枳椇總黃酮提取工藝的正交設(shè)計(jì)研究

趙 婷，高秀璐，趙鴻昆，梁承武*

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部，吉林 延吉 133000；3.吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院，吉林 吉林 132021)

·論 著·

枳椇總黃酮提取工藝的正交設(shè)計(jì)研究

趙 婷1,2，高秀璐1，趙鴻昆3，梁承武1*

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部，吉林 延吉 133000；3.吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院，吉林 吉林 132021)

目的 優(yōu)選枳椇中總黃酮的最佳提取工藝。 方法 采用紫外分光光度法測定枳椇總黃酮的含量，以乙醇濃度，提取時(shí)間，料水比例為考察因素，以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用L16(34) 正交設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳提取工藝條件。 結(jié)果 最佳提取工藝為12倍量60%乙醇回流提取2 h。結(jié)論 本法可為中藥枳椇的開發(fā)利用提供參考。

枳椇；總黃酮；紫外分光光度法；正交設(shè)計(jì)

枳椇(Hovenia acerba)，為鼠李科枳椇屬落葉喬木枳椇的果實(shí)，俗稱拐棗，含糖量較高，口感柔和，頗受人們青睞。枳椇在我國分布廣泛，資源豐富。黃河、長江流域南至廣東，西至云貴川、西藏及日本都有分布。近年來，關(guān)于枳椇解酒的研究逐漸增多，結(jié)果表明枳椇黃酮類成分具有保肝、解酒的功效，實(shí)驗(yàn)表明枳椇子對(duì)肝細(xì)胞有促進(jìn)生長的作用[1]，并且對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有保護(hù)作用，能夠減少肝纖維化[2-3]，因此為探索枳椇總黃酮提取條件，以總黃酮為檢測指標(biāo)，紫外分光光度法為檢測手段，利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)枳椇提取工藝進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步的質(zhì)量控制以及藥理活性等研究工作提供數(shù)據(jù)資料。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

枳椇購于山西， 60 ℃干燥備用。槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，無水乙醇(分析純)，蒸餾水。日本島津UV-2501(PC)S紫外可見分光光度計(jì)，雙圈牌JH2102電子天平。

1.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用乙醇為提取溶媒，以乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)為3個(gè)考察因素，分別設(shè)立4個(gè)水平，以總黃酮的提取率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，選取L16(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如表1。

1.3 樣品提取

取稱30 g干燥枳椇16份，按正交試驗(yàn)表所列條件，采用不同濃度乙醇回流提取，合并提取液，趁熱過濾，濃縮，石油醚脫脂，萃取兩次后置于100 mL溶量瓶中，加水定容，搖勻即得供試品溶液。

表 1 正交實(shí)驗(yàn)考察因素

1.4 對(duì)照品溶液配制

調(diào)節(jié)真空干燥箱溫度于110 ℃，精確稱取一定槲皮素對(duì)照品，干燥至恒重，用分析天平精確稱取30 mg，用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液溶解并定容于100 mL容量瓶中，配制成0.3 mg/mL的實(shí)驗(yàn)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液[4]。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取上述已配制的對(duì)照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，5.0 mL置于10 mL容量瓶內(nèi)，用80%乙醇溶解，混勻并定容。放置20 min，在275 nm波長下，用對(duì)應(yīng)試劑作空白，分別測定吸光度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，槲皮素濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=3.440 9C-0.001 2，r=0.999 9，線性范圍在0.302 8～0.514 0 mg/mL，線性良好。

1.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取槲皮素對(duì)照品溶液2.0 mL，定容于10 mL容量瓶中，在275 nm波長處連續(xù)測定5次，測定吸光度，測得精密度RSD=0.35%。

1.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一濃度的供試品溶液，每隔4 h測定一次，結(jié)果6次測定的吸收值基本不變，RSD=0.12%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同批枳椇藥材按照上述實(shí)驗(yàn)方法處理，在所得最優(yōu)提取條件下提取，重復(fù)操作5組，測定吸光度，所得RSD=1.36%，說明本法重復(fù)性良好。

2 結(jié) 果

精密吸取各供試品液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行操作，在275 nm波長處測定吸收度A，由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮的含量。正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及總黃酮提取量見表2，方差分析結(jié)果見表3。從表2結(jié)果來看，最佳提取方式為A3B4C4，即12倍量60%乙醇回流提取2 h。表3表明，乙醇提取時(shí)間對(duì)其有顯著性影響。通過正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果直觀分析和方差分析得出枳椇總黃酮提取的最佳工藝條件為：12倍量60%乙醇回流提取2 h。

表 2 乙醇提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表 3 方差分析結(jié)果

3 討 論

枳椇自古以來就是一種藥食同源的傳統(tǒng)植物，具有化解酒毒，保肝護(hù)肝的功效，對(duì)急性酒精中毒有明顯的治療作用，并對(duì)各種原因所導(dǎo)致的肝損傷有明確的保護(hù)作用。其中，枳椇所含有的黃酮類成分是它的主要藥理活性成分，為考察枳椇總黃酮的最佳提取工藝，本研究采用正交實(shí)驗(yàn)等方法對(duì)其進(jìn)行研究，考察結(jié)果：最佳提取工藝為12倍量60%乙醇回流提取2 h。本工藝重復(fù)性良好，在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

[1] 嵇 揚(yáng)，陸 紅.枳椇子水提取液對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞促生長作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2001，8(3)：162-163.

[2] 葉麗萍，張 洪，劉秀琳.枳椇子提取物對(duì)肝纖維化保護(hù)作用的形態(tài)學(xué)研究[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2005，26(3)：293-296.

[3] 張 洪，宋 娟，詹新安，等.枳椇子醋酸乙酯提取物對(duì)大鼠肝P450同工酶的影響[J].中國中藥雜志,2007,32(18)：1917-1920.

[4] 陳泉生.枳椇皂甙的藥理性質(zhì)[J].國外醫(yī)學(xué):植物藥分冊(cè)，1980，1(1)：45.

The orthogonal experimental design on extraction of total flavanoid in Turnjujube

ZHAO Ting1,2,GAO Xiu-lu1,ZHAO Hong-kun3,LIANG Cheng-wu1*

(1.Jilin Medical College,Jilin City，Jilin Province,132013;2.Yanbian University Health Science Center,Yanji，Jilin Province,133000;3.The General Hospital of CNPC in Jilin,Jilin City，Jilin Province,132021，China)

Objective To optimize the extracting method of total flavone from Turnjujube. Methods UV method was applied to determine the content of total flavone from Turnjujube.We took concentration of ethanol,extraction time and material-liqud ratio as variables,considered the extraction rate of total flavone as index,and used L16(34) orthogonal test to select the optimal extraction technology. Results The optimal condition:60% ethanol;2 hours;12 times solvent. Conclusion This result provide a suitable method for research.

Turnjujube;total flavone;UV;orthogonal design

1673-2995(2014)01-0021-03

趙 婷(1988-)，女(漢族)，碩士.

梁承武(1968-)，男(朝鮮族)，教授，博士.

R285.5

A

2013-10-11)