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    新型ALG-g-Lys微膠珠的制備工藝優(yōu)化

    2014-07-05 16:05:07龍瑞敏王士斌陳宗香
    化工進(jìn)展 2014年9期
    關(guān)鍵詞:酸鹽針頭海藻

    龍瑞敏,王士斌,陳宗香

    ( 華僑大學(xué)化工學(xué)院,福建 廈門 361021)

    新型ALG-g-Lys微膠珠的制備工藝優(yōu)化

    龍瑞敏,王士斌,陳宗香

    ( 華僑大學(xué)化工學(xué)院,福建 廈門 361021)

    為了提高海藻酸鈣膠珠的穩(wěn)定性,采用海藻酸鹽的改性材料ALG-g-Lys制備微膠珠,通過單因素考察結(jié)合正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了ALG-g-Lys微膠珠的制備工藝。優(yōu)化后的制備工藝為:ALG-g-Lys 濃度為15g/L,電壓為8.0kV,推進(jìn)速度為30mm/h,針頭型號(hào)為24G,CaCl2濃度為15g/L。優(yōu)化后制得的微膠珠粒徑均勻,球形度好,拖尾率、半球率和小球率小,平均粒徑為253±40μm。該工作提供了一種新型的載體材料替代海藻酸鹽作為凝膠材料,未來(lái)可適用于醫(yī)藥、食品行業(yè)等領(lǐng)域。

    賴氨酸接枝海藻酸鹽;微膠珠;正交設(shè)計(jì);優(yōu)化

    藥物的控制釋放也稱可控給藥體系,由于其對(duì)包埋的藥物或活性物質(zhì)具有保護(hù)和控制釋放速率功能,近十多年來(lái)獲得了廣泛的研究與發(fā)展。載體材料的選擇是其中研究的一個(gè)熱點(diǎn),當(dāng)前使用的載體材料主要包括天然、半合成和合成高分子三大類,其中海藻酸鹽是一種天然的水凝膠高分子材料,由于其遇Ca2+、Ba2+等二價(jià)陽(yáng)離子具有瞬時(shí)凝膠化的特點(diǎn),一直受到研究者的親睞[1-3]。

    然而海藻酸鈣水凝膠遇到螯合化合物(磷酸鹽、檸檬酸鹽)、非凝膠化離子(鈉離子、鎂離子)或溶液pH值變化時(shí),海藻酸鈣凝膠中的鈣離子易被置換或發(fā)生溶脹,從而使凝膠逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w而產(chǎn)生膨脹破裂的趨勢(shì)[4-5]。因此,為了提高海藻酸鈣膠珠的穩(wěn)定性,改善藥物控制釋放的效果,目前研究者主要采取以下兩種解決思路。

    一是利用其陰離子特性,在膠珠外層裹上一層陽(yáng)離子聚合物薄膜或?qū)訉幼越M裝形成多層薄膜,該聚合物膜具有穩(wěn)定海藻酸鈣膠珠及調(diào)節(jié)藥物控制釋放的功能。當(dāng)前采用的成膜材料很多,包括聚氨基酸材料[6-8]、殼聚糖[9-10]、聚亞基二胍氯化氫[11]等。

    另一個(gè)思路則是直接改造基體,將海藻酸鈉進(jìn)行改性,引入新的功能基團(tuán),利用海藻酸高分子鏈間纏結(jié)和交聯(lián)劑與新官能團(tuán)的相互作用來(lái)穩(wěn)定水凝膠體系,如海藻酸鈉的雙丙酮丙烯酰胺[12]等。

    本工作則采用基體改造思路,利用新的合成材料——賴氨酸接枝海藻酸鹽(ALG-g-Lys)材料替代海藻酸鹽。ALG-g-Lys分子鏈上剩余有較多的自由羧基,可以與Ca2+快速形成“蛋格”結(jié)構(gòu)而凝膠化。利用該特性可將ALG-g-Lys溶液經(jīng)注射泵推進(jìn),在高壓電場(chǎng)中噴射入CaCl2溶液中,快速形成微米級(jí)的膠珠??疾炝酥苽錀l件(ALG-g-Lys濃度、電壓、針頭內(nèi)徑、注射泵推進(jìn)速度、不同溶劑、CaCl2濃度)對(duì)微膠珠形成的影響,以期提供一種新的載體形式。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試劑與儀器

    賴氨酸接枝海藻酸鹽(ALG-g-Lys,Mw660000,實(shí)驗(yàn)室合成);無(wú)水氯化鈣、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀,均為分析純,購(gòu)自汕頭市西隴化工廠有限公司。

