不規(guī)則抗體血液的處理及應(yīng)用探討

馮剛麗

[摘要] 無償獻(xiàn)血工作中，隨著免疫血液學(xué)技術(shù)的發(fā)展和長(zhǎng)期輸血實(shí)踐的積累，檢測(cè)技術(shù)不斷創(chuàng)新，采集的血液中不規(guī)則抗體篩查率不斷提高。不規(guī)則抗體血液不經(jīng)處理，患者輸注后會(huì)出現(xiàn)一系列不同程度的輸血反應(yīng)，危及病人的健康和生命安全。將此類血液報(bào)廢，既浪費(fèi)血液資源又加重了血液的供需矛盾。對(duì)此類血液進(jìn)行科學(xué)管理及合理的處理后應(yīng)用于臨床，不但緩解了血液的緊張供應(yīng)又提高了輸血的安全性。

[關(guān)鍵詞] 不規(guī)則抗體； 血液； 處理； 應(yīng)用

[中圖分類號(hào)] R331.1；457.1+1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）17-0082-04

The processing and application of the blood containing irregular antibodies

FENG Gangli

Blood Distribution Department of Xiantao Blood Bank in Hubei Province， Xiantao 433000，China

[Abstract] With the development of immunohematology technology and the experience accumulation of blood transfusion as well as the continuous innovation of detection technology， the screening test rate of irregular antibodies in the collected blood has been improving. Patients transfused with the blood containing irregular antibodies could suffer a series of fatal blood transfusion reactions which often endanger recipients health and life. Dumping such blood containing irregular antibodies is a waste of blood resource. It also increases the contradictions between the blood supply and demand. With a scientific management and appropriate processing， blood containing irregular antibodies can not only ease the blood supply shortage but also ensure the transfusion safety to clinical practice.

[Key words] Irregular antibodies； Blood； Processing； Application

不規(guī)則抗體又稱意外抗體，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體。隨著改革開放步伐的加快、人群流動(dòng)性加大和醫(yī)療技術(shù)的提高及大型手術(shù)的開展，輸血工作出現(xiàn)新的問題，即用血量增加，大量輸血和反復(fù)輸血的病例增多，人群血型差異加大，不規(guī)則抗體的重要性凸顯出來。直接輸注此類血液會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)不同程度的輸血反應(yīng)，為此，筆者就不規(guī)則抗體血液的科學(xué)處理及應(yīng)用進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 不規(guī)則抗體篩查的重要性

由于血液系統(tǒng)的不規(guī)則抗體可能導(dǎo)致輸血反應(yīng)，輕者引起畏寒、發(fā)熱，重者紅細(xì)胞受到嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)，甚至危及受血者的生命。此外對(duì)孕婦而言，可引起新生兒溶血病，影響新生兒器官的發(fā)育，并抑制他們的智力發(fā)育，嚴(yán)重危及新生兒生命。衛(wèi)生部明文規(guī)定有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接受多次輸血者必須做抗體篩選試驗(yàn)。因此，抗體篩查是必要的，其重要性主要有以下三個(gè)方面[1，2]。

1.1無償獻(xiàn)血采集的血液進(jìn)行抗體篩查

無償獻(xiàn)血采集的血液進(jìn)行抗體篩查可以有效管理不規(guī)則抗體血液的捐助，避免由于獻(xiàn)血者血液中不規(guī)則抗體引起患者紅細(xì)胞破壞而引起溶血性輸血反應(yīng)，減少不必要的血液浪費(fèi)，降低血液成本。

1.2 實(shí)行患者輸血前不規(guī)則抗體篩查

實(shí)行患者輸血前不規(guī)則抗體篩查可以有足夠的時(shí)間選擇不包含針對(duì)不規(guī)則抗體的相應(yīng)抗原的血液，從而防止含有抗原的血液輸注含有相應(yīng)的抗體的患者體內(nèi)，并引起溶血輸血反應(yīng)，以確保輸血安全。

1.3孕婦進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查

盡早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，可以在孕期進(jìn)行新生兒溶血病的預(yù)防和治療，減少不規(guī)則抗體給胎兒或新生兒帶來的傷害，減輕新生兒溶血病的程度，提高胎兒或新生兒的身體素質(zhì)[3-9]。

