康萊特注射液對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌化療患者免疫功能的影響

鄧新娜,趙淑芳,趙海靜,閆永龍,賀麗亞,張洪珍

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

康萊特注射液對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌化療患者免疫功能的影響

鄧新娜,趙淑芳,趙海靜,閆永龍,賀麗亞,張洪珍

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

目的 探討晚期非小細(xì)胞肺癌患者血中T細(xì)胞亞群、CD4+CD25+調(diào)解性T細(xì)胞(Treg)及免疫球蛋白的改變,觀察康萊特注射液(KLT)聯(lián)合化療對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響。方法 將68例晚期非小細(xì)胞肺癌患者隨機(jī)分為2組，對(duì)照組應(yīng)用多西他賽、順鉑聯(lián)合化療,不予康萊特及其他提高免疫力的治療措施；治療組同時(shí)給予康萊特注射液200 mL靜點(diǎn),連用14 d。2組均以21 d為1個(gè)周期,2個(gè)周期后評(píng)價(jià)T細(xì)胞亞群及免疫球蛋白的變化情況。另選30例健康人作為正常對(duì)照組。結(jié)果 化療前對(duì)照組及治療組患者T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+比例及CD4+CD25+Treg與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)?；熀髮?duì)照組免疫球蛋白、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及治療組CD4+CD25+Treg與化療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)?；熀髮?duì)照組與治療組CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值、IgG比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 康萊特注射液可保護(hù)晚期非小細(xì)胞肺癌患者的免疫功能,降低免疫耐受。

非小細(xì)胞肺癌；康萊特注射液；免疫功能；免疫耐受；化療

肺癌是我國(guó)及世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)也是惡性程度最高的惡性腫瘤之一，在我國(guó),每年有將近50萬(wàn)的新發(fā)肺癌患者，其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌的80%～85%。免疫功能低下和免疫耐受是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要原因之一，目前臨床上常規(guī)的治療手段如手術(shù)、化療或放療使多數(shù)患者治療后的免疫力下降，不能耐受繼續(xù)治療，影響生活質(zhì)量，因此晚期肺癌化療患者的免疫治療得到廣泛關(guān)注。筆者觀察了康萊特注射液聯(lián)合多西他賽、順鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效，以及對(duì)患者免疫功能的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2009年6月—2012年6月入住我院的ⅢB～Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者68例，均為不能手術(shù)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)，其中腺癌46例，鱗癌17例，其他5例；預(yù)計(jì)生存期≥3 個(gè)月，KPS評(píng)分≥80 分；血常規(guī)、肝腎功能和心電圖基本正常。將68例患者隨機(jī)分為2組：治療組34例，男20例，女14例；年齡(63.88±1.99)歲。對(duì)照組34例，男22例，女12例；年齡(64.29±2.07)歲。2組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另選擇同期性別、年齡與患者匹配的30例正常健康人作為正常對(duì)照組，男18例，女12例；年齡(63.14±1.48)歲。

1.2 治療方法 對(duì)照組單純采用化療藥物治療：多西他賽85 mg/m2，第1天，順鉑25 mg/m2，第1—3天，21 d為1個(gè)周期，治療期間不應(yīng)用免疫藥物。治療組在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用康萊特注射液200 mL靜點(diǎn)，1次/d，從化療前1 d開(kāi)始連用2周，21 d為1個(gè)周期，共治療2個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo) 治療前1 d及治療2個(gè)周期后1周使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞免疫分型(包括T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+Treg)，使用免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)；此外，還檢測(cè)血常規(guī)、生化等一般指標(biāo)。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群及Treg檢測(cè)方法 采用免疫熒光標(biāo)記全血溶血法，將新鮮的肝素抗凝的待測(cè)血漿25 μL加入流式試管內(nèi)，加單抗5 μL，混勻后于室溫下避光15 min，加溶血素125 μL混勻后室溫避光10 min，上機(jī)檢測(cè)。流式細(xì)胞儀測(cè)定淋巴細(xì)胞表面各種熒光素的熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度以二維 dot-plot 散點(diǎn)圖儲(chǔ)存于電腦中。自動(dòng)分析結(jié)合某一單抗的陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)和百分比，得到T淋巴細(xì)胞各亞群的百分?jǐn)?shù)，在FITC-CD4/PE-CD25雙參數(shù)圖上計(jì)算得到CD4+CD25+Treg的百分?jǐn)?shù)。主要試劑及儀器：CD3-PC5單克隆抗體、CD4-FITC單克隆抗體、CD8-PE單克隆抗體、CD25-PE單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司BeckmanCoulter，流式細(xì)胞儀型號(hào)：Beckman Coulter EpicsXL。

