HS-GC-MS法測定績獨(dú)活中揮發(fā)性成分

賈淑云，王 斌

（1.安徽省亳州市人民醫(yī)院，安徽 亳州 236800；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230038）

◇藥物分析◇

HS-GC-MS法測定績獨(dú)活中揮發(fā)性成分

賈淑云1，王 斌2

（1.安徽省亳州市人民醫(yī)院，安徽 亳州 236800；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230038）

目的 測定績獨(dú)活（重齒毛當(dāng)歸）中揮發(fā)性成分。方法 采用頂空進(jìn)樣—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜（HS-GC-MS）聯(lián)用技術(shù)，并通過所用質(zhì)譜庫（NIST 11.L）檢索研究其揮發(fā)性化學(xué)成分組成，用面積歸一化法確定各成分的相對百分含量。結(jié)果 共分辨出235個色譜峰，鑒定出99個化學(xué)成分，約占總揮發(fā)性成分含量的85.23%。結(jié)論 該實(shí)驗所建立的方法分離效果較好，所鑒定組分較準(zhǔn)確，能夠較全面反映出獨(dú)活中的主要揮發(fā)性成分，為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用研究提供了科學(xué)依據(jù)，有一定的參考價值。

績獨(dú)活；重齒毛當(dāng)歸；頂空；氣相色譜；質(zhì)譜；揮發(fā)性

重齒毛當(dāng)歸（Angelica pubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan）為傘形科植物，其根及根莖又名獨(dú)活，有祛風(fēng)除濕、舒筋活血、散寒止痛等功效，為臨床治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕的首選藥?，F(xiàn)代研究表明［1-3］，獨(dú)活有抗炎、鎮(zhèn)痛及鎮(zhèn)靜作用；對血小板聚集有抑制作用，并有降壓作用，但不持久。揮發(fā)油是獨(dú)活的主要活性成分之一。孫文暢等［4］報道了獨(dú)活揮發(fā)油不僅可以抑制 NAAA水解活性，升高LPS誘導(dǎo)的 RAW264.7細(xì)胞內(nèi) PEA水平，而且還可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞 TNF-α和NO釋放。目前，獨(dú)活藥材中揮發(fā)性成分的提取方法主要采用水蒸氣蒸餾法［5］和超臨界流體萃取法［6］。水蒸氣蒸餾法雖然具有操作簡單、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，但該法不但耗時較長，而且需要的樣品量和溶劑量也較大。超臨界流體萃取雖然其萃取條件溫和，無任何有機(jī)殘留等優(yōu)點(diǎn)，但該法操作復(fù)雜并且費(fèi)用較高。因此，這些方法與現(xiàn)代儀器分析要求的省時省力、操作簡便的理念并不相符。建立快速簡便、無需前處理的分析方法更能符合現(xiàn)代儀器分析的要求。頂空—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜（HS-GC-MS）聯(lián)用技術(shù)［7-8］具有無需溶劑提取和分離繁瑣等優(yōu)點(diǎn)，在揮發(fā)性物質(zhì)分析中發(fā)揮獨(dú)特的優(yōu)勢，本文首次實(shí)現(xiàn) HS-GC-MS聯(lián)用技術(shù)對績獨(dú)活中揮發(fā)性成分的檢測，為闡明獨(dú)活中藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了借鑒。

1 儀器和試藥

BRULER SHS-40自動頂空進(jìn)樣器（Bruker公司，美國），456-GC型氣相色譜儀（Bruker公司，美國），SCION單四極桿質(zhì)譜儀（Bruker公司，美國），質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫 NIST 11.L。獨(dú)活藥材購于亳州市藥材市場，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院孟楣主任藥師鑒定為重齒毛當(dāng)歸的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 HS-GC-MS

2.1.1 頂空進(jìn)樣器條件 稱取績獨(dú)活藥材約20.0 g，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過180目篩。精密稱取獨(dú)活藥材粉末1.0 g，放入20 mL頂空瓶中密封并置頂空進(jìn)樣器上，根據(jù)頂空進(jìn)樣條件進(jìn)樣。頂空進(jìn)樣條件：樣品瓶加熱溫度為90℃；定量環(huán)溫度為125℃；傳輸線溫度為140℃；樣品瓶加熱時間為30 min。

2.1.2 氣相色譜條件 BR-17型彈性毛細(xì)管色譜柱 （0.25 μm×250 μm ×30 m）；載氣：高純氦氣，純度≥99.999%（南京上元工業(yè)氣體廠）；高純氮?dú)?，純度?9.999%（南京上元工業(yè)氣體廠）；柱流量1.0 mL·min-1；采用分流進(jìn)樣，分流比10∶1；進(jìn)樣量1.0 μL，進(jìn)樣口溫度為260℃；溶劑延時為3.5 min。程序升溫條件：初始溫度為50℃ （保持2 min），以2℃·min-1的速度升溫至 100℃（保持 3 min），再以4℃·min-1的速度升溫至 220℃（保持3 min），最后以 5℃·min-1的速度升溫至 280℃（保持5 min）。

2.1.3 質(zhì)譜條件 EI離子源，電子能量70 eV；離子源溫度為220℃；傳輸線溫度為280℃；四級桿溫度為40℃。全掃描模式；掃描范圍：m／z 50～500；質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫：NIST 11.L。