2 不規(guī)則抗體血液的處理方法

2.1采用高濃度甘油慢凍法處理

在血液采集2～6 d內(nèi)，經(jīng)離心分離出血漿、白細(xì)胞及血小板，向剩余濃縮紅細(xì)胞內(nèi)加入57.1%甘油溶液，1U濃縮紅細(xì)胞加入甘油160 mL，1.5U濃縮紅細(xì)胞加入甘油240mL，2U濃縮紅細(xì)胞加入甘油320mL。使甘油最終濃度為40%。在加甘油的同時(shí)要不斷振蕩，速度應(yīng)先慢后快，15～20min加畢。在室溫平衡30min后，放入-80℃低溫冰箱保存，并做好標(biāo)識(shí)。美國(guó)FDA允許此法保存期為10年[10]。

2.2采用封閉式或開放式洗滌

采用封閉式或開放式洗滌法將不規(guī)則抗體血液制備成紅細(xì)胞回收率≥70%，血漿蛋白清除率≥98%，白細(xì)胞清除率≥80%。外觀無凝塊、溶血、氣泡，上清液澄清透明的洗滌紅細(xì)胞（WRC）。endprint

2.2.1封閉式三聯(lián)鹽水袋洗滌法 三聯(lián)鹽水袋為3個(gè)容積為350～400 mL、單袋用塑料管道相連的密閉無菌無熱源系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有200 mL注射用生理鹽水，主袋連接穿刺針頭1個(gè)。三個(gè)袋子之間用塑料夾子夾住，彼此不相連。①保存期內(nèi)的不規(guī)則抗體血液用作洗滌紅細(xì)胞的原料。②將三聯(lián)鹽水袋主袋上的針頭插入紅細(xì)胞袋的進(jìn)針座內(nèi)，把主袋內(nèi)200 mL鹽水加入紅細(xì)胞袋內(nèi)，充分混勻后，倒流入三聯(lián)袋主袋內(nèi)。③四個(gè)袋子分別裝于離心套桶中配平后，對(duì)稱放入賀利離心機(jī)內(nèi)，在轉(zhuǎn)速3600轉(zhuǎn)/min、溫度4℃條件下，離心8 min。④離心后將裝有血液的血袋懸掛于支架上，將上清和白膜分入空袋內(nèi)，熱合切斷與廢液相連的塑料管，棄去廢液袋。⑤重復(fù)②～④步驟，依次洗滌紅細(xì)胞3次。⑥洗滌紅細(xì)胞制品在三聯(lián)袋的末袋內(nèi)，將與末袋相連的塑料管內(nèi)充滿紅細(xì)胞，分段熱合留樣本，用以臨床鑒定血型和交叉配型。

2.2.2集采血與洗滌于一體的洗滌方法 洗滌后增加紅細(xì)胞保存時(shí)間，減少在洗滌過程中對(duì)血液的污染。首先將血液置于母袋中CPD液中分離，將上層血漿移至空袋，將導(dǎo)管密封，血漿備用；再將第三袋中Map液移至母袋中混勻，進(jìn)行第一次洗滌；將第四袋一部分Map液移至母袋中混勻，進(jìn)行第二次洗滌；重復(fù)操作，進(jìn)行第三次洗滌；將第四袋中剩余的Map液全部移至母袋中，密封，斷掉第三、四袋，將母袋中紅細(xì)胞與Map液混勻即可，此集采血與洗滌于一體，使用方便、安全，可在（4±2）℃保存30d[11]。

2.2.3開放式洗滌法 用普通醫(yī)用生理鹽水，在百級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)連接洗滌：①將有效期內(nèi)檢測(cè)合格不規(guī)則抗體血液放入潔凈工作臺(tái)，并懸掛于分漿架上。②在超凈臺(tái)上用無菌操作將0.9%生理鹽水加入被洗滌的紅細(xì)胞袋內(nèi)（1U紅細(xì)胞灌注100 mL，2U紅細(xì)胞灌注200 mL），邊灌注邊輕輕混勻。灌注完后，熱合配平。③放入賀利氏離心機(jī)，以轉(zhuǎn)速3600轉(zhuǎn)/min、溫度4℃離心8min。④在超凈臺(tái)上將上清液及白膜分入廢液袋中。⑤如此重復(fù)②～④步驟常規(guī)反復(fù)洗滌3次，最后一次分出上清液和白膜后，將0.9%氯化鈉注射液灌注其中（1U灌注 50mL，1.5U灌注75mL， 2U灌注100 mL），輕搖血袋使其混勻后，熱合并分段留樣。

