇木素輕度復(fù)染，脫水、透明、封片。胞漿內(nèi)呈棕黃色染色為BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，選取海馬DG區(qū)，200倍視野下計(jì)數(shù)每0.01 mm2面積中BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，每張切片計(jì)數(shù)5個(gè)視野，取平均值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。細(xì)胞增殖分析、TUNEL分析和caspase-3免疫組化分析采用雙因素方差分析(two-way ANOVA)，以Tukey法進(jìn)行組間的兩兩比較；定位航行實(shí)驗(yàn)和遠(yuǎn)期記憶保持實(shí)驗(yàn)采用重復(fù)測(cè)量方差分析(one-way repeated measures ANOVA)，以Tukey法進(jìn)行組間的兩兩比較；細(xì)胞存活分析采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 宮內(nèi)感染致仔鼠腦損傷的大體解剖學(xué)觀察

空白對(duì)照組雙側(cè)大腦對(duì)稱，飽滿，腦組織表面血管清晰，腦區(qū)結(jié)構(gòu)完整。宮內(nèi)感染組雙側(cè)大腦對(duì)稱，腦組織輕度萎縮，表面血管增粗、紊亂，腦區(qū)結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)壞死、液化、空洞現(xiàn)象，見(jiàn)圖1。

Figure 1. Effect of intrauterine infection on anatomy observation of brain.

2 宮內(nèi)感染對(duì)仔鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響

TUNEL染色分析顯示宮內(nèi)感染組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，另一凋亡標(biāo)志物caspase-3染色顯示caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

3 宮內(nèi)感染對(duì)仔鼠認(rèn)知功能的影響

3.1游泳能力的檢測(cè) 正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前1 d，撤去平臺(tái)，選擇池壁一固定點(diǎn)，讓大鼠面向池壁入水，自由游泳2 min，并錄下游泳軌跡。各組大鼠第l d通過(guò)測(cè)試，全部大鼠游泳能力均正常。

3.2定位航行實(shí)驗(yàn) 宮內(nèi)感染組游泳軌跡較對(duì)照組雜亂，重復(fù)測(cè)量方差分析顯示組別因素(group)、時(shí)間因素(day)以及時(shí)間和組別(day*group)的交互作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。同一時(shí)間組間比較結(jié)果顯示，宮內(nèi)感染組第1天到第4天的逃避潛伏期均顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，第5天2組的逃避潛伏期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，說(shuō)明宮內(nèi)感染可以影響仔鼠的近期學(xué)習(xí)記憶能力，見(jiàn)圖3、表1。

3.3遠(yuǎn)期記憶保持實(shí)驗(yàn) 遠(yuǎn)期記憶保持實(shí)驗(yàn)從第10 d開(kāi)始，宮內(nèi)感染組游泳軌跡較對(duì)照組雜亂，重復(fù)測(cè)量方差分析顯示組別因素(group)、時(shí)間因素(day)以及時(shí)間和組別(day*group)的交互作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。宮內(nèi)感染組逃避潛伏期較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，說(shuō)明宮內(nèi)感染可以影響仔鼠的遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力，見(jiàn)圖4、表2。

Figure 3. Effect of intrauterine infection on offspring’s learning and memory ability. Figure shows the trace of place-navigation test from control group and E. coli group at different time points.

表1 2組大鼠定位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期比較

Figure 4. Effect of intrauterine infection on offspring’s long-term memory ability. Figure shows the trace of long-term memory test from control group and E. coli group at different time points.

表2 2組大鼠遠(yuǎn)期記憶保持實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期比較

4 宮內(nèi)感染對(duì)仔鼠海馬神經(jīng)發(fā)生的影響

細(xì)胞增殖分析表明宮內(nèi)感染組仔鼠于3、7和14日齡時(shí)海馬齒狀回BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，于7日齡時(shí)達(dá)高峰。細(xì)胞存活分析顯示28日齡時(shí)宮內(nèi)感染組與對(duì)照組仔鼠海馬齒狀回BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)圖5。

Figure 5. Effect of intrauterine infection on proliferation and survival of newborn cells in the dentate gyrus. The cells with BrdU (brown stained) that clearly localized in the nucleus were counted as BrdU-labeled cells. A: representative microphotographs of BrdU-labeled cells and quantification of BrdU-labeled cells during postnatal 28 days in the control and E. coli rats； B：representative microphotographs of BrdU-labeled cells and quantification of total BrdU-labeled cells at postnatal day 28 in the control and E. coli rats. Scale bars=200 μm. *P<0.05 vs control.