1.4.2 外周血免疫球蛋白檢測(cè)方法 應(yīng)用免疫比濁法，將抗人免疫球蛋白抗體與待測(cè)血中免疫球蛋白相結(jié)合，利用動(dòng)力學(xué)原理觀察單位時(shí)間內(nèi)抗原與抗體結(jié)合的量來(lái)測(cè)定其濃度。應(yīng)用Beckman公司的Immage特種蛋白分析儀上機(jī)檢測(cè)，運(yùn)行軟件進(jìn)行樣品測(cè)定分析。IgG、IgA、IgM試劑均采用貝克曼公司專(zhuān)用試劑盒。

2 結(jié) 果

2.1 各組T淋巴細(xì)胞亞群比較 化療前對(duì)照組及治療組T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+比例均低于正常對(duì)照組(P均<0.05)，CD4+/CD8+比值低于正常對(duì)照組但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CD8+比例、CD4+CD25+Treg均高于正常對(duì)照組(P均<0.05)。化療后治療組與對(duì)照組T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值均較治療前降低(P均<0.05)，且2組化療后比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。化療后對(duì)照組CD8+比例較前明顯升高(P<0.05)，治療組升高不明顯(P>0.05)?；熀?，治療組CD4+CD25+Treg明顯降低(P<0.05)，對(duì)照組雖有降低，但治療前后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且2組治療后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 各組血清IgG、IgA、IgM比較 化療前治療組及對(duì)照組免疫球蛋白IgG水平較正常對(duì)照組略低，IgA較正常對(duì)照組略高，IgM對(duì)照組略高于正常對(duì)照組、治療組略低于正常對(duì)照組，但均無(wú)顯著性差異(P均>0.05)?；熀螅瑢?duì)照組免疫球蛋白IgG、IgA、IgM較化療前均降低(P均<0.05)；治療組免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平較化療前均降低，但無(wú)顯著性差異(P均>0.05)。化療后對(duì)照組免疫球蛋白IgG水平低于治療組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定結(jié)果比較±s)

注：①與正常對(duì)照組比較，P<0.05；②與化療前比較，P<0.05；③與治療組比較，P<0.05。

3 討 論

由于肺癌起病隱匿，大部分患者確診時(shí)已達(dá)晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)，化療是晚期肺癌主要的治療手段之一。但化療在殺傷大量腫瘤細(xì)胞、減輕瘤負(fù)荷的同時(shí)又對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)、骨髓造血系統(tǒng)等造成破壞，而免疫功能下降進(jìn)一步影響肺癌的預(yù)后及患者的依從性，因此，在肺癌化療的同時(shí)，應(yīng)用具有抗癌、低毒、保護(hù)機(jī)體免疫功能的藥物意義重大。

表2 各組外周血免疫球蛋白測(cè)定結(jié)果比較±s，mg/L)

注：①與化療前比較，P<0.05；②與治療組比較，P<0.05。

薏苡仁是禾本科植物的成熟種仁，性甘、淡、微寒，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有滲濕利水、健脾止瀉、舒筋、清熱排膿之功效?？等R特注射液(KLT)是薏苡仁提取物，主要成分為薏苡仁油，是抗腫瘤制劑?？等R特具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，阻滯腫瘤細(xì)胞有絲分裂，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐受性(MDR)，殺傷癌細(xì)胞，激活NK細(xì)胞和IL- 2的活性，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬功能及脾淋巴細(xì)胞的增殖，顯著提高機(jī)體免疫力的功能[2]，配合放化療還可增效減毒，緩解疼痛，穩(wěn)定病情，抗癌癥惡病質(zhì)，提高癌癥患者的生活質(zhì)量[3]，并在預(yù)防腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中具有重要的意義。張愛(ài)琴等[4]通過(guò)測(cè)定Lewis肺癌小鼠外周血中TNF-α、IL-1、IL-6 的活性，探討康萊特注射液在抗腫瘤的同時(shí)對(duì)機(jī)體免疫功能的影響，結(jié)果顯示康萊特注射液不僅有殺滅腫瘤細(xì)胞作用，而且對(duì)機(jī)體的免疫器官及免疫功能也具有保護(hù)作用。吳巖等[5]的研究也顯示康萊特注射液在抗腫瘤的同時(shí)能通過(guò)提高T細(xì)胞增殖活力，調(diào)節(jié)IL-2、NF-κB等因子的表達(dá)，達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的目的。

