Chemerin在COPD患者發(fā)病機(jī)制中的作用

符丹丹，顧延會(huì)，丁 婷，饒習(xí)敏，歐陽瑤

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸一科，貴州 遵義 563099)

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)是一種以呼氣氣流受限為特征的慢性氣道炎癥性疾病，是目前全球第4大死亡原因，且患病率逐年上升[1]。當(dāng)患者出現(xiàn)咳嗽、咳痰、呼吸困難比平時(shí)加重或痰量增加或?yàn)辄S痰時(shí)，提示患者進(jìn)入了急性加重期，即慢性阻塞性肺疾病急性加重期(Acute exacerbation of chronic obstuctive pulmonary disease，AECOPD)。已經(jīng)證實(shí)，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等炎癥細(xì)胞參與了AECOPD的發(fā)病過程[2]。Chemerin是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪因子，可參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)[3]。本研究旨在檢測(cè)AECOPD患者外周血中Chemerin和高

敏C反應(yīng)蛋白(high sensitivity C Reactive Protein,hsCRP)的水平變化，分析探討Chemerin在COPD發(fā)病過程中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象 選取2012年8月至2013年5月在遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸一科住院的AECOPD患者50例，其中男42例，女8例，年齡57～73歲(平均68.2歲)；同一批住院患者治療緩解后則進(jìn)入COPD緩解期組，COPD入選標(biāo)準(zhǔn)符合2011年GOLD指南。選取體檢科健康體檢對(duì)象50例作為正常對(duì)照組，其中男39例，女11例，年齡51～76歲(平均65.4歲)。本研究經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，并取得研究對(duì)象的知情同意。

1.2 方法 所有樣本采集均要求研究對(duì)象空腹平臥至少8h，一般于清晨使用EDTA-K2采血管收集靜脈血4mL，3000r/min離心5min分離血漿，分成小份于-80℃ 保存后擇期集中檢測(cè)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血漿Chemerin(Chemerin ELISA 試劑盒購自美國(guó)B&D公司)。采血同一時(shí)間另送血標(biāo)本于我院檢驗(yàn)科測(cè)定白細(xì)胞計(jì)數(shù)、hsCRP的水平。

2 結(jié)果

2.1 基礎(chǔ)資料比較 如表1，3組研究患者的年齡、性別和吸煙指數(shù)比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但無論AECOPD組還是緩解期肺功能均低于正常對(duì)照組(P<0.05)，而COPD患者緩解期肺功能較急性發(fā)作期改善，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

項(xiàng)目正常對(duì)照組AECOPD組COPD緩解組年齡65.4±12.7168.2±10.3568.2±10.35性別(男/女)39/1142/842/8吸煙指數(shù)(年/支)19.7/1621.2/1721.2/17FEV1(%)95.83±5.7257.49±9.36*72.37±8.56*△FEV1/FVC81.30±11.2465.41±7.28*71.17±5.43*△

*與正常對(duì)照組比較，P<0.05；△與AECOPD組比較，P<0.05。

2.2 3組患者外周血炎癥標(biāo)志物和Chemerin水平比較 AECOPD患者多合并嚴(yán)重的感染，因此具有明顯的炎癥反應(yīng)。AECOPD患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和hsCRP濃度明顯高于正常對(duì)照組和COPD，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且隨著COPD病情好轉(zhuǎn)，由急性發(fā)作期轉(zhuǎn)為緩解期后，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和hsCRP水平明顯降低，與正常對(duì)照組無差異，提示嚴(yán)重反應(yīng)減輕。同時(shí)，外周血Chemerin濃度水平也具有相似的變化趨勢(shì)，即AECOP患者外周血Chemerin濃度明顯高于正常對(duì)照組和CDOP緩解期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而隨著COPD緩解，Chemerin水平明顯下降，基本達(dá)到正常人水平(見表2)。

2.3 COPD患者外周血Chemerin和hsCRP相關(guān)性分析 相關(guān)性分析研究顯示，在COPD患者中，外周血Chemerin濃度與炎癥標(biāo)志物hsCRP濃度呈正相關(guān)(見圖1，r= 0.659，P<0.05)。

項(xiàng)目正常對(duì)照組AECOPD組COPD緩解期組白細(xì)胞(×109)6.82±5.6312.33±7.82*7.45±10.49hsCRP(ng/mL)4.35±8.2639.47±12.58*11.64±9.71Chemerin(ng/mL)198.25±61.48326.15±72.17*217.47±54.96

