2種觀賞柳愈傷誘導外植體與最佳激素篩選試驗

王瑩等

摘要：對2種觀賞柳旱柳（Salix matsudana）、龍爪柳（Salix matsudana）進行愈傷組織誘導培養(yǎng)研究。結果表明：利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片；選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好；3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合均為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

關鍵詞：柳樹；外植體；愈傷組織；誘導培養(yǎng)；新品系；誘變選育

中圖分類號： S687.043；Q943.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金項目：江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所青年科技基金（編號：G122601）。

作者簡介：王瑩（1986—），女，碩士研究生，研究實習員，主要從事耐鹽植物育種研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳樹為楊柳科（Salicaceae）柳屬（Salix）落葉喬木、灌木或亞灌木，分布廣泛，品種豐富，適應性強。由于其具有速生、抗鹽堿、耐瘠薄、抗風沙等優(yōu)良特性，越來越受到育種工作者的青睞[1]。很多學者在柳樹綜合開發(fā)及遺傳改良方面作了大量工作[2]。受傳統(tǒng)方法的限制，柳樹育種研究存在技術瓶頸，如傳統(tǒng)的人工雜交方法耗時耗力、育種周期長[3]。轉基因技術雖然在柳樹新品種選育方面已得到應用，但是因為其轉導效率低且成本高等問題，效果并不顯著[4]。利用EMS化學誘變技術，可以有效解決誘變率低、成本高、育種周期長等問題，目前該技術已經(jīng)在農(nóng)作物及果樹中得到廣泛應用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝條柔軟，樹冠豐滿，是我國北方常用的行道樹。龍爪柳（Salix matsudana）小枝綠色且呈不規(guī)則扭曲，在我國各地多作為庭院綠化樹種。這2種柳樹都具有很高的觀賞價值，深受人們的喜愛，但是其耐鹽堿性均不強。筆者以旱柳、龍爪柳為研究對象，建立愈傷組織培養(yǎng)體系，旨在為柳樹新品系的誘變選育提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試材料為旱柳與龍爪柳幼嫩的莖段與葉片，均采自江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所柳樹種質(zhì)資源圃。采集2種柳樹當年生木質(zhì)化莖段，截成長約10～15 cm的小段，扦插在裝有基質(zhì)的育苗容器中，恒溫光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，光照時間為 16 h/d，控制溫度為（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1適宜外植體的篩選外植體有2種。（1）幼嫩莖段：每個莖段留1～2個腋芽，每個莖段長1.5～2.0 cm；（2）幼嫩葉片：用解剖刀將葉片切成1 cm×1 cm的小塊。培養(yǎng)基為：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒滅菌將合適的外植體置于洗潔精溶液中浸泡30 min，再用流動的自來水沖洗1.5～2 h，置于超凈臺上。先用75%乙醇浸泡外植體30 s，然后用無菌水沖洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其間不斷攪動使外植體與溶液充分接觸，之后用無菌水沖洗6～7次，用無菌濾紙吸干水分進行接種。

1.2.3激素種類與濃度的確定選用6-BA、NAA、2，4-D 3種激素，設計正交試驗（表1），以MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g/L，瓊脂7 g/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8，每瓶培養(yǎng)基接種2個外植體。

3結論與討論

植物表面攜帶大量的微生物，尤其是內(nèi)生菌較多的外植體，在接種前要進行徹底的消毒處理，但是消毒過度也會造成植物褐化及細胞死亡。本研究選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好。選取外植體時，生長活躍的器官一般能獲得較好的誘導效果[6]。本研究表明，利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片。植物生長調(diào)節(jié)物的配比及濃度可以極大地影響愈傷組織的誘導效率、質(zhì)地、生長量等[7]。本研究表明，3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合都為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中濃度的NAA與6-BA配合使用，可以顯著促進愈傷組織的發(fā)生與生長；高濃度的2，4-D不利于龍爪柳愈傷組織的生長，培養(yǎng)后期會出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，這可能與激素配比不當有關。

參考文獻：

[1]孫兆祜，張玉霞，梁群寶. 幾種柳樹抗逆性調(diào)查初報[J]. 甘肅林業(yè)科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]劉巍，蔄勝軍. 柳樹遺傳改良研究進展[J]. 遼寧林業(yè)科技，2012（1）：45-48.

[3]張繼明，張彩軍，郭俊. 柳樹雜交育種研究[J]. 內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黃敏仁. 柳樹遺傳學研究現(xiàn)狀與前景[J]. 植物學通報，2008，25（2）：240-247.

[5]吳偉剛，劉桂茹，楊學舉. 誘變與組織培養(yǎng)相結合在植物育種中的應用[J]. 中國農(nóng)學通報，2005，21（11）：197-201.

[6]黃華艷，吳耀軍. 柳窿桉芽器官離體培養(yǎng)研究[J]. 廣西林業(yè)科學，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黃劍，夏陽，等. 苜蓿組織培養(yǎng)高頻率再生體系的建立[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術學報，2003，11（3）：321-322.