隨著腫瘤免疫學(xué)及分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)與機(jī)體的免疫功能缺陷有關(guān)，尤其與細(xì)胞免疫功能抑制有關(guān)[6]。抗腫瘤免疫以細(xì)胞免疫為主，體液免疫起一定協(xié)同作用[7]。T 淋巴細(xì)胞來(lái)源于骨髓淋巴樣干細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟后進(jìn)入外周血液循環(huán)，約占外周血淋巴細(xì)胞的70%，是免疫應(yīng)答最為重要的參與者，主要執(zhí)行細(xì)胞免疫的功能，在殺傷靶細(xì)胞、免疫調(diào)節(jié)及免疫監(jiān)視方面具有極其重要的作用[8]。T 細(xì)胞在發(fā)育的不同階段，細(xì)胞膜上均表達(dá)一些相對(duì)穩(wěn)定的分子標(biāo)記，從而成為鑒定及分離 T 淋巴細(xì)胞亞群的重要依據(jù)。依據(jù)白細(xì)胞分化抗原的表達(dá)可大致將外周血成熟的T淋巴細(xì)胞(CD3+T)分為 CD4+T 淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞識(shí)別MHCⅡ類(lèi)分子所提呈的外源性抗原肽，活化后主要分化為輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)，具有直接殺傷腫瘤細(xì)胞及免疫記憶功能，在細(xì)胞免疫中起重要作用；而CD8+T淋巴細(xì)胞，它識(shí)別MHCⅠ類(lèi)分子所提呈的內(nèi)源性抗原肽，活化后主要分化為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)等，主要介導(dǎo)體液免疫。兩者相互協(xié)調(diào)、相互制約而共同參與對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用[9]。CD4+/CD8+比值反映宿主免疫調(diào)節(jié)的平衡，其比值降低表明細(xì)胞免疫功能低下[10]。CD4+CD25+Treg是目前已知的人體內(nèi)功能最為強(qiáng)大的具有免疫抑制功能的CD4+T細(xì)胞亞群，在誘導(dǎo)機(jī)體免疫耐受中發(fā)揮關(guān)鍵作用[11]，于1995年首次由Sakaguchi等[12]提出。CD4+CD25+Treg細(xì)胞主要通過(guò)抑制性調(diào)節(jié)CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞的輔助性作用，包括抗原提呈細(xì)胞(APC)和B細(xì)胞在內(nèi)的整個(gè)免疫系統(tǒng)的應(yīng)答；但是，其抑制作用只限于活化后的效應(yīng)細(xì)胞。Treg 抑制機(jī)體細(xì)胞免疫功能的機(jī)制主要包括4個(gè)途徑：①分泌TGF-β、IL-10等多種抑制性細(xì)胞因子的途徑。②通過(guò)顆粒蛋白酶A、B及穿孔素等殺死靶細(xì)胞。③破壞細(xì)胞代謝影響效應(yīng)細(xì)胞的功能:通過(guò)細(xì)胞間的縫隙連接將抑制性的第二信使 cAMP 導(dǎo)入效應(yīng)T細(xì)胞，干擾效應(yīng)T細(xì)胞的代謝；通過(guò)消耗 IL-2使效應(yīng)T細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制乃至凋亡；產(chǎn)生CD39及CD73引起細(xì)胞微環(huán)境中腺苷增加，繼而活化效應(yīng)T細(xì)胞表面的腺苷受體A2A，發(fā)揮抑制功能。④調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的途徑:Treg可通過(guò)自身表達(dá)的免疫抑制性分子影響樹(shù)突狀細(xì)胞的功能，而這些樹(shù)突狀細(xì)胞又能進(jìn)一步促進(jìn)Treg的分化和增殖[13]。因此，Treg在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起了很重要的作用。

