CK19、Gal-3 和HBME-1 在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中的表達(dá)及其意義

古麗那爾·阿布拉江， 桑 偉，劉 霞， 崔文麗， 張 巍， 哈德提·別克米托夫

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科， 烏魯木齊 830054)

甲狀腺增生結(jié)節(jié)是一種常見的內(nèi)分泌疾病，5%為惡性腫瘤。大多數(shù)結(jié)節(jié)通過病理組織學(xué)觀察診斷相對(duì)容易。但對(duì)于一些不典型增生結(jié)節(jié)如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴乳頭狀增生和乳頭狀癌的鑒別、濾泡性腺瘤和濾泡癌的鑒別、乳頭狀癌濾泡亞型與濾泡癌的鑒別等，仍然缺乏客觀的依據(jù)和評(píng)價(jià)指標(biāo)。因此，有必要尋求某些敏感和特異性標(biāo)志物來輔助診斷。研究資料表明細(xì)胞角蛋白19(CK19)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)和間皮瘤相關(guān)抗體-1(HBME-1)有助于鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性[1]，但三者聯(lián)合用于鑒別診斷國(guó)內(nèi)報(bào)道較少[2]。因此, 本研究采用免疫組化方法檢測(cè)CK19、Gal-3 和HBME-1蛋白在甲狀腺增生結(jié)節(jié)中的表達(dá)，以了解它們聯(lián)合使用在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)的診斷以及鑒別診斷的實(shí)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2008-2010年甲狀腺增生結(jié)節(jié)石蠟標(biāo)本75例。良性結(jié)節(jié)36例，包括14例濾泡性腺瘤和22例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫，39例惡性結(jié)節(jié)，包括36例乳頭狀癌和3例濾泡癌。患者年齡15～73歲，平均年齡41歲，男女比為1∶4。所有標(biāo)本病理診斷以2006年WHO甲狀腺組織學(xué)分類為依據(jù),所有病例臨床資料完整。

1.2 方法與主要試劑

所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,常規(guī)組織處理, 石蠟包埋, 3 μm 厚連續(xù)切片, 常規(guī)HE染色。采用Envision 法進(jìn)行CK19、Gal-3 和HBME-1染色, DAB 顯色, 蘇木素復(fù)染。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照, 以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。CK-19、Gal-3 兔抗人多克隆抗體濃縮液(稀釋度為1∶100)和HBME-1兔抗人多克隆抗體濃縮液(稀釋度為1∶50)均購(gòu)自北京中杉公司。

1.3 結(jié)果判斷

根據(jù)Beesley等[1]的分級(jí)方法, 按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度確定分級(jí)如下: 每張切片隨機(jī)選10個(gè)高倍視野。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-), 陽(yáng)性細(xì)胞11%～25%為弱陽(yáng)性(+), 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%為中度陽(yáng)性(++), 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>51%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CK19、Gal-3和HBME-1在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)病變中的表達(dá)

CK19陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿,呈棕黃色顆粒，在良性結(jié)節(jié)(結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤)和惡性結(jié)節(jié)(乳頭狀癌和濾泡癌)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為41.7%和94.9%，CK19在惡性結(jié)節(jié)的陽(yáng)性表達(dá)率要高于良性結(jié)節(jié)，其在鑒別良惡性結(jié)節(jié)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。CK19在甲狀腺良性結(jié)節(jié)主要為弱陽(yáng)性表達(dá)(圖1)，在惡性結(jié)節(jié)主要為中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(圖2)。Gal-3陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿，少數(shù)定位于細(xì)胞核； HBME-1陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿與細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒； Gal-3和HBME-1在良性結(jié)節(jié)陽(yáng)性表達(dá)率分別為25.0%和94.9%，在惡性結(jié)節(jié)陽(yáng)性表達(dá)率分別為94.9%和94.9%, Gal-3和HBME-1在惡性結(jié)節(jié)的陽(yáng)性表達(dá)率高于良性結(jié)節(jié)，Gal-3和HBME-1在鑒別良惡性結(jié)節(jié)表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)(表1)。 Gal-3和HBME-1在甲狀腺良性結(jié)節(jié)主要為灶性、弱陽(yáng)性表達(dá)，在惡性結(jié)節(jié)主要為中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(圖3、4)，甲狀腺乳頭狀癌一般具有乳頭狀結(jié)構(gòu)和特征性核改變，典型的細(xì)胞核特征呈毛玻璃樣核、核溝和核內(nèi)包涵體(圖5、6)。

表1 CK19、Gal-3和HBME-1在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中的表達(dá)/例

2.2 CK19、Gal-3和HBME-1在甲狀腺惡性結(jié)節(jié)診斷中的價(jià)值

CK19、Gal-3 和HBME-1在診斷惡性結(jié)節(jié)的敏感性均為94.9%，特異性分別為33.3%、69.4%、88.9%；HBME-1在鑒別惡性甲狀腺結(jié)節(jié)的特異性要顯著高于CK19和Gal-3，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017)(表2)。