    BS210S電子分析天平(德國(guó)Sartorius);TG2671CS高壓靜電裝置(廈門賽賢電子科技公司);HI8424C pH計(jì)(北京哈納科儀科技公司);XSP-3C生物顯微鏡(上海尚光顯微鏡有限公司)。

    1.2 單因素考察微膠珠制備工藝

    采用高壓靜電裝置制備Ca2+凝膠化的ALG-g-Lys膠珠,并用單因素法考察膠珠制備的影響因素,分別從ALG-g-Lys濃度、電壓、針頭內(nèi)徑、注射泵推進(jìn)速度、不同溶劑的不同水平來(lái)考察,以膠珠的球形度和平均粒徑為主要的考察指標(biāo)。從單因素結(jié)果選定對(duì)高壓靜電法制備的膠珠有影響的因素及相應(yīng)的水平,利用正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,得到制備膠珠的最佳參數(shù)。

    高壓靜電制備膠珠的過程可參考文獻(xiàn)[13-15],基本條件:電壓9kV,推進(jìn)速度30mm/h,針頭與液面距20mm,針頭型號(hào)為23G針頭(對(duì)應(yīng)針頭內(nèi)徑0.39mm),ALG-g-Lys濃度15g/L,CaCl2濃度20g/L。

    1.3 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化微膠珠制備工藝

    正交實(shí)驗(yàn)中固定溶解ALG-g-Lys的溶劑為pH 值7.4的PBS緩沖液,針頭距液面的距離為20mm,正交實(shí)驗(yàn)以ALG-g-Lys濃度、電壓、推進(jìn)速度、針頭型號(hào)和CaCl2濃度作為因素設(shè)計(jì)L16(45)的正交實(shí)驗(yàn)。

    優(yōu)化考察指標(biāo)為平均粒徑、拖尾率、半球率和小球率。

    1.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果選取最優(yōu)實(shí)驗(yàn)參數(shù)實(shí)驗(yàn)并分析。測(cè)定不少于500個(gè)的粒徑,計(jì)算算數(shù)平均粒徑d。

    其中,n1、n2、···、nn為式中為具有粒徑d1、d2、···、dn的粒子數(shù)。

    將所測(cè)得的粒徑分布數(shù)據(jù),以粒徑為橫坐標(biāo),以頻率(每一粒徑范圍的粒子個(gè)數(shù)除以粒子總數(shù)所得的百分率)為縱坐標(biāo)作圖可得粒徑分布直方圖;以各粒徑范圍的頻率對(duì)各粒徑范圍的平均值作圖可得粒徑分布曲線。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 單因素結(jié)果分析

    2.1.1 ALG-g-Lys濃度的影響

    當(dāng)ALG-g-Lys濃度小于16g/L時(shí)(包括16g/L),膠珠表面均較光滑;當(dāng)ALG-g-Lys濃度大于16g/L時(shí),膠珠表面較為粗糙。因溶解ALG-g-Lys的溶劑是磷酸鹽緩沖液,而Ca2+會(huì)與一定濃度的磷酸根離子形成水不溶的物資,隨著ALG-g-Lys濃度的增大,凝膠的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)變致密,致使所形成的沉淀包于膠珠內(nèi)部或附于膠珠表面,因而膠珠表面粗糙。當(dāng)ALG-g-Lys濃度為14g/L時(shí),膠珠大小較為均勻,且球形度較好,幾乎沒有拖尾變形。

    由圖1可見,不同ALG-g-Lys濃度制出的膠珠粒徑各不相同;當(dāng)ALG-g-Lys濃度為14g/L時(shí)膠珠粒徑最??;當(dāng)ALG-g-Lys濃度小于14g/L時(shí),膠珠粒徑隨濃度的增大而減??;當(dāng)ALG-g-Lys濃度大于14g/L時(shí),膠珠粒徑隨濃度的增大而增大??赡苁且?yàn)锳LG-g-Lys濃度增大,導(dǎo)致溶液的密度增大,在電場(chǎng)作用下,被拉扯出來(lái)形成膠珠的量增多,致使膠珠的粒徑增大。綜上,當(dāng)ALG-g-Lys濃度為14g/L時(shí),制出的膠珠粒徑較小且球形度較好,表面光滑。

    2.1.2 電壓的影響

    由圖2可以看出,在電壓為8.0kV的條件下,膠珠粒徑最小。當(dāng)電壓小于8.0kV時(shí),膠珠粒徑隨著電壓的增大而減小;當(dāng)電壓大于8.0kV時(shí),膠珠粒徑變化不大。分析認(rèn)為,當(dāng)電壓較低時(shí),其產(chǎn)生的電場(chǎng)作用力還不足以完全克服溶液的黏滯力和表面張力,所以形成的膠珠的直徑較大;隨著電壓的升高,電場(chǎng)作用力增大,制得的膠珠直徑就相應(yīng)減?。欢?dāng)電壓大到某一個(gè)值后(8.0kV),膠珠粒徑趨于平穩(wěn),此時(shí)電場(chǎng)力已經(jīng)難以克服更大的表面張力制備更小粒徑膠珠,因而電場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)的增大對(duì)膠珠的平均粒徑?jīng)]有顯著的影響。

