淺談T細(xì)胞γ干擾素釋放實驗對診斷潛伏性結(jié)核感染的臨床應(yīng)用

劉穎

四川省德陽市人民醫(yī)院心胸外科，四川綿竹 618000

【摘要】結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，好發(fā)于15歲到35歲的青少年。其潛伏期為4～8周，其中80%發(fā)生在肺部，其它部位（頸淋巴、腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼）也可繼發(fā)感染。人與人之間呼吸道傳播是主要傳播方式。我國是全球22個結(jié)核病流行最嚴(yán)重的國家之一。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是控制結(jié)核病情的根本所在，本文就T細(xì)胞γ干擾素釋放實驗對診斷潛伏性結(jié)核感染的臨床應(yīng)用進(jìn)行闡述。

【關(guān)鍵詞】T細(xì)胞γ干擾素釋放實驗；診斷； 潛伏性結(jié)核感染

【中圖分類號】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）12-0083-02

1.傳統(tǒng)檢驗方法

1.1涂片檢測

將患者的痰液或是其它部位的體液制成涂片在鏡下檢測患者的陰、陽性。

1.2 X線檢查

可早期發(fā)現(xiàn)結(jié)核，而且可對病灶的部位、范圍、性質(zhì)、發(fā)展情況和效果作出診斷。

1.3結(jié)核菌素試驗（PPD試驗）

（1）陽性 表示結(jié)核感染，但并不一定患病。皮試呈陽性者，常提示體內(nèi)有活動性結(jié)核灶。

（2）陰性 提示沒有結(jié)核菌感染。但仍要排除下列情況。①結(jié)核菌感染后，需4～8周變態(tài)反應(yīng)才能充分建立；所以在變態(tài)反應(yīng)前期，結(jié)素試驗可為陰性。②應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑者營養(yǎng)不良以及麻疹、百日咳患者，結(jié)素反應(yīng)可暫時消失。③嚴(yán)重結(jié)核病和各種危重患者對結(jié)素?zé)o反應(yīng)。④其它：如淋巴免疫系統(tǒng)缺陷（白血病、結(jié)節(jié)?。┗颊吆屠夏耆说慕Y(jié)素反應(yīng)也常為陰性。

由于我國幾乎所有人群均有卡介苗（ BCG ）接種史，PPD結(jié)果不準(zhǔn)確，僅供于篩查。傳統(tǒng)的診斷方法檢測率相對低且肺外結(jié)核診斷困難、常有“假陰/陽性”出現(xiàn)，延誤了早期發(fā)現(xiàn)及早期治療的最佳時機，隨著對IFN-γ在調(diào)節(jié)結(jié)核感染引起的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起到的關(guān)鍵性作用的不斷了解，人們逐步認(rèn)識到γ-干擾素釋放試驗（interferon gamma release assays， IGRAs）可用于結(jié)核感染的診斷1。資料顯示，IGRA特異性為98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA（T-SPOT.TB和QFT-G-IT）對2年內(nèi)進(jìn)展為結(jié)核的陰性預(yù)測值（NPV）分別為97.8%和99.8%；當(dāng)免疫診斷檢測不局限于既往其他檢測陽性受試人群時，在隨訪19～24個月IGRA陽性者中結(jié)核進(jìn)展率處于8%～15%，并且高于TST相關(guān)結(jié)果2。

2.T細(xì)胞γ-干擾素釋放試驗（IGRAs）

2.1原理

γ-干擾素釋放試驗是利用結(jié)核分枝桿菌特異或非特異抗原在體外刺激受檢者全血或外周血單個核細(xì)胞（PBMC），使T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量IFN-γ，然后用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）或酶聯(lián)免疫斑點法（ELISPOT）檢測IFN-γ濃度或計數(shù)分泌IFN-γ細(xì)胞的方法。國際上廣泛使用的IGRA有兩種，即澳大利亞產(chǎn)的QuantiFERON-TB Gold In-Tube（QFT-GIT）和英國產(chǎn)的T-SPOT.TB。我國各地醫(yī)院應(yīng)用最為普遍的是T-SPOT.TB。目前IGRA 已經(jīng)開始在英、美、日本等國用于活動性結(jié)核病和潛伏性結(jié)核感染者的診斷， HIV 合并結(jié)核感染的檢測， 區(qū)別結(jié)核感染者與BCG 接種以及耐藥結(jié)核菌感染的快速檢測等3。