摘要：對2種觀賞柳旱柳（Salix matsudana）、龍爪柳（Salix matsudana）進行愈傷組織誘導培養(yǎng)研究。結果表明：利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片；選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好；3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合均為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

關鍵詞：柳樹；外植體；愈傷組織；誘導培養(yǎng)；新品系；誘變選育

中圖分類號： S687.043；Q943.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金項目：江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所青年科技基金（編號：G122601）。

作者簡介：王瑩（1986—），女，碩士研究生，研究實習員，主要從事耐鹽植物育種研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳樹為楊柳科（Salicaceae）柳屬（Salix）落葉喬木、灌木或亞灌木，分布廣泛，品種豐富，適應性強。由于其具有速生、抗鹽堿、耐瘠薄、抗風沙等優(yōu)良特性，越來越受到育種工作者的青睞[1]。很多學者在柳樹綜合開發(fā)及遺傳改良方面作了大量工作[2]。受傳統(tǒng)方法的限制，柳樹育種研究存在技術瓶頸，如傳統(tǒng)的人工雜交方法耗時耗力、育種周期長[3]。轉基因技術雖然在柳樹新品種選育方面已得到應用，但是因為其轉導效率低且成本高等問題，效果并不顯著[4]。利用EMS化學誘變技術，可以有效解決誘變率低、成本高、育種周期長等問題，目前該技術已經(jīng)在農(nóng)作物及果樹中得到廣泛應用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝條柔軟，樹冠豐滿，是我國北方常用的行道樹。龍爪柳（Salix matsudana）小枝綠色且呈不規(guī)則扭曲，在我國各地多作為庭院綠化樹種。這2種柳樹都具有很高的觀賞價值，深受人們的喜愛，但是其耐鹽堿性均不強。筆者以旱柳、龍爪柳為研究對象，建立愈傷組織培養(yǎng)體系，旨在為柳樹新品系的誘變選育提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試材料為旱柳與龍爪柳幼嫩的莖段與葉片，均采自江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所柳樹種質(zhì)資源圃。采集2種柳樹當年生木質(zhì)化莖段，截成長約10～15 cm的小段，扦插在裝有基質(zhì)的育苗容器中，恒溫光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，光照時間為 16 h/d，控制溫度為（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1適宜外植體的篩選外植體有2種。（1）幼嫩莖段：每個莖段留1～2個腋芽，每個莖段長1.5～2.0 cm；（2）幼嫩葉片：用解剖刀將葉片切成1 cm×1 cm的小塊。培養(yǎng)基為：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒滅菌將合適的外植體置于洗潔精溶液中浸泡30 min，再用流動的自來水沖洗1.5～2 h，置于超凈臺上。先用75%乙醇浸泡外植體30 s，然后用無菌水沖洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其間不斷攪動使外植體與溶液充分接觸，之后用無菌水沖洗6～7次，用無菌濾紙吸干水分進行接種。

1.2.3激素種類與濃度的確定選用6-BA、NAA、2，4-D 3種激素，設計正交試驗（表1），以MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g/L，瓊脂7 g/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8，每瓶培養(yǎng)基接種2個外植體。

3結論與討論

植物表面攜帶大量的微生物，尤其是內(nèi)生菌較多的外植體，在接種前要進行徹底的消毒處理，但是消毒過度也會造成植物褐化及細胞死亡。本研究選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好。選取外植體時，生長活躍的器官一般能獲得較好的誘導效果[6]。本研究表明，利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片。植物生長調(diào)節(jié)物的配比及濃度可以極大地影響愈傷組織的誘導效率、質(zhì)地、生長量等[7]。本研究表明，3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合都為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中濃度的NAA與6-BA配合使用，可以顯著促進愈傷組織的發(fā)生與生長；高濃度的2，4-D不利于龍爪柳愈傷組織的生長，培養(yǎng)后期會出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，這可能與激素配比不當有關。

參考文獻：

[1]孫兆祜，張玉霞，梁群寶. 幾種柳樹抗逆性調(diào)查初報[J]. 甘肅林業(yè)科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]劉巍，蔄勝軍. 柳樹遺傳改良研究進展[J]. 遼寧林業(yè)科技，2012（1）：45-48.

[3]張繼明，張彩軍，郭俊. 柳樹雜交育種研究[J]. 內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黃敏仁. 柳樹遺傳學研究現(xiàn)狀與前景[J]. 植物學通報，2008，25（2）：240-247.

[5]吳偉剛，劉桂茹，楊學舉. 誘變與組織培養(yǎng)相結合在植物育種中的應用[J]. 中國農(nóng)學通報，2005，21（11）：197-201.

[6]黃華艷，吳耀軍. 柳窿桉芽器官離體培養(yǎng)研究[J]. 廣西林業(yè)科學，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黃劍，夏陽，等. 苜蓿組織培養(yǎng)高頻率再生體系的建立[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術學報，2003，11（3）：321-322.