    圖1 不同ALG-g-Lys濃度微膠珠粒徑折線圖

    圖2 不同電壓條件下微膠珠粒徑折線圖

    2.1.3 針頭型號(hào)的影響

    針頭型號(hào)為23G時(shí),膠珠大小不一,有拖尾現(xiàn)象;針頭型號(hào)為24G時(shí),大膠珠較均勻,小微粒較少,拖尾也較少;針頭型號(hào)為25G時(shí),膠珠拖尾較多,且形狀不規(guī)則的較多;針頭型號(hào)為26G時(shí),膠珠形狀不規(guī)則的較多,且小微粒的數(shù)目較多。

    由圖3可以看出,針頭型號(hào)為23G的膠珠粒徑最大,26G的膠珠粒徑最小,總體趨勢(shì)隨著針頭內(nèi)徑的減小,膠珠粒徑也減小。綜合膠珠形貌與粒徑結(jié)果分析,針頭型號(hào)為24G時(shí),滴制出的微球較理想。

    2.1.4 推進(jìn)速度的影響

    注射泵推進(jìn)速度為10mm/h的膠珠形狀非常不規(guī)則且大小非常不均一;注射泵推進(jìn)速度為20mm/h的膠珠大小不均勻且有部分拖尾變形;注射泵推進(jìn)速度為30mm/h的膠珠大球較均勻,小球較少,拖尾也較少;注射泵推進(jìn)速度為40mm/h的膠珠形狀不規(guī)則,但小球較少;注射泵推進(jìn)速度為50mm/h的膠珠形狀不規(guī)則,大小不均一;注射泵推進(jìn)速度為60mm/h的膠珠拖尾較多,但小球較少。由圖4可以看出,注射泵推進(jìn)速度小于30mm/h時(shí)(包括30mm/h),膠珠粒徑幾乎沒有變化;當(dāng)注射泵推進(jìn)速度大于30mm/h時(shí),膠珠粒徑相差較大。這是因?yàn)橥七M(jìn)速度提高,溶液向針尖的流速增大,形成膠珠的速度增加,能夠形成較大的膠珠,而且,在溶液壓力和電場(chǎng)力的作用下膠珠容易脫落,因而制成的膠珠均勻性好,提高推進(jìn)速度,有利于提高生產(chǎn)效率和膠珠的均勻性,但這也會(huì)使膠珠直徑增大。綜上可以得出,當(dāng)注射泵推進(jìn)速度為30mm/h時(shí),滴制出來(lái)的膠珠較理想。

    圖3 不同針頭內(nèi)徑微膠珠粒徑折線圖

    圖4 不同注射泵推進(jìn)速度的微膠珠粒徑折線圖

    2.1.5 溶劑的影響

    溶劑為溶解ALG-g-Lys的磷酸鹽緩沖液。pH值為5.0時(shí),膠珠大小不均,有極少部分變形;pH值為5.6時(shí),膠珠大小不均,有多數(shù)拖尾;pH值為6.8時(shí),膠珠大小相對(duì)較均勻,但是存在許多粒徑極小的膠珠;pH值為7.4時(shí),膠珠大小均勻,球形度好。

    圖5 不同溶劑條件下微球粒徑折線圖

    由圖5可以看出,當(dāng)溶劑為pH 值7.4的磷酸鹽緩沖液時(shí),膠珠粒徑最小;當(dāng)溶劑為pH 值6.8的磷酸鹽緩沖液時(shí),膠珠粒徑最大;當(dāng)溶劑pH值在5.0~5.6時(shí),膠珠粒徑變化不大;當(dāng)6.87.4時(shí),膠珠粒徑隨pH值的增大而增大。綜上可以看出,溶劑pH值 7.4的磷酸鹽緩沖液時(shí),滴制出的膠珠較理想。

