柴胡皂苷提取與含量測(cè)定方法研究

黃明泉

【摘要】目的：探討柴胡中有效成分柴胡總皂苷和皂苷d的提取及含量測(cè)定方法，并對(duì)樣品中成分進(jìn)行含量測(cè)定。方法：以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，分別采用紫外-可見分光光度法、HPLC法測(cè)定樣品中柴胡總皂苷及皂苷d的含量。結(jié)果：經(jīng)過測(cè)定，結(jié)果顯示樣品柴胡總皂苷含量均在65%以上，測(cè)定波長(zhǎng)為536nm；皂苷d含量均在11%以上，最大吸收波長(zhǎng)為204nm。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所建立的提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】柴胡；皂苷；提取；含量測(cè)定

柴胡是臨床常用中藥，屬和解劑，臨床主要用于少陽(yáng)證，即寒熱往來，胸悶口苦等，具清熱解表，和解少陽(yáng)之功，有南北柴胡之分，前者為狹葉柴胡的干燥根，后者是傘形科植物柴胡的干燥根[1]。

有實(shí)驗(yàn)研究證明[2]，柴胡根中的有效成分為柴胡皂苷，以及含有揮發(fā)油、植物甾醇等，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)柴胡皂苷具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎等作用。因此，提高柴胡制劑中柴胡有效成分的含量對(duì)提高臨床療效具有重大的指導(dǎo)意義。近年來，隨著科技的進(jìn)步，多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用各種新方法進(jìn)行柴胡皂苷的提取及測(cè)定，有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡皂苷的主要組成為皂苷a、d、b1、b2等[3]，其中，前兩者具有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。故本文主要以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，進(jìn)行柴胡皂苷的提取研究，并采用紫外-可見分光光度法及HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，為提高柴胡制劑的有效成分含量及提高臨床療效打下科研基礎(chǔ)?，F(xiàn)將研究情況報(bào)告如下。

實(shí)驗(yàn)材料

試藥：柴胡：購(gòu)于安徽省亳州市藥材公司，經(jīng)相關(guān)專家鑒定為傘形科植物柴胡的干燥根（北柴胡）；柴胡皂苷d對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)食品藥品鑒定研究院；屈臣氏純凈水；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）；其他試劑為分析純（甲醇、乙醇、氨水）。柴胡總皂苷的含量測(cè)定：①檢測(cè)波長(zhǎng)：精密吸取200μL上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液置于小試管中，加入100μL的對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液（0.1%），水浴（70℃）反應(yīng)10min，待自然冷卻后，加入4.0mL磷酸，繼續(xù)反應(yīng)30min。根據(jù)“2005年版藥典1部附錄VA”規(guī)定在200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。根據(jù)最大吸收，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為536nm。②供試品溶液的制備：同上。③對(duì)照品溶液制備：精密稱取適量柴胡皂苷d對(duì)照品，用甲醇配制成濃度為2.07mg/ml的對(duì)照品溶液。④標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10ml置于10mL量瓶中，甲醇稀釋并定容，搖勻備用。同①，各取上述不同濃度溶液1ml進(jìn)行反應(yīng)并測(cè)定（536nm），以吸收值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，柴胡皂苷d的濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=6×10-4C–0.072，r=0.9994。結(jié)果表明柴胡總皂苷在206～2060mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。⑤精密度實(shí)驗(yàn)：分別取5份對(duì)照品溶液（400μl）、供試品溶液（1ml）置于量瓶中（10ml），甲醇稀釋并定容，測(cè)定其吸光度。其結(jié)果對(duì)照品及供試品的RSD分別為1.52%、1.80%，表明精密度良好。⑥穩(wěn)定性及重復(fù)性測(cè)定：測(cè)定樣品同⑤，于不同時(shí)間點(diǎn)（10、30、40、60、90min）測(cè)定其吸收度，計(jì)算其RSD，結(jié)果為4.97%，故供試品溶液基本穩(wěn)定。另取供試品溶液，平行測(cè)定5次。結(jié)果顯示柴胡皂苷的平均含量為68.30mg/g，RSD為2.83%，表明可重復(fù)性良好。⑦回收率實(shí)驗(yàn)：在已知含量的樣品溶液中加入定量的柴胡皂苷d對(duì)照品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示平均回收率為99.2%，RSD=2.06%，表明回收率符合要求。⑧樣品測(cè)定：取已制得的三批不同柴胡皂苷提取物并配制成供試液，進(jìn)行測(cè)定。最后計(jì)算三批樣品中的柴胡總皂苷的含量，結(jié)果所示結(jié)論