2.2臨床意義

陰性結(jié)果 提示患者體內(nèi)可能不存在針對結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞，基本可以排除結(jié)核桿菌感染的可能。

陽性結(jié)果 提示患者體內(nèi)存在針對結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞，患者存在結(jié)核感染。但是否是活動性結(jié)核病，需結(jié)合臨床癥狀和其它檢測指標(biāo)綜合判斷。T-SPOT.TB能更加準(zhǔn)確地診斷潛伏性結(jié)核感染，對預(yù)測結(jié)核發(fā)病風(fēng)險方面有一定意。

2.3臨床應(yīng)用：

⑴. 結(jié)核病診斷與鑒別診斷、抗結(jié)核治療的療效評價；⑵. 免疫力低下/受抑制患者的結(jié)核診斷/感染篩查；使用生物制劑或免疫抑制劑患者的結(jié)核感染篩查：⑶ HIV感染者/腎透析患者/器官移植患者；⑷. 兒童結(jié)核病的輔助診斷4；⑸.結(jié)核密切接觸者/高危人群的結(jié)核感染篩查；⑹. 密切接觸者追蹤等。

3.標(biāo)本采集與處理、注意事項

本實驗引進(jìn)英國牛津原裝進(jìn)口試劑，基于牛津大學(xué)研發(fā)的特異性T細(xì)胞反應(yīng)技術(shù)平臺。

3.1抽血時間：星期一至五上午，當(dāng)天11：00前統(tǒng)一收集。

3.2采集外周全血，無需空腹，需用專用綠色帽肝素（肝素鈉或肝素鋰）抗凝采血管采集，不得使用EDTA抗凝。

3.3采血量要求：

⑴ 2歲以下兒童 3-4ml （用一支5ml綠色帽肝素管）

⑵ 其它患者 6-8ml （用兩支5ml綠色帽肝素管）

⑶ 免疫力低下/受抑制患者 8-12ml （用兩支5ml綠色帽肝素管）

（免疫力低下/受抑制患者：白細(xì)胞數(shù)WBC<5.0×10*9/L）

3.4樣本室溫（15-25℃）保存與運輸，不得冷凍/冷藏，樣本采集后4小時內(nèi)送到實驗室，以便盡快完成檢測。

3.5 10天內(nèi)做過PET-CT或一周內(nèi)有使用升高白細(xì)胞藥物的患者，會影響血液中淋巴細(xì)胞的分離，建議一周后再行檢測。

3.6 保存及運輸過程中防止顛簸，避免樣本溶血影響結(jié)果。

3.7 48小時送出報告單（因細(xì)胞培養(yǎng)時間需要24小時）。

T細(xì)胞γ干擾素釋放實驗具有較高的特異性和敏感性，是當(dāng)前快速檢測結(jié)核感染和健康人群篩查潛伏性結(jié)核感染較有潛力的新方法。然而也存在操作技術(shù)要求高，試劑盒價格昂貴等缺點，限制了其在經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平低的發(fā)展中國家的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]肖倩，黃旭峰. T-SPOT TB試驗快速檢測結(jié)核桿菌感染的臨床應(yīng)用研究[J]實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2009，27（3）：272-274

[2]高曉方，γ-干擾素釋放試驗研究進(jìn)展 ，中國醫(yī)學(xué)論壇報 ，2011 ，1（7 ）：33-34

[3]張晶，劉威龍，周伯平，等. 結(jié)核分枝桿菌ESAT-6 蛋白的高效表達(dá)及在結(jié)核菌特異性細(xì)胞免疫檢測中的應(yīng)用[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2009，32（1）：55-59.

[4]張衛(wèi)平 韓 文 白玉峽， 等. 結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗輔助診斷小兒肺結(jié)核的臨床研究.[J]臨床兒科雜志，2009，27（7）：635-637