*與COPD緩解期及正常對(duì)照組比較，P<0.05。

圖1 外周血Chemerin濃度與炎癥標(biāo)志物hsCRP濃度變化的比較

3 討論

2003年，Wittamer等在卵巢癌患者腹腔積液中分離獲得Chemerin。Chemerin具有趨化白細(xì)胞的功能，其受體為ChemR23(chemokine like receptorl，CMKLR1)屬于G蛋白偶聯(lián)受體，主要分布在漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells，DCs)和巨噬細(xì)胞膜上[4-5]。肺臟、淋巴結(jié)和脾臟等均已發(fā)現(xiàn)存在豐富的ChemR23。Chemerin是由大部分機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生的，主要是以其前體形式存在proChemerin，并分泌到細(xì)胞外。Chemerin-ChemR23通路在炎癥反應(yīng)、脂肪代謝等方面都具有重要功能。當(dāng)機(jī)體受到炎癥刺激時(shí)，Chemerin發(fā)生活化，其通過與pDCs和巨噬細(xì)胞膜上的ChemR23特異性結(jié)合，使未成熟DCs(imDCs)通過血管內(nèi)皮到達(dá)炎癥反應(yīng)部位[6]，在炎癥因子的作用下，imDCs逐漸成熟并發(fā)揮抗原遞呈作用，即將抗原遞呈給T細(xì)胞，引發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答。

本課題組既往研究發(fā)現(xiàn)，COPD患者誘導(dǎo)痰中DCs含量明顯增多，且與肺功能嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，由此推測(cè)DCs參與了COPD的發(fā)病過程，并啟動(dòng)了機(jī)體的免疫應(yīng)答。這些結(jié)果與國(guó)外報(bào)道結(jié)果類似[7]。但DCs是如何到達(dá)炎癥部位發(fā)揮作用的一直未能闡明。有研究發(fā)現(xiàn)[8]，采用ChemR23基因缺乏大鼠構(gòu)建的COPD動(dòng)物模型，其支氣管肺泡灌洗液(Bronchotracho Alveolar Larvage，BAL)中中性粒細(xì)胞、DCs及CD4+ T細(xì)胞數(shù)量明顯下降，且Chemerin表達(dá)亦顯著下降，推測(cè)Chemerin在炎癥反應(yīng)早期即參與了COPD的發(fā)病過程，提示Chemerin可能參與連接特異性免疫應(yīng)答及非特異性免疫應(yīng)答的重要環(huán)節(jié)。本研究結(jié)果顯示，AECOPD患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和hsCRP濃度明顯高于正常對(duì)照組和COPD；隨著COPD病情好轉(zhuǎn)，由急性發(fā)作期轉(zhuǎn)為緩解期后，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和hsCRP水平明顯降低，與正常對(duì)照組無差異，提示嚴(yán)重反應(yīng)減輕。同時(shí)，外周血Chemerin濃度水平也具有相似的變化趨勢(shì)，即AECOPD患者外周血Chemerin濃度明顯高于正常對(duì)照組和COPD緩解期患者，而隨著COPD緩解，Chemerin水平明顯下降，基本達(dá)到正常人水平，這表明，Chemerin參與可能參與COPD急性發(fā)作的病理過程。

眾所周知，白細(xì)胞能夠消滅入侵機(jī)體的病原體，并產(chǎn)生抗體、參與機(jī)體免疫反應(yīng)，是機(jī)體抵御病原體入侵的主要防線。作為炎癥反應(yīng)標(biāo)志物hsCRP能夠提高白細(xì)胞的吞噬能力，與其受體結(jié)合會(huì)產(chǎn)生一系列的細(xì)胞因子造成組織損傷。本研究同時(shí)測(cè)定了白細(xì)胞及hsCRP在AECOPD、COPD緩解期及正常對(duì)照組中濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AECOPD組白細(xì)胞及CRP含量均高于COPD緩解期及正常對(duì)照組。通常認(rèn)為，hsCRP是早期感染的檢測(cè)指標(biāo)之一，本研究在AECOPD患者外周血中hsCRP含量明顯升高，且白細(xì)胞亦同時(shí)增高，同時(shí)檢測(cè)Chemerin濃度在AECOPD顯著增加，并與hsCRP濃度呈正相關(guān)，說明Chemerin確實(shí)參與了早期炎癥反應(yīng)。COPD的發(fā)病機(jī)制中炎癥是最主要的，當(dāng)COPD發(fā)生急性加重時(shí)往往發(fā)生了嚴(yán)重的肺部感染，這時(shí)炎癥細(xì)胞可吸引proChemerin到達(dá)炎癥部位，經(jīng)過脫氨基等一系列反應(yīng)Chemerin去前體化，開始發(fā)揮其趨化imDCs的功能，使imDCs到達(dá)炎癥部位，逐漸發(fā)揮其抗原遞呈作用。

總之，本研究結(jié)果證實(shí)在AECOPD患者，外周血中Chemerin濃度同炎癥標(biāo)志物一樣明顯升高，提示Chemerin可能參與了COPD的炎癥過程。但Chemerin水平升高是繼發(fā)于炎癥之后，還是于炎癥早期即升高，其與COPD的關(guān)系以及對(duì)COPD患者預(yù)后意義，尚不明確，需要進(jìn)一步深入研究。

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