雖然柴胡皂苷a和d均是柴胡皂苷的主要組成成分，兩者均有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。但有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡中皂苷d的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他皂苷的含量[4]，故在實(shí)驗(yàn)研究時(shí)選擇皂苷d而不是皂苷a來作為柴胡總皂苷的含量測(cè)定指標(biāo)的參照。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，其皂苷d含量在柴胡總皂苷中含量較高，故認(rèn)為選取正確。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，皂苷d含量均值均在11%上，故假設(shè)認(rèn)定柴胡中柴胡皂苷d的含量應(yīng)達(dá)到10%以上才為合格柴胡，總皂苷含量均值達(dá)65%以上，故假定柴胡總皂苷含量應(yīng)達(dá)到65%以上為達(dá)標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)所建立的柴胡皂苷提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

1中國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典Ⅰ部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：565.

2肖功勝，楊云，劉富崗，等.柴胡皂苷提取和含量測(cè)定方法研究[J].中成藥，2009，31（4）：595.

3楊志業(yè)，劉書芬，晁志，等.HPLC測(cè)定新疆柴胡屬4種植物中柴胡皂苷a、c、d的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（4）：460.

4MAO Ren-gang，LIN Dong-hao，WANG Zhi-hua，et al.Quantitative analysis of Saikosaponin d in different species of Radix Bupleuri by HPLC[J].ChinTradition Herb Drugs，2002，33（5）：412.

【摘要】目的：探討柴胡中有效成分柴胡總皂苷和皂苷d的提取及含量測(cè)定方法，并對(duì)樣品中成分進(jìn)行含量測(cè)定。方法：以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，分別采用紫外-可見分光光度法、HPLC法測(cè)定樣品中柴胡總皂苷及皂苷d的含量。結(jié)果：經(jīng)過測(cè)定，結(jié)果顯示樣品柴胡總皂苷含量均在65%以上，測(cè)定波長(zhǎng)為536nm；皂苷d含量均在11%以上，最大吸收波長(zhǎng)為204nm。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所建立的提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】柴胡；皂苷；提取；含量測(cè)定

柴胡是臨床常用中藥，屬和解劑，臨床主要用于少陽(yáng)證，即寒熱往來，胸悶口苦等，具清熱解表，和解少陽(yáng)之功，有南北柴胡之分，前者為狹葉柴胡的干燥根，后者是傘形科植物柴胡的干燥根[1]。

有實(shí)驗(yàn)研究證明[2]，柴胡根中的有效成分為柴胡皂苷，以及含有揮發(fā)油、植物甾醇等，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)柴胡皂苷具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎等作用。因此，提高柴胡制劑中柴胡有效成分的含量對(duì)提高臨床療效具有重大的指導(dǎo)意義。近年來，隨著科技的進(jìn)步，多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用各種新方法進(jìn)行柴胡皂苷的提取及測(cè)定，有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡皂苷的主要組成為皂苷a、d、b1、b2等[3]，其中，前兩者具有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。故本文主要以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，進(jìn)行柴胡皂苷的提取研究，并采用紫外-可見分光光度法及HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，為提高柴胡制劑的有效成分含量及提高臨床療效打下科研基礎(chǔ)?，F(xiàn)將研究情況報(bào)告如下。