2.2.4機(jī)器洗滌法 按規(guī)定的方法在洗滌儀器上安裝配套的耗材，安裝完畢后，將有效期內(nèi)檢測(cè)合格不規(guī)則抗體血液通過無菌接管機(jī)與安裝好的耗材熱封管連接，連接成功后啟動(dòng)儀器進(jìn)行自動(dòng)洗滌。機(jī)器洗滌紅細(xì)胞回收率91%，白細(xì)胞清除率99.71%，血漿蛋白清除率99.61%，洗滌效果優(yōu)于手工洗滌的紅細(xì)胞回收率81%，白細(xì)胞清除率80.85%，血漿蛋白清除率99.16%。同時(shí)也避免在洗滌過程中血液污染，保證制備過程的無菌，但成本較手工高。目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用較少[11]。

3 不規(guī)則抗體血液的應(yīng)用

建立Rh（D）不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者電子檔案，將其捐獻(xiàn)的血液制備成冰凍紅細(xì)胞保存，供交叉配血實(shí)驗(yàn)成功的相同血型患者輸注。避免血液中的不規(guī)則抗體引起病人紅細(xì)胞的破壞導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)。輸血治療的患者檢測(cè)出不規(guī)則抗體，可預(yù)先自身儲(chǔ)備血液，用于這類患者的擇期手術(shù)。根據(jù)輸血治療的患者不規(guī)則抗體篩查結(jié)果，在不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者電子檔案中選擇不含有針對(duì)某抗體響應(yīng)抗原的血源，從而防止因輸注含有某抗體相應(yīng)抗原的血液而引起的溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。

Rh（D）以外的不規(guī)則抗體血液以及缺乏同型血時(shí)，進(jìn)行不同型紅細(xì)胞相容性輸注，制備成洗滌紅細(xì)胞后供交叉配血實(shí)驗(yàn)主側(cè)相合的患者使用。將檢測(cè)合格的不規(guī)則抗體血漿送到血液制品公司。制備成抗體血清，用于稀有血型的檢測(cè)。

4 仙桃市血站2011～2013年不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者獻(xiàn)血人次統(tǒng)計(jì)

仙桃市血站2011年總計(jì)獻(xiàn)血5 464人次，其中不規(guī)則抗體獻(xiàn)血28人次，所占百分比為0.5%；2012年總計(jì)獻(xiàn)血5 036人次，其中不規(guī)則抗體獻(xiàn)血，23人次，所占百分比為0.4%；2013年總計(jì)獻(xiàn)血6 299人次，其中不規(guī)則抗體獻(xiàn)血48人次，所占百分比為0.8%。

5 討論

正常情況下，人體血液中不存在不規(guī)則抗體，但可通過輸血、母嬰血型不合的妊娠或血液制品的免疫刺激等產(chǎn)生不規(guī)則抗體。雖然不規(guī)則抗體在國(guó)內(nèi)正常人群中檢出率僅為0.3%～2%，但如果輸注不經(jīng)處理的不規(guī)則抗體血液患者就有致命的危險(xiǎn)[12-15]。其中Rh血型系統(tǒng)的不規(guī)則抗體比較常見。我國(guó)漢族人群Rh血型系統(tǒng)以D抗原陽性最為多見，這是因?yàn)榕c我國(guó)將D抗原的檢測(cè)作為血液及輸血前的常規(guī)檢查有關(guān)。將檢測(cè)出Rh（D）陰性的血液制備成冰凍紅細(xì)胞，實(shí)行有效的冷鏈儲(chǔ)存，科學(xué)管理，使得大多數(shù)Rh（D）陰性受血者可以得到同型Rh（D）陰性紅細(xì)胞的有效輸注，降低Rh（D）陰性受血者的輸血風(fēng)險(xiǎn)。如果Rh（D）陰性受血者缺乏同型血時(shí)，制備成洗滌紅細(xì)胞后可進(jìn)行不同型紅細(xì)胞相容性輸注，如AB型RhD陰性患者在缺乏同型血時(shí)，可選擇A型、B型或O型RhD陰性的洗滌紅細(xì)胞輸住，但交叉配血實(shí)驗(yàn)主側(cè)要相合。