表2 CK19、Gal-3和HBME-1在診斷中的敏感性和特異性/%

2.3 CK19、Gal-3和HBME-1聯(lián)合使用在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中的表達(dá)

在良性結(jié)節(jié)，2項(xiàng)標(biāo)記同時(shí)表達(dá)占27.8%，3項(xiàng)標(biāo)記同時(shí)表達(dá)僅為2.8%；在惡性結(jié)節(jié)，2項(xiàng)標(biāo)記和3項(xiàng)標(biāo)記同時(shí)表達(dá)均占94.9%。2項(xiàng)標(biāo)記聯(lián)合使用和3項(xiàng)標(biāo)記聯(lián)合使用在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.083)(表3)。

表3 CK19、Gal-3和HBME-1協(xié)同表達(dá)與甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)的關(guān)系/例(%)

圖1CK19在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫呈弱陽(yáng)性表達(dá)(IHC×100)

圖2CK19在甲狀腺癌呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(IHC×200)

圖3Gal-3在甲狀腺癌呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(IHC×200)

圖4HBME-1在甲狀腺癌呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(IHC×100)

圖5甲狀腺癌具有毛玻璃樣核改變(HE×400)

圖6甲狀腺癌具有核內(nèi)包涵體和核溝的改變(HE×400)

3 討論

大多數(shù)甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)診斷及鑒別診斷比較容易，但有些甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性鑒別需要借助一些新技術(shù)(免疫組化、分子遺傳學(xué)等)輔助診斷。當(dāng)遇到以下情況時(shí)，良惡性結(jié)節(jié)鑒別較困難：(1)濾泡癌和濾泡性腺瘤在良惡性結(jié)節(jié)中鑒別最為困難，其鑒別主要依賴包膜和血管侵犯，但由于取材等因素的影響導(dǎo)致一些誤診和漏診；(2)當(dāng)結(jié)節(jié)性甲狀腺腫出現(xiàn)大量乳頭狀結(jié)構(gòu)、細(xì)胞有輕度增大、缺乏乳頭狀癌典型的核改變時(shí)，與甲狀腺乳頭狀癌鑒別較困難；(3)乳頭狀癌濾泡亞型與濾泡癌鑒別存在一定困難。

近年來, 有學(xué)者認(rèn)為CK19陽(yáng)性表達(dá)并非惡性腫瘤的特異性染色,在一些良性結(jié)節(jié)和癌周邊正常組織也可以出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)[2-3]。本研究顯示CK19在良性結(jié)節(jié)和惡性結(jié)節(jié)表達(dá)率分別為41.7%和94.9%，在鑒別良惡性結(jié)節(jié)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但本研究結(jié)果也顯示CK19在惡性腫瘤診斷中特異性較低，有41.7%的良性結(jié)節(jié)也呈陽(yáng)性表達(dá)，提示單獨(dú)使用CK19對(duì)于鑒別良惡性結(jié)節(jié)并不是一個(gè)很好的指標(biāo)。但有學(xué)者認(rèn)為當(dāng)CK19廣泛呈陽(yáng)性表達(dá)時(shí)應(yīng)該傾向于惡性診斷，因?yàn)镃K19陽(yáng)性表達(dá)的良性結(jié)節(jié)大部分呈弱陽(yáng)性，而絕大多數(shù)甲狀腺癌呈中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)[4]，本研究結(jié)果也支持這一觀點(diǎn)。

Gal-3是一類結(jié)合β半乳糖的凝集素,屬凝集素蛋白家庭成員，參與許多生理、病理發(fā)生過程。Gal-3還可通過刺激細(xì)胞生長(zhǎng)增殖, 促進(jìn)腫瘤血管生成及腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4]。研究發(fā)現(xiàn)Gal-3過度表達(dá)與甲狀腺癌形成相關(guān)，尤其在鑒別甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性結(jié)節(jié)時(shí)具有重要價(jià)值[5]。本研究結(jié)果顯示Gal-3在惡性結(jié)節(jié)中的表達(dá)率顯著高于良性結(jié)節(jié), 這與國(guó)內(nèi)外大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道相一致[6-8]。盡管有9例良性結(jié)節(jié)表達(dá)Gal-3，但其中7例呈灶狀、弱陽(yáng)性，而在惡性結(jié)節(jié)有87.2%呈中強(qiáng)表達(dá)，提示Gal-3在鑒別良惡性結(jié)節(jié)中具有重要的價(jià)值。但本研究還顯示Gal-3敏感性較高，特異性偏低。