2.2 GC-MS檢測結(jié)果

2.2.1 藥材獨(dú)活中揮發(fā)性成分的總離子流圖 在上述 GC-MS條件下，從獨(dú)活揮發(fā)性成分中共分離出235個色譜峰，參照文獻(xiàn)及 NIST 11.L質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫，鑒定出了99個色譜峰，其中有12個化合物為首次從獨(dú)活藥材中鑒定出，實(shí)現(xiàn)了對獨(dú)活中揮發(fā)性成分的最大揮出率和最佳分離效果（見圖1）。

圖1 獨(dú)活中揮發(fā)性成分總離子流圖

2.2.2 獨(dú)活揮發(fā)性成分分析 對獲取的 GC-MS數(shù)據(jù)，采用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一化法測定其中各組分相對百分含量。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過 NIST 11.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，并結(jié)合人工譜圖解析，對基峰、質(zhì)荷比和相對豐度等方面進(jìn)行直觀比較，共分辨出235個色譜峰，鑒定出 99個化學(xué)成分，占已分離總組分含量的85.23%，見表1。所鑒定出的化學(xué)成分中有6種成分的相對含量超過5%。

3 討論

3.1 固氣平衡溫度的確定 固體樣品的氣化是頂空進(jìn)樣的前提，而樣品的氣化效果與加熱溫度密切相關(guān)，因此對樣品加熱溫度的選定至關(guān)重要。本實(shí)驗中分別考察了固氣平衡溫度在70、80、90和100℃下的色譜分離效果，結(jié)果在90℃時分離出的色譜峰最多，為235個組分。表明 90℃時樣品已達(dá)到最佳氣固平衡，繼續(xù)升溫對樣品中揮發(fā)性物質(zhì)的揮出率影響不大，故最終選定 90℃為樣品固氣平衡溫度。

3.2 程序升溫條件的確定 氣相色譜的程序升溫條件對樣品的分析至關(guān)重要。升溫過快，樣品不能較好分離。如本實(shí)驗預(yù)實(shí)驗中以20℃·min-1的速率升溫，分離效果較差，同時標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索顯示各峰的匹配度較低。溫度太低，部分樣品未能檢測。本實(shí)驗中程序升溫最高溫度設(shè)在250℃時，樣品中的部分揮發(fā)性物質(zhì)未能全部氣化。通過進(jìn)一步的探討考察，最終選擇初始溫度為50℃（保持 2 min），以2℃·min-1的速度升溫至 100℃（保持 3 min），再以 4℃·min-1的速度升溫至 220℃（保持3 min），最后以 5℃·min-1的速度升溫至 280℃（保持5 min）的條件實(shí)現(xiàn)了對獨(dú)活中揮發(fā)性成分的分析檢測。

4 結(jié)論

獨(dú)活中揮發(fā)性成分主要為醇類，酮類，烯烴類，醚類，醛類，酸類，酚類，烴類，酯類和雜環(huán)類物質(zhì)。含量分別為 27.06%，18.57%，15.57%，6.80%，6.53%，4.78%，2.88%，1.45%，1.19%和0.40%。其中，主要成分中的α-甜沒藥萜醇能增強(qiáng)藥物透皮作用［9］，歐芹酚甲醚具有抗心律失常，抗炎，抗菌，抗骨質(zhì)疏松，抗腫瘤，抗血栓及抗血小板凝集等作用［10］。這些成分的研究為進(jìn)一步研究獨(dú)活的藥理藥效作用提供了化學(xué)依據(jù)。

表1-1 獨(dú)活中99種揮發(fā)性成分 GC-MS分析

表1-2 獨(dú)活中99種揮發(fā)性成分 GC-MS分析

本實(shí)驗首次采用HS-GC-MS聯(lián)用儀分析了獨(dú)活中揮發(fā)性成分，其中 12個化合物為首次從獨(dú)活藥材中鑒定出，較全面地反映出了獨(dú)活中的揮發(fā)性物質(zhì)，為闡明獨(dú)活的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了科學(xué)依據(jù)。

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Determination of volatile components of Jiduhuo（Angelica biserrata）by HS-GC-MS

JIA Shu-yun1，WANG Bin2
（1.The People’s Hospital of Bozhou，Bozhou，Anhui 236800，China；2.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230038，China）

Objective To determine the volatile components in Jiduhuo（Angelica pubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan）.Methods The volatile components of Duhuo were evaluated by HS-GC-MS and NIST Mass Spectral Database.The relative contents in each component were determined by area normalization.Results Two hundred and thirty-five peaks were separated and 99 compounds were identified，amounting to 85.23%of the total content.Conclusions The method established showed a good separation result and more accurate identification of components.In addition，the main volatile components in Duhuo can be fully reflected by this method，which provides scientific basis for further development，application and research，and has certain value for reference.

Jiduhuo；Angelica biserrata；headspace；gas chromatography；mass spectra；volatile

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.08.008

2014-01-25，

2014-03-20）

安徽高校校級青年科學(xué)研究項目（No 2012qn020）；安徽高校校級自然科學(xué)研究項目（No 2013zr016）