實(shí)驗(yàn)材料

試藥：柴胡：購(gòu)于安徽省亳州市藥材公司，經(jīng)相關(guān)專家鑒定為傘形科植物柴胡的干燥根（北柴胡）；柴胡皂苷d對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)食品藥品鑒定研究院；屈臣氏純凈水；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）；其他試劑為分析純（甲醇、乙醇、氨水）。柴胡總皂苷的含量測(cè)定：①檢測(cè)波長(zhǎng)：精密吸取200μL上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液置于小試管中，加入100μL的對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液（0.1%），水?。?0℃）反應(yīng)10min，待自然冷卻后，加入4.0mL磷酸，繼續(xù)反應(yīng)30min。根據(jù)“2005年版藥典1部附錄VA”規(guī)定在200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。根據(jù)最大吸收，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為536nm。②供試品溶液的制備：同上。③對(duì)照品溶液制備：精密稱取適量柴胡皂苷d對(duì)照品，用甲醇配制成濃度為2.07mg/ml的對(duì)照品溶液。④標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10ml置于10mL量瓶中，甲醇稀釋并定容，搖勻備用。同①，各取上述不同濃度溶液1ml進(jìn)行反應(yīng)并測(cè)定（536nm），以吸收值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，柴胡皂苷d的濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=6×10-4C–0.072，r=0.9994。結(jié)果表明柴胡總皂苷在206～2060mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。⑤精密度實(shí)驗(yàn)：分別取5份對(duì)照品溶液（400μl）、供試品溶液（1ml）置于量瓶中（10ml），甲醇稀釋并定容，測(cè)定其吸光度。其結(jié)果對(duì)照品及供試品的RSD分別為1.52%、1.80%，表明精密度良好。⑥穩(wěn)定性及重復(fù)性測(cè)定：測(cè)定樣品同⑤，于不同時(shí)間點(diǎn)（10、30、40、60、90min）測(cè)定其吸收度，計(jì)算其RSD，結(jié)果為4.97%，故供試品溶液基本穩(wěn)定。另取供試品溶液，平行測(cè)定5次。結(jié)果顯示柴胡皂苷的平均含量為68.30mg/g，RSD為2.83%，表明可重復(fù)性良好。⑦回收率實(shí)驗(yàn)：在已知含量的樣品溶液中加入定量的柴胡皂苷d對(duì)照品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示平均回收率為99.2%，RSD=2.06%，表明回收率符合要求。⑧樣品測(cè)定：取已制得的三批不同柴胡皂苷提取物并配制成供試液，進(jìn)行測(cè)定。最后計(jì)算三批樣品中的柴胡總皂苷的含量，結(jié)果所示結(jié)論

雖然柴胡皂苷a和d均是柴胡皂苷的主要組成成分，兩者均有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。但有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡中皂苷d的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他皂苷的含量[4]，故在實(shí)驗(yàn)研究時(shí)選擇皂苷d而不是皂苷a來作為柴胡總皂苷的含量測(cè)定指標(biāo)的參照。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，其皂苷d含量在柴胡總皂苷中含量較高，故認(rèn)為選取正確。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，皂苷d含量均值均在11%上，故假設(shè)認(rèn)定柴胡中柴胡皂苷d的含量應(yīng)達(dá)到10%以上才為合格柴胡，總皂苷含量均值達(dá)65%以上，故假定柴胡總皂苷含量應(yīng)達(dá)到65%以上為達(dá)標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)所建立的柴胡皂苷提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

1中國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典Ⅰ部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：565.

2肖功勝，楊云，劉富崗，等.柴胡皂苷提取和含量測(cè)定方法研究[J].中成藥，2009，31（4）：595.

3楊志業(yè)，劉書芬，晁志，等.HPLC測(cè)定新疆柴胡屬4種植物中柴胡皂苷a、c、d的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（4）：460.

4MAO Ren-gang，LIN Dong-hao，WANG Zhi-hua，et al.Quantitative analysis of Saikosaponin d in different species of Radix Bupleuri by HPLC[J].ChinTradition Herb Drugs，2002，33（5）：412.

【摘要】目的：探討柴胡中有效成分柴胡總皂苷和皂苷d的提取及含量測(cè)定方法，并對(duì)樣品中成分進(jìn)行含量測(cè)定。方法：以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，分別采用紫外-可見分光光度法、HPLC法測(cè)定樣品中柴胡總皂苷及皂苷d的含量。結(jié)果：經(jīng)過測(cè)定，結(jié)果顯示樣品柴胡總皂苷含量均在65%以上，測(cè)定波長(zhǎng)為536nm；皂苷d含量均在11%以上，最大吸收波長(zhǎng)為204nm。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所建立的提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】柴胡；皂苷；提??；含量測(cè)定

柴胡是臨床常用中藥，屬和解劑，臨床主要用于少陽(yáng)證，即寒熱往來，胸悶口苦等，具清熱解表，和解少陽(yáng)之功，有南北柴胡之分，前者為狹葉柴胡的干燥根，后者是傘形科植物柴胡的干燥根[1]。

有實(shí)驗(yàn)研究證明[2]，柴胡根中的有效成分為柴胡皂苷，以及含有揮發(fā)油、植物甾醇等，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)柴胡皂苷具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎等作用。因此，提高柴胡制劑中柴胡有效成分的含量對(duì)提高臨床療效具有重大的指導(dǎo)意義。近年來，隨著科技的進(jìn)步，多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用各種新方法進(jìn)行柴胡皂苷的提取及測(cè)定，有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡皂苷的主要組成為皂苷a、d、b1、b2等[3]，其中，前兩者具有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。故本文主要以柴胡總皂苷與柴胡皂苷d為指標(biāo)，進(jìn)行柴胡皂苷的提取研究，并采用紫外-可見分光光度法及HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，為提高柴胡制劑的有效成分含量及提高臨床療效打下科研基礎(chǔ)?，F(xiàn)將研究情況報(bào)告如下。