臨床上對(duì)于抗-D以外的其他不規(guī)則抗體通常是血型鑒定和交叉配血困難時(shí)，再做進(jìn)一步不規(guī)則抗體篩查時(shí)才發(fā)現(xiàn)。紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體存在與否無規(guī)則可循，不規(guī)則抗體主要通過妊娠或輸血等途徑接觸到相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞后產(chǎn)生。根據(jù)人體免疫初級(jí)和二級(jí)應(yīng)答反應(yīng)的原理，機(jī)體第1次接觸到外來抗原后，產(chǎn)生特異性抗體并逐漸升高，2周左右達(dá)高峰維持一段時(shí)期后逐漸下降。如不再受相應(yīng)抗原刺激，以后終將檢測(cè)不出抗體。初級(jí)應(yīng)答后再接受同樣抗原刺激，常誘發(fā)二級(jí)應(yīng)答（記憶應(yīng)答），再一次刺激將加速和增強(qiáng)免疫應(yīng)答。二級(jí)應(yīng)答產(chǎn)生的抗體以IgG為主，紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體主要是IgG抗體。在我國(guó)最易產(chǎn)生血型不規(guī)則抗體的是Rh系統(tǒng)，其次是MNSs系統(tǒng)。Rh系統(tǒng)不規(guī)則抗體除抗-D外，抗-E、抗-C、抗-e、抗-c等也較為常見?，F(xiàn)在臨床上已開展了Rh（D）抗原的常規(guī)檢測(cè)，對(duì)Rh（D）陰性的受血者進(jìn)行同型輸血，但Rh（E、C、e、c）陰性患者并沒有同型輸注，因此產(chǎn)生抗-E、抗-C、抗-e、抗-c的概率較大。這些抗體進(jìn)入人體同樣引發(fā)遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)[15]。如果抗-E、抗-C、抗-e、抗-c等不規(guī)則抗體血液制備成洗滌紅細(xì)胞使其不規(guī)則抗體98%或者全部清除后進(jìn)行輸注，可避免或減輕不規(guī)則抗體引發(fā)的輸血反應(yīng)的發(fā)生[16，17]。或?qū)Υ祟愋枰斞幕颊哌M(jìn)行抗體篩查，可及早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。從而準(zhǔn)備不含有針對(duì)某抗體響應(yīng)抗原的血液輸注。也可預(yù)先自身儲(chǔ)備血液，待其需要輸血時(shí)輸注。endprint

對(duì)篩查出有自身抗體的受血者原則上能不輸血，盡量不要輸血。在緊急用血情況下，可考慮輸注相合的洗滌紅細(xì)胞。ABO血型定型系統(tǒng)中，堅(jiān)持正反定型，在正定型試劑中增加抗-A1、抗-AB及抗-H ?？?AB用來確認(rèn)弱A和弱B抗原；抗-A1用來鑒定A亞型；抗-H用來鑒定亞型及孟買型。只有正反定型結(jié)果相符才能正確判定ABO血型，以防不規(guī)則抗體漏檢，增加ABO血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體檢測(cè)率。

但是我國(guó)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》只要求輸注紅細(xì)胞需做交叉配血實(shí)驗(yàn)，而血漿和單采血小板只需同型輸注，并沒有要求輸注前需要交叉配血。不規(guī)則抗體溶解在血漿中，隨著臨床血漿用量的大幅提高和單采血小板的廣泛應(yīng)用，獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的風(fēng)險(xiǎn)越來越大。輸血前檢查是一項(xiàng)具有高度責(zé)任性和技術(shù)性的工作，實(shí)驗(yàn)者必須嚴(yán)格遵守技術(shù)操作規(guī)程，熟練和靈活應(yīng)用現(xiàn)代血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的原理和技術(shù)，對(duì)所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果給予全面、細(xì)致的觀察和分析。因?yàn)椴灰?guī)則抗體篩查可出現(xiàn)假陽性結(jié)果，應(yīng)與不規(guī)則抗體區(qū)別，以免延誤患者的輸血治療。

