蒙醫(yī)溫針對失眠大鼠海馬中Glu、GABA、ACh 含量的影響△

木日根吉雅 阿古拉

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029; 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

近年來，隨著社會的迅速發(fā)展、生活節(jié)奏的加快、人口老齡化，使失眠的發(fā)病率急劇上升，其危害性將進一步顯現(xiàn)［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)采取的對癥處理的治療方法，多使用巴比妥類、苯二氮卓類以及非苯二氮卓類藥物來調(diào)節(jié)失眠癥。藥物治療在改善失眠癥狀的同時，往往伴有不同程度毒副作用，并且容易形成藥物依賴，療效也容易反彈，并非一種理想的治療方法。所以尋找一種安全、有效、無副作用、不易產(chǎn)生藥物依賴的治療失眠的方法，有著重要的意義。蒙醫(yī)文獻記載與現(xiàn)代臨床實驗證明，蒙醫(yī)溫針療法對失眠癥的療效顯著，同時具有無毒副作用、安全可靠、簡便易行等優(yōu)點。本實驗選取臨床中最常選用的頂會穴、赫依穴、心穴等穴位，觀察溫針刺激上述穴位對失眠大鼠海馬組織中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、乙酰膽堿(Ach)含量的影響，為臨床治療失眠選穴提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物: 健康雄性 清潔級SD 大鼠60 只，體重180～280g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心提供。許可證號: SCXK(軍)2007 -004。

1.2 試劑及儀器: MLY -I 型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀(特制銀針，長2cm、直徑0.5mm)，由內(nèi)蒙古元陽中蒙醫(yī)科技開發(fā)有限責任公司提供;BS124S 型電子d 平，購自北京賽多利斯d 平廠;YP1002N 型電子d 平，購自上海青海器械有限公司;HC-2018R 高速冷凍離心機，購自安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;Prominence CBM -20A 高效液相色譜儀(日本島津)，購自賽普瑞斯(北京)科技有限公司;對氯苯丙氨酸(PCPA)、Glu、GABA 、Ach、戊巴比妥鈉等均購自Sigma 公司。地西泮注射液，購自西安利君制藥有限責任公司。

1.3 造模方法［2］: 適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，第8d 開始每日上午8: 30 ～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，連續(xù)2d。PCPA(對氯苯丙氨酸)用生理鹽水(pH: 7 ～8)溶解，按lml/100g 配制成混懸液。在第一次腹腔注射PCPA 后28 ～30h，大鼠出現(xiàn)活動明顯頻繁，對外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，攻擊性增強，大便色灰白，晝夜節(jié)律紊亂，白天也活動不停等現(xiàn)象，表明造模成功。

1.4 分組安排: 將60 只SD 雄性大鼠隨機分為4 組，即正常組、模型組、溫針組和地西泮組，每組15 只大鼠。

正常組: 適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，第8d 開始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射生理鹽水(0.lml/kg)，連續(xù)2d。每日定點喂食2 次，每次1 小時，不予其他刺激;

模型組: 適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，第8d 開始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，連續(xù)2d，但不給予其他刺激;

溫針組: 適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，第8d 開始每日上午8: 30～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，連續(xù)2d。第10d 開始在大鼠頂會穴、赫依穴和心穴［3］給予溫針刺激，每次溫針刺激15min(蒙醫(yī)MY - I 型電熱溫針器)，加熱溫度為40℃左右(防止灼傷針刺部位)，每日治療1 次，7d 為1 個療程;

地西泮組: 適應(yīng)性飼養(yǎng)7d 后，第8d 開始每日上午8: 30 ～9: 00 腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型，連續(xù)2d。第10d 開始大鼠腹腔注射地西泮注射液，0.92mg/kg/d，1 次/d，7d 為1 個療程。

1.5 取材: 將4 組大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦海馬稱重，-80℃冰箱保存待測。

1.6 指標檢測: 采用高效液相色譜加電化學(xué)(HPLC -ECD)方法測定谷氨酸(Glu)、γ -氨基丁酸(GABA)水平;采用高效液相-柱后衍生化-電化學(xué)檢測器(HPLC -RE-ECD)方法測定乙酰膽堿(Ach)水平。