實(shí)驗(yàn)材料

試藥：柴胡：購(gòu)于安徽省亳州市藥材公司，經(jīng)相關(guān)專家鑒定為傘形科植物柴胡的干燥根（北柴胡）；柴胡皂苷d對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)食品藥品鑒定研究院；屈臣氏純凈水；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）；其他試劑為分析純（甲醇、乙醇、氨水）。柴胡總皂苷的含量測(cè)定：①檢測(cè)波長(zhǎng)：精密吸取200μL上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液置于小試管中，加入100μL的對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液（0.1%），水?。?0℃）反應(yīng)10min，待自然冷卻后，加入4.0mL磷酸，繼續(xù)反應(yīng)30min。根據(jù)“2005年版藥典1部附錄VA”規(guī)定在200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。根據(jù)最大吸收，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為536nm。②供試品溶液的制備：同上。③對(duì)照品溶液制備：精密稱取適量柴胡皂苷d對(duì)照品，用甲醇配制成濃度為2.07mg/ml的對(duì)照品溶液。④標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取上述柴胡皂苷d對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10ml置于10mL量瓶中，甲醇稀釋并定容，搖勻備用。同①，各取上述不同濃度溶液1ml進(jìn)行反應(yīng)并測(cè)定（536nm），以吸收值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，柴胡皂苷d的濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=6×10-4C–0.072，r=0.9994。結(jié)果表明柴胡總皂苷在206～2060mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。⑤精密度實(shí)驗(yàn)：分別取5份對(duì)照品溶液（400μl）、供試品溶液（1ml）置于量瓶中（10ml），甲醇稀釋并定容，測(cè)定其吸光度。其結(jié)果對(duì)照品及供試品的RSD分別為1.52%、1.80%，表明精密度良好。⑥穩(wěn)定性及重復(fù)性測(cè)定：測(cè)定樣品同⑤，于不同時(shí)間點(diǎn)（10、30、40、60、90min）測(cè)定其吸收度，計(jì)算其RSD，結(jié)果為4.97%，故供試品溶液基本穩(wěn)定。另取供試品溶液，平行測(cè)定5次。結(jié)果顯示柴胡皂苷的平均含量為68.30mg/g，RSD為2.83%，表明可重復(fù)性良好。⑦回收率實(shí)驗(yàn)：在已知含量的樣品溶液中加入定量的柴胡皂苷d對(duì)照品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示平均回收率為99.2%，RSD=2.06%，表明回收率符合要求。⑧樣品測(cè)定：取已制得的三批不同柴胡皂苷提取物并配制成供試液，進(jìn)行測(cè)定。最后計(jì)算三批樣品中的柴胡總皂苷的含量，結(jié)果所示結(jié)論

雖然柴胡皂苷a和d均是柴胡皂苷的主要組成成分，兩者均有明顯抗炎作用和降低血清膽固醇及甘油三酯的作用。但有文獻(xiàn)報(bào)道柴胡中皂苷d的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他皂苷的含量[4]，故在實(shí)驗(yàn)研究時(shí)選擇皂苷d而不是皂苷a來作為柴胡總皂苷的含量測(cè)定指標(biāo)的參照。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，其皂苷d含量在柴胡總皂苷中含量較高，故認(rèn)為選取正確。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，皂苷d含量均值均在11%上，故假設(shè)認(rèn)定柴胡中柴胡皂苷d的含量應(yīng)達(dá)到10%以上才為合格柴胡，總皂苷含量均值達(dá)65%以上，故假定柴胡總皂苷含量應(yīng)達(dá)到65%以上為達(dá)標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)所建立的柴胡皂苷提取及含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便，精密度良好，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地用于柴胡皂苷的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

1中國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典Ⅰ部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：565.

2肖功勝，楊云，劉富崗，等.柴胡皂苷提取和含量測(cè)定方法研究[J].中成藥，2009，31（4）：595.

3楊志業(yè)，劉書芬，晁志，等.HPLC測(cè)定新疆柴胡屬4種植物中柴胡皂苷a、c、d的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（4）：460.

4MAO Ren-gang，LIN Dong-hao，WANG Zhi-hua，et al.Quantitative analysis of Saikosaponin d in different species of Radix Bupleuri by HPLC[J].ChinTradition Herb Drugs，2002，33（5）：412.