臨床上急性溶血反應(yīng)多由ABO血型不相容輸血引起，人為差錯(cuò)是其主要原因；遲發(fā)性溶血反應(yīng)多由ABO以外血型不相容輸血所致，輸血前檢查不規(guī)范是其主要原因。如何規(guī)范采血機(jī)構(gòu)和臨床輸血機(jī)構(gòu)對(duì)不規(guī)則抗體的檢測(cè)，對(duì)不規(guī)則抗體的獻(xiàn)血者和受血者的管理，是我們將要面臨的新問題。筆者呼吁采供血機(jī)構(gòu)、臨床輸血機(jī)構(gòu)以及社會(huì)應(yīng)共同建立多血型已知抗原的血型電子檔案庫。一則可以解決有不規(guī)則抗體患者的輸血，二則也可為稀有血型患者提供相合血源。再則也是為容易被忽略的低頻抗原的抗體和以往所產(chǎn)生的抗體已降至難以檢測(cè)出的水平的人群提供重要參考資料。除Rh（D）抗原的其他不規(guī)則抗原（E、C、e、c）及ABO 血型系統(tǒng)的A1、A2等不規(guī)則抗原也應(yīng)作為輸血前常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目之一。臨床輸血機(jī)構(gòu)應(yīng)提高不相容性的檢測(cè)率，有效避免漏檢。臨床輸血前常規(guī)檢查中進(jìn)行抗體篩查和鑒定，可縮短反復(fù)交叉配血所耗費(fèi)的時(shí)間，防止緊急用血時(shí)找不到相容的獻(xiàn)血者而延誤救治；對(duì)抗體篩查陽性并且抗體特異性確定的受血者可選用無相應(yīng)抗原的血液進(jìn)行交叉配血和輸注；紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體的篩查和鑒定對(duì)保證輸血安全特別是有輸血史或妊娠史的婦女，可有效避免溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的發(fā)生。

不規(guī)則抗體是血型免疫抗體中最主要的抗體，每輸1U血液使受血者致敏的風(fēng)險(xiǎn)為1%～1.6%，多次反復(fù)輸血產(chǎn)生同種抗體的概率為15%～20%。因此也提醒醫(yī)務(wù)工作者在給患者進(jìn)行輸血治療時(shí)權(quán)衡利弊，要科學(xué)合理地運(yùn)用血液，避免不必要輸血給受血者造成的傷害。

6結(jié)論

不規(guī)則抗體血液，大部分血站都直接采用報(bào)廢制度。這不僅僅是對(duì)血液資源的浪費(fèi)，也使少數(shù)不規(guī)則抗體受血者更加難以找到合適的血源，加重了血液供應(yīng)的緊張程度。在目前情況下，采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)該采取有效的措施提高不規(guī)則抗體的檢測(cè)率，規(guī)范對(duì)這類獻(xiàn)血者的管理。仙桃市血站2011～2013年不規(guī)則抗體獻(xiàn)血者獻(xiàn)血人次統(tǒng)計(jì)情況得出，仙桃市2011～2013年不規(guī)則抗體檢測(cè)陽性率符合我國(guó)的檢出率。對(duì)不規(guī)則抗體血液采取科學(xué)合理的處理應(yīng)用于臨床后，沒出現(xiàn)一例因不規(guī)則抗體引起的輸血反應(yīng)[18-20]。由此得出結(jié)論，雖然是少數(shù)血液含不規(guī)則抗體，但不規(guī)則抗體血液采取科學(xué)合理地處理后，應(yīng)用于臨床既解決了少數(shù)不規(guī)則抗體人群用血困難，緩解血液緊張的供需矛盾又提高了輸血的安全性，是現(xiàn)代醫(yī)療安全值得倡導(dǎo)的措施。

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（收稿日期：2014-03-07）endprint