討 論

學(xué)習(xí)記憶是大腦的高級(jí)功能，學(xué)習(xí)記憶及認(rèn)知功能減退是腦損傷導(dǎo)致智力低下的一個(gè)重要標(biāo)志。海馬結(jié)構(gòu)完整性和突觸可塑性對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶能力的正常發(fā)育非常重要[7]。研究認(rèn)為新生期缺氧缺血性腦損傷主要累及皮層、海馬，出現(xiàn)神經(jīng)元腫脹變性、大量核固縮、核碎片、空泡形成和排列紊亂，進(jìn)而造成近期、遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶功能缺陷，遺留神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[8]。雖然缺氧缺血性腦損傷與認(rèn)知功能缺陷的報(bào)道較多，但關(guān)于宮內(nèi)感染造成腦損傷與認(rèn)知發(fā)育的研究罕見(jiàn)報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染可導(dǎo)致仔鼠腦組織萎縮，但腦區(qū)結(jié)構(gòu)保持完整。結(jié)合前期研究發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染造成腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)稀疏、呈篩網(wǎng)狀改變，少數(shù)出現(xiàn)凝固性壞死和囊狀病變。由此我們推斷腦白質(zhì)可能是宮內(nèi)感染腦損傷中最易受累的部位。星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基本骨架，合成和分泌眾多的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、趨化因子和細(xì)胞因子，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)信息轉(zhuǎn)導(dǎo)與免疫反應(yīng)[9]。輕度星形膠質(zhì)細(xì)胞活化被證實(shí)有神經(jīng)保護(hù)作用，而過(guò)度活化可導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，垂死的星形膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)神經(jīng)毒性作用，進(jìn)一步殺死鄰近細(xì)胞[10]。因此，我們推測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦白質(zhì)損傷的病理生理機(jī)制中扮演了重要角色，宮內(nèi)感染后過(guò)度活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞可影響海馬神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)支持及細(xì)胞功能，造成神經(jīng)細(xì)胞體積縮小、數(shù)量減少并最終導(dǎo)致大腦萎縮。

宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷的病理生理機(jī)制復(fù)雜，與認(rèn)知發(fā)育障礙的相關(guān)機(jī)制尚未完全闡明，有學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞凋亡可能是系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)中的重要機(jī)制之一[11]。本研究發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染后仔鼠海馬神經(jīng)元大量凋亡，結(jié)合前期研究發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染后仔鼠腦內(nèi)細(xì)胞因子，一氧化氮合成及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)增加，我們推斷宮內(nèi)感染促發(fā)一系列炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘發(fā)炎癥風(fēng)暴，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。神經(jīng)細(xì)胞凋亡導(dǎo)致海馬神經(jīng)元數(shù)量減少、功能受累，海馬神經(jīng)軸突、樹突發(fā)育不良、突觸生成受阻和功能性修飾受累[12]。所以，宮內(nèi)感染后仔鼠的近期及遠(yuǎn)期記憶保持能力均顯著下降，可能與神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。

本研究還發(fā)現(xiàn)隨著游泳訓(xùn)練時(shí)間延長(zhǎng)，2組逃避潛伏期的差距逐漸縮短，提示宮內(nèi)感染腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞可能存在一定的自身修復(fù)能力。多年來(lái)研究者們一直認(rèn)為神經(jīng)元不能再生，但隨著干細(xì)胞研究的深入，發(fā)現(xiàn)成年哺乳動(dòng)物腦內(nèi)存在具有多向分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞和持續(xù)的神經(jīng)發(fā)生現(xiàn)象，為補(bǔ)充因損傷、衰老而喪失的神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞提供來(lái)源[13-14]。雖然炎癥損傷與神經(jīng)發(fā)生的關(guān)系目前還不明確，但Bakirci等[15]報(bào)道在膿毒癥模型中發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)發(fā)生現(xiàn)象。本研究也發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染導(dǎo)致海馬神經(jīng)元凋亡的同時(shí)也能促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生。我們推測(cè)炎癥物質(zhì)在炎癥亞急性期后作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，作用于神經(jīng)發(fā)生微環(huán)境，調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、遷移和分化，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，這種神經(jīng)自身修復(fù)的潛能可能是腦白質(zhì)損傷后認(rèn)知功能障礙得到一定程度改善的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。但是我們發(fā)現(xiàn)早期增殖的細(xì)胞大部分不能持續(xù)存活，推測(cè)可能沒(méi)有適當(dāng)?shù)奈h(huán)境刺激，神經(jīng)發(fā)生得不到適當(dāng)調(diào)節(jié)，這些增殖的神經(jīng)干細(xì)胞互相競(jìng)爭(zhēng)，一部分因營(yíng)養(yǎng)耗竭而死亡，一部分不能正常分化為成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元，這可能是宮內(nèi)感染后仔鼠出現(xiàn)認(rèn)知發(fā)育障礙后遺癥的重要原因。

雖然宮內(nèi)炎癥反應(yīng)造成腦損傷后可以促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生，但是炎癥反應(yīng)何時(shí)以何種強(qiáng)度刺激有利于神經(jīng)發(fā)生，以及如何通過(guò)調(diào)控炎癥反應(yīng)來(lái)影響損傷組織修復(fù)和神經(jīng)功能恢復(fù)等問(wèn)題還不明確。目前研究發(fā)現(xiàn)cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，在神經(jīng)元再生、突觸形成及學(xué)習(xí)記憶等方面具有重要的調(diào)節(jié)作用，是細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路的一種關(guān)鍵成分。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CREB基因敲除小鼠多死于圍生期，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元大量缺失有關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt信號(hào)通路可參與調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、神經(jīng)前體細(xì)胞遷移、分化以及突觸形成，保持神經(jīng)干細(xì)胞的維持及其分化的平衡。但是PI3K/Akt信號(hào)通路與CREB是否共同參與宮內(nèi)感染后的神經(jīng)發(fā)生，這三者之間的關(guān)系目前尚未明確。因此，宮內(nèi)感染后神經(jīng)發(fā)生的相關(guān)分子機(jī)制研究是本課題組今后工作的研究方向。對(duì)這一過(guò)程的探討，無(wú)疑將為研究宮內(nèi)感染后腦損傷患兒認(rèn)知發(fā)育障礙的治療提供新的手段。

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