HBME-1是間皮表面微絨毛的一種抗原成分，以往常被用于間皮來源腫瘤的診斷,近年來逐漸被用于甲狀腺癌的診斷。有研究表明HBME-1 在正常、炎癥性和增生性甲狀腺中不表達(dá)，其敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)價(jià)值和診斷正確率分別高達(dá)80.0%、96.0%、96.7%和86.4%[9]，本研究結(jié)果也顯示HBME-1具有較高的敏感性和特異性，分別為94.9%、88.9%，并且發(fā)現(xiàn)有4例良性結(jié)節(jié)表達(dá)HBME-1，其中3例為灶狀、弱陽(yáng)性表達(dá)，而94.9%的惡性結(jié)節(jié)均呈中強(qiáng)表達(dá)，因此HBME-1可以作為鑒別甲狀腺良惡性病變的良好標(biāo)記物。

本研究發(fā)現(xiàn)，CK19、Gal-3 和HBME-1在鑒別良惡性結(jié)節(jié)中差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但Ruggeri等[10]提出單獨(dú)使用其中1項(xiàng)在鑒別良惡性結(jié)節(jié)中的特異性和敏感性并不是很理想。因此，建議同時(shí)檢測(cè)CK19、Gal-3 和HBME-1的蛋白表達(dá)，這3項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合使用使鑒別診斷作用明顯增強(qiáng)。本研究將CK19、Gal-3 和HBME-1協(xié)同表達(dá)與甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)的關(guān)系進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)惡性結(jié)節(jié)2項(xiàng)和3項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)表達(dá)均為94.9%(37/39)，絕大部分為中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，所以當(dāng)這3項(xiàng)指標(biāo)兩兩組合均呈中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，提示該結(jié)節(jié)為惡性的可能性較大。有27.8%的良性結(jié)節(jié)也存在2項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，但絕大部分為灶狀、弱陽(yáng)性表達(dá)；當(dāng)2項(xiàng)指標(biāo)呈弱陽(yáng)性表達(dá)又不能排除為惡性時(shí)，可以同時(shí)檢測(cè)3項(xiàng)指標(biāo)，本研究發(fā)現(xiàn)只有1例良性結(jié)節(jié)3項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)表達(dá)，但其中2項(xiàng)指標(biāo)為灶狀、弱陽(yáng)性。因此，聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)可以明顯增強(qiáng)鑒別診斷的作用，當(dāng)CK19、Gal-3和HBME-1均為中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，可以明確診斷為惡性結(jié)節(jié)。盡管2項(xiàng)標(biāo)記聯(lián)合使用和3項(xiàng)標(biāo)記聯(lián)合使用在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但只有2.8%的良性結(jié)節(jié)表達(dá)3項(xiàng)指標(biāo)，遠(yuǎn)低于表達(dá)2項(xiàng)指標(biāo)的例數(shù)(27.8%)。

有關(guān)研究顯示CK19、Gal-3和HBME-1在乳頭狀癌特異性和敏感性均較高[11]，當(dāng)結(jié)節(jié)性甲狀腺腫出現(xiàn)大量乳頭狀結(jié)構(gòu)、細(xì)胞有輕度增大、缺乏乳頭狀癌典型的核改變時(shí)，這3項(xiàng)指標(biāo)在鑒別乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴乳頭狀增生是比較好的指標(biāo)；本組有7例為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴乳頭狀增生，其中有3例2項(xiàng)指標(biāo)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，其余為1項(xiàng)指標(biāo)弱陽(yáng)性或3項(xiàng)指標(biāo)均為陰性，提示CK19、Gal-3和HBME-1在鑒別乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴乳頭狀增生具有實(shí)用價(jià)值。由于本研究濾泡癌和乳頭狀癌濾泡亞型樣本較少，所以濾泡癌和濾泡性腺瘤、乳頭狀癌濾泡亞型與濾泡癌之間的鑒別診斷未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，今后可擴(kuò)大相關(guān)樣本量，能夠更好地詮釋CK19、Gal-3和HBME-1指標(biāo)在以上鑒別中的作用。

本研究顯示39例惡性結(jié)節(jié)中有37例均表達(dá)CK19、Gal-3和HBME-1，多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，但有2例乳頭狀癌具有典型的乳頭狀結(jié)構(gòu)和特征性核改變，3項(xiàng)指標(biāo)在2例乳頭狀癌中均為陰性表達(dá)。查閱大量文獻(xiàn)尚未發(fā)現(xiàn)有類似報(bào)道，目前對(duì)此現(xiàn)象還沒有很好的解釋，應(yīng)該結(jié)合組織學(xué)、免疫組化以及分子學(xué)特征進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。本研究顯示聯(lián)合使用CK19、Gal-3 和HBME-1在甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)診斷和鑒別診斷中具有實(shí)用價(jià)值，比使用單一指標(biāo)更具有診斷價(jià)值。

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