2 結(jié) 果

各組海馬組織中Glu、GABA、ACh 含量的變化(見表1): 各組海馬組織中Glu、GABA、ACh 含量檢測結(jié)果顯示。

表1 各組海馬組織中Glu、GABA、ACh 含量的變化

與空白組比較，模型組大鼠海馬中Glu 含量顯著升高(P＜0.01)，GABA、ACh 含量均顯著降低(P＜0.01);與模型組比較，溫針組大鼠海馬中Glu 含量顯著降低(P＜0.01)，GABA、ACh 含量均升高(P＜0.05)，地西泮組大鼠海馬中Glu 含量降低(P＜0.05)，GABA、ACh 含量均有所升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);與溫針組比較，地西泮組大鼠海馬中Glu、GABA、ACh 含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討 論

從本研究來看，大鼠注射PCPA 造模后，海馬組織中Glu 含量顯著升高，GABA、ACh 含量均顯著降低，這證明PCPA 促Glu，抑制GABA、ACh 分泌而使大鼠失眠。與模型組相比，溫針組海馬中Glu 含量明顯降低，GABA、ACh 含量均升高。證明溫針具有較好的調(diào)節(jié)海馬中Glu、GABA、ACh含量的作用。與模型組比較，地西泮組海馬中Glu 含量降低，但GABA、ACh 含量均無差異，證明地西泮對腦組織GABA、ACh 含量影響較弱。與地西泮組比較，溫針組海馬中Glu、GABA、ACh 含量均無差異，但溫針組各指標含量更接近于空白組，可見溫針治療失眠的作用與地西泮相同或可能高于地西泮。

失眠癥屬蒙醫(yī)“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調(diào)而形成的“赫依”病。是“三根”失衡，“赫依”偏盛而導(dǎo)致。因此蒙醫(yī)治療失眠癥主要原則是抑制“赫依”、調(diào)節(jié)“三根”為主［4］。蒙醫(yī)溫針是集針刺效應(yīng)、溫熱效應(yīng)以及穴位特異性刺激為一體，通過對血液循環(huán)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫功能等多系統(tǒng)、多渠道、多途徑的復(fù)雜機制，達到調(diào)節(jié)機體、治療疾病的目的［5］。通過溫針作用于相應(yīng)的穴位上具有很好的鎮(zhèn)“赫依”，平衡“三根”的作用，從而達到治療失眠的目的。

失眠與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸與抑制性氨基酸神經(jīng) 遞質(zhì)的平衡失調(diào)密切相關(guān)。GLU 是主要的興奮性遞質(zhì)，對中樞 神經(jīng)系統(tǒng)所有神經(jīng)元均起興奮作用，其釋放的增加導(dǎo)致興奮性 神經(jīng)毒性，在失眠中起重要作用。GABA 由GLU 經(jīng)谷氨酸脫羧酶 脫羧而成，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的抑制性遞質(zhì)，具有神經(jīng) 保護作用［6］。而乙酰膽堿(ACh)是中樞膽堿能系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，其主要功能是維持意識的清醒，在學(xué)習(xí)記憶中起重要作用［7］。蒙醫(yī)溫針可以明顯降低失眠大鼠海馬中Glu 含量和升高海馬中GABA、ACh 含量，從而使大腦興奮性降低。由此認為蒙醫(yī)溫針促睡眠機制與其可以調(diào)節(jié)失眠大鼠海馬中Glu、GABA、ACh 含量密切相關(guān)，其促睡眠機制是否與其他中樞神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)系有待進一步深入研究。

［1］周艷麗.針刺不同腧穴對失眠模型大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA 影響的實驗研究［J］. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，18(8): 887 -888.

［2］黎發(fā)根，李紹旦，楊明會，等. 和胃安神方對失眠大鼠腦組織谷氨酸與γ-氨基丁酸含量的影響［J］. 中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20(2): 50 -51.

［3］博·阿古拉. 蒙醫(yī)傳統(tǒng)療術(shù)學(xué)［M］. 呼和浩特市: 內(nèi)蒙古大學(xué)出版社，2011: 223 -243.

［4］策·蘇榮扎布. 蒙醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］. 內(nèi)蒙古人民出版社，2011: 30 -31.

［5］阿古拉，陳英松. 蒙醫(yī)傳統(tǒng)溫針療法對機體的生物效應(yīng)［J］. 中國科技成果，2009，10(3): 19 -20.

［6］黎發(fā)根，李紹旦，楊明會等. 和胃安神方對失眠大鼠腦組織谷氨酸與γ-氨基丁酸含量的影響［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，20(2): 50 -51.

［7］曾春萍.桃仁復(fù)蘇湯對小鼠腦中乙酰膽堿含量、過氧化氫酶及谷胱甘肽過氧化酶活性的影響［J］. 現(xiàn)代中藥研究與實踐，2013，27(4): 30 -31.