    2.2 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化結(jié)果分析及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    正交設(shè)計(jì)優(yōu)化結(jié)果分析如表1所示。按照所得粒徑的平均值為考察指標(biāo),如果希望獲得粒徑小的微膠珠,所得最優(yōu)組合為:a1b2c2d3e1。根據(jù)極差來(lái)判斷,各因素的影響效果為:c>a>d>b>e;按照拖尾率的平均值為考察指標(biāo),拖尾率越小越好,所得最優(yōu)組合為:a1b2c3d2e4,根據(jù)極差來(lái)判斷,各因素的影響效果為:c>d>a>b>e;按照半球率的平均值為考察指標(biāo),半球率越小越好,所得最優(yōu)組合為:a4b3c4d4e3,根據(jù)極差來(lái)判斷,各因素的影響效果為:d>a>c>e>b;按照小球率的平均值為考察指標(biāo),小球率越小膠珠越均勻,所得最優(yōu)組合為:a2b1c3d2e3,根據(jù)極差來(lái)判斷,各因素的影響效果為:a>d>b>c>e。

    綜合分析得出最優(yōu)組合:a2b1c3d2e3或a2b2c3d2e3;依次進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

    (1)a2b1c3d2e3組合,即為ALG-g-Lys 濃度為15g/L,電壓為7.5kV,推進(jìn)速度為30mm/h,針頭型號(hào)為24G,CaCl2濃度為15g/L,所得膠珠半球很多。

    (2)a2b2c3d2e3組合,即為ALG-g-Lys 濃度為15g/L,電壓為8.0kV,推進(jìn)速度為30mm/h,針頭型號(hào)為24G,CaCl2濃度為15g/L。所得膠珠形貌由圖6可以看出,膠珠大小均勻,結(jié)構(gòu)圓整,極少數(shù)拖尾變形。平均粒徑為253±40μm(圖7),其中在320~340μm的膠珠數(shù)較多,導(dǎo)致粒徑分布曲線較不對(duì)稱。擬合方程為:Y=0.02116+0.2617exp[-0.5× (X-245.96225)/21.45503]2,R2=0.85505。可能是因?yàn)樽⑸浔檬情g歇性工作的,導(dǎo)致推進(jìn)壓力不均勻,通過針頭的溶液不均勻,使膠珠的粒徑在320~340μm有一定數(shù)目的膠珠,這部分膠珠可能為間歇過程中滴出的,因?yàn)樽⑸浔瞄g歇時(shí),溶液所受的壓力減小,克服黏滯阻力的合力減小,因而膠珠粒徑增大。

    圖6 優(yōu)化后微膠珠光鏡照片

    圖7 粒徑分布直方圖和正態(tài)擬合曲線

    3 結(jié) 論

    采用海藻酸鹽的改性材料ALG-g-Lys制備微膠珠,通過單因素考察結(jié)合正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了ALG-g-Lys微膠珠的制備工藝,所制得的微膠珠粒徑均勻,結(jié)構(gòu)圓整,拖尾率、半球率和小球率小,平均粒徑為253±40μm。該載體材料可生物降解,其中海藻酸鹽為多糖,降解產(chǎn)物可參與人體自身循環(huán);賴氨酸為人體必需氨基酸,兼具營(yíng)養(yǎng)作用與藥理功效。該工作提供了一種新型的載體材料替代海藻酸鹽作為凝膠材料,未來(lái)可適用于醫(yī)藥、食品行業(yè)等領(lǐng)域。

    表1 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表

    [1] Jiang H,Zhang M,McKnight S,et al. Microencapsulation of alpha-amylase by carrying out complex coacervation and drying in a single step using a novel three-fluid nozzle spray drying[J].Drying Technology,2013,31:1901-1910.

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    Preparation optimization of novel ALG-g-Lys micro-beads

    LONG Ruimin,WANG Shibin,CHEN Zongxiang
    (School of Chemical Engineering,Huaqiao University,Xiamen 361021,F(xiàn)ujian,China)

    A new material,ALG-g-Lys,was used to prepare micro-beads instead of alginate to improve the stability of alginate micro-beads. The preparation process was optimized using the single factor method combined with orthogonal design. The optimized parameters were:ALG-g-Lys concentration 1.5g/L,voltage 8.0kV,advance speed 30mm/h,needle 24G,and CaCl2concentration 15g/L. The prepared micro-beads showed even distribution and good sphericity with low trailing ratio,half sphere ratio and globule ratio. The mean particle size was 253±40μm. This work supplies a novel carrier material instead of alginate to prepare gel,showing bright future in medicine and food industries.

    lysine grafted alginate;micro-bead;orthogonal design;optimization

    R 318

    A

    1000-6613(2014)09-2403-06

    10.3969/j.issn.1000-6613.2014.09.028

    2014-01-03;修改稿日期:2014-01-17。

    國(guó)家自然科學(xué)基金(31000441、31170939)、福建省自然科學(xué)基金(2013J01189)及華僑大學(xué)校級(jí)科研基金(10HZR10)項(xiàng)目。

    及聯(lián)系人:龍瑞敏(1979—),女,實(shí)驗(yàn)師,主要從事生物化工相關(guān)研究。E-mail simplever@126.com。

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