免疫球蛋白識(shí)別并特異性結(jié)合抗原發(fā)揮免疫效應(yīng)，對(duì)體液免疫應(yīng)答起主要作用。免疫球蛋白主要分布在體內(nèi)血清中或外分泌物中，測(cè)定其含量有助于了解人體的體液免疫功能，對(duì)臨床的診治有一定的指導(dǎo)意義。人類(lèi)免疫球蛋白一般分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE 5種， 由于IgD、IgE含量甚微，故測(cè)定免疫球蛋白主要是以IgG、IgA、IgM為主。IgG約占血清免疫球蛋白總量的75%，是正常人血清中含量最多的一種免疫球蛋白，在特異性免疫中起重要作用；IgM主要分布在血液中，約占血清總免疫球蛋白的10%，也參與某些自身免疫病和Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)的病理過(guò)程。IgM和IgA在抗感染中都有重要作用，通常免疫球蛋白含量過(guò)高或過(guò)低均對(duì)人體不利[14]。

本研究結(jié)果顯示，治療組及對(duì)照組化療前CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值均低于正常對(duì)照組，IgG、IgA、IgM含量較正常對(duì)照組無(wú)明顯變化，CD8+、CD4+CD25+Treg水平高于正常對(duì)照組?？赡芘c晚期腫瘤患者本身存在的免疫抑制狀態(tài)有關(guān)。對(duì)照組化療后CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值，IgG、IgA、IgM含量均明顯低于化療前；而CD3+、CD4+比例，IgG、IgA、IgM等含量的變化在治療組不明顯，這與張斌等[15]的研究結(jié)果相近，即單純化療組化療后大部分的細(xì)胞免疫和體液免疫功能指標(biāo)明顯降低，康萊特聯(lián)合化療組化療后大部分的細(xì)胞免疫及體液免疫功能指標(biāo)無(wú)明顯變化。表明康萊特的聯(lián)合應(yīng)用減輕了化療對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的損傷，對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌化療患者細(xì)胞免疫及體液免疫功能均有保護(hù)作用。而CD4+CD25+Treg在治療組及對(duì)照組化療后均有下降趨勢(shì)，治療組降低趨勢(shì)更明顯，表明康萊特聯(lián)合應(yīng)用有降低免疫耐受的趨勢(shì)，其有關(guān)機(jī)制有待于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討。

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Regulatory effect of Kanglaite Injection on immune function in patients with non small cell lung cancer treated with chemotherapy

Deng Xinna,Zhao Shufang,Zhao Haijing,Yan Yonglong, He Liya, Zhang Hongzhen

(Hebei General Hospital,Shijiazhuang 050051, Hebei, China)

Objective It is to explore the changes of T cell subsets and CD4+CD25+Treg cells and immunoglobulin in blood of patients with advanced non small cell lung cancer, and to observe the influence of Kanglaite injection (KLT)combined with chemotherapy on immune function of these patients. Methods 68 cases of patients with advanced non small cell lung cancer were randomly divided into 2 groups, the control group was treated with docetaxel combined with sisplatin, and was not given KLT or other therapy which could improve immune function, and the treatment group was treated with KLT 200 mL by drip intravenous infusion for 14 days on the basis of control group's treatment. 21 days was one treatment cycles, after two cycles, the changes of T cell subsets and immunoglobulin were observed. 30 cases of healthy people were selected as normal control group. Results Compared with that before chemotherapy in normal control group, the differences in the levels of T cell subsets CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and the levels of CD4+CD25+Treg cell were significant in treatment group and control group (Pall<0.05). After chemotherapy the differences in immunoglobulin and T cell subsets of CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+in control group and CD4+CD25+Treg in treatment group after treatment were significant (Pall<0.05). There were significant differences in CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and IgG between control group and treatment group after chemotherapy(P<0.05). Conclusion Kanglaite injection can protect immune function in patients with advanced non small cell lung cancer and reduce the immune tolerance.

non small cell lung cancer;Kanglaite;immune function; immune tolerance; chemotherapy

鄧新娜,女,主治醫(yī)師,碩士，從事腫瘤的綜合治療。

張洪珍，E-mail：dengxinna@sina.com

河北省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(2013031)

10.3969/j.issn.1008-8849.2014.34.002

R734.2

A

1008-8849(2014)34-3767-04

2014-03-05