摘要：對2種觀賞柳旱柳（Salix matsudana）、龍爪柳（Salix matsudana）進行愈傷組織誘導培養(yǎng)研究。結果表明：利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片；選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好；3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合均為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

關鍵詞：柳樹；外植體；愈傷組織；誘導培養(yǎng)；新品系；誘變選育

中圖分類號： S687.043；Q943.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金項目：江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所青年科技基金（編號：G122601）。

作者簡介：王瑩（1986—），女，碩士研究生，研究實習員，主要從事耐鹽植物育種研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳樹為楊柳科（Salicaceae）柳屬（Salix）落葉喬木、灌木或亞灌木，分布廣泛，品種豐富，適應性強。由于其具有速生、抗鹽堿、耐瘠薄、抗風沙等優(yōu)良特性，越來越受到育種工作者的青睞[1]。很多學者在柳樹綜合開發(fā)及遺傳改良方面作了大量工作[2]。受傳統(tǒng)方法的限制，柳樹育種研究存在技術瓶頸，如傳統(tǒng)的人工雜交方法耗時耗力、育種周期長[3]。轉基因技術雖然在柳樹新品種選育方面已得到應用，但是因為其轉導效率低且成本高等問題，效果并不顯著[4]。利用EMS化學誘變技術，可以有效解決誘變率低、成本高、育種周期長等問題，目前該技術已經(jīng)在農(nóng)作物及果樹中得到廣泛應用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝條柔軟，樹冠豐滿，是我國北方常用的行道樹。龍爪柳（Salix matsudana）小枝綠色且呈不規(guī)則扭曲，在我國各地多作為庭院綠化樹種。這2種柳樹都具有很高的觀賞價值，深受人們的喜愛，但是其耐鹽堿性均不強。筆者以旱柳、龍爪柳為研究對象，建立愈傷組織培養(yǎng)體系，旨在為柳樹新品系的誘變選育提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試材料為旱柳與龍爪柳幼嫩的莖段與葉片，均采自江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所柳樹種質(zhì)資源圃。采集2種柳樹當年生木質(zhì)化莖段，截成長約10～15 cm的小段，扦插在裝有基質(zhì)的育苗容器中，恒溫光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，光照時間為 16 h/d，控制溫度為（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1適宜外植體的篩選外植體有2種。（1）幼嫩莖段：每個莖段留1～2個腋芽，每個莖段長1.5～2.0 cm；（2）幼嫩葉片：用解剖刀將葉片切成1 cm×1 cm的小塊。培養(yǎng)基為：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒滅菌將合適的外植體置于洗潔精溶液中浸泡30 min，再用流動的自來水沖洗1.5～2 h，置于超凈臺上。先用75%乙醇浸泡外植體30 s，然后用無菌水沖洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其間不斷攪動使外植體與溶液充分接觸，之后用無菌水沖洗6～7次，用無菌濾紙吸干水分進行接種。

1.2.3激素種類與濃度的確定選用6-BA、NAA、2，4-D 3種激素，設計正交試驗（表1），以MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g/L，瓊脂7 g/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8，每瓶培養(yǎng)基接種2個外植體。

3結論與討論

植物表面攜帶大量的微生物，尤其是內(nèi)生菌較多的外植體，在接種前要進行徹底的消毒處理，但是消毒過度也會造成植物褐化及細胞死亡。本研究選用乙醇與HgCl2溶液組合作為消毒劑，滅菌效果較好。選取外植體時，生長活躍的器官一般能獲得較好的誘導效果[6]。本研究表明，利用莖尖誘導培養(yǎng)愈傷組織的誘導效果明顯優(yōu)于葉片。植物生長調(diào)節(jié)物的配比及濃度可以極大地影響愈傷組織的誘導效率、質(zhì)地、生長量等[7]。本研究表明，3個因素對旱柳、龍爪柳愈傷組織誘導影響由大到小依次為NAA濃度、6-BA濃度、2，4-D濃度，對2種柳樹而言，最優(yōu)組合都為6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中濃度的NAA與6-BA配合使用，可以顯著促進愈傷組織的發(fā)生與生長；高濃度的2，4-D不利于龍爪柳愈傷組織的生長，培養(yǎng)后期會出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，這可能與激素配比不當有關。

參考文獻：

[1]孫兆祜，張玉霞，梁群寶. 幾種柳樹抗逆性調(diào)查初報[J]. 甘肅林業(yè)科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]劉巍，蔄勝軍. 柳樹遺傳改良研究進展[J]. 遼寧林業(yè)科技，2012（1）：45-48.

[3]張繼明，張彩軍，郭俊. 柳樹雜交育種研究[J]. 內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黃敏仁. 柳樹遺傳學研究現(xiàn)狀與前景[J]. 植物學通報，2008，25（2）：240-247.

[5]吳偉剛，劉桂茹，楊學舉. 誘變與組織培養(yǎng)相結合在植物育種中的應用[J]. 中國農(nóng)學通報，2005，21（11）：197-201.

[6]黃華艷，吳耀軍. 柳窿桉芽器官離體培養(yǎng)研究[J]. 廣西林業(yè)科學，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黃劍，夏陽，等. 苜蓿組織培養(yǎng)高頻率再生體系的建立[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術學報，2003，11（3）：321-322.