MMPs與口腔鱗癌關(guān)系的研究進(jìn)展

董大海

摘要：

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一組調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的鋅離子依賴的內(nèi)肽酶，是影響腫瘤侵襲性的關(guān)鍵酶。研究表明： MMPs在腫瘤細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)、遷移及腫瘤血管形成中發(fā)揮重要作用。本文從MMPs的結(jié)構(gòu)功能以及與口腔鱗癌的關(guān)系加以綜述。

關(guān)鍵詞：酪氨酸激酶受體A2；基質(zhì)金屬蛋白酶；口腔鱗癌

【中圖分類號(hào)】

R322.4+1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）05-0028-02

口腔鱗狀細(xì)胞癌簡(jiǎn)稱鱗癌，是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，占全身惡性腫瘤發(fā)病率的3%。盡管在過(guò)去的20年中包括手術(shù)、放療、化療及生物治療在內(nèi)的各種治療手段在不斷改進(jìn)，其總體死亡率有所降低，但進(jìn)展期患者5年生存率僅為50%- 60%^[1-2]。

研究發(fā)現(xiàn)： MMPs在多種腫瘤中均呈高表達(dá)，與腫瘤的浸潤(rùn)有關(guān)。本文就MMPs的結(jié)構(gòu)和功能、在口腔鱗癌中的表達(dá)展開(kāi)綜述

1 MMP的結(jié)構(gòu)和功能及其與腫瘤的關(guān)系

1.1 MMPs的生物學(xué)特征：

基質(zhì)金屬蛋白酶是鋅離子依賴的內(nèi)肽酶。到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了28種，動(dòng)物發(fā)現(xiàn)了25種，人類發(fā)現(xiàn)了24種。有幾個(gè)MMPs 的基因位于同一染色體位點(diǎn)11q23， 在幾種實(shí)體瘤中，此區(qū)域有基因擴(kuò)增。MMPs的所有成員有一些共同的結(jié)構(gòu)：信號(hào)肽、前肽、催化區(qū)、鉸鏈區(qū)和類血紅蛋白結(jié)合區(qū)域。信號(hào)肽結(jié)構(gòu)區(qū)域由17～29個(gè)氨基酸組成，前肽區(qū)由約80個(gè)氨基酸組成，具有高度保守的氨基酸序列。而所有MMPs催化區(qū)域高度保守結(jié)合有鋅原子，Zn2+被認(rèn)為是酶的活性中心部位，多數(shù)MMPs以水溶性酶原的形式分泌到胞外，在中性pH值及Ca2+和其激動(dòng)劑的參與下脫去前肽而發(fā)揮酶活性作用，降解細(xì)胞外基質(zhì)，而膜型基質(zhì)金屬蛋白酶的羧基端存在著一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，又可將MT-MMP結(jié)合于細(xì)胞膜上。根據(jù)其底物不同，可將MMPs分為五類，分別是1、膠原酶，主要水解底物為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型纖維膠原；2、明膠酶，主要水解底物為明膠及Ⅳ、Ⅴ型膠原和層粘蛋白；3、間質(zhì)溶解素，主要水解底物為Ⅲ、Ⅳ型膠原及蛋白聚糖、明膠及糖蛋白；4、膜型金屬蛋白酶，Membrance type metalloproteinases，MT-MMP，主要水解底物為MMP-2前體、膠原和明膠；5、其他，如MMP-12、19、20、22、23等。MMPs被確定存在下列性質(zhì)：1、它們至少降解細(xì)胞外基質(zhì)的一種成分；2、它們包含了一個(gè)鋅離子，且被絡(luò)合劑抑制；3、以酶原形式分泌；4、能被其天然抑制劑基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑抑制；5、它們共氨基酸序列。MMPs的主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)成分。諸多MMP成員中，MMP2和MMP9與腫瘤的侵襲性更為相關(guān)。MMP-2基因位于人類染色體16q21 ，由 13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成， 結(jié)構(gòu)基因總長(zhǎng)度為27kb。MMP- 2是一種非糖化的明膠酶， 分子量為 72KD。MMP- 9基因位于染色體的 20q11.2- 13.1，長(zhǎng)7.7 kb，含 13個(gè)外顯子，其長(zhǎng)度不一。MMP- 9的分子量為M r 92103，其結(jié)構(gòu)包括：信號(hào)肽區(qū)、N -末端前肽區(qū)、催化基團(tuán)區(qū)、鉸鏈區(qū)和C-末端血紅素結(jié)合蛋白樣區(qū)

1.2 MMPs的合成與活性的調(diào)節(jié)：MMPs的表達(dá)活性受轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、酶原激活、基因水平和抑制幾個(gè)水平的調(diào)控

1.2.1 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)： MMPs的生物合成由其基因轉(zhuǎn)錄率所決定，許多因素能夠改變MMPs的基因轉(zhuǎn)錄，而且受到激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、ECM成分和細(xì)胞黏附分子的調(diào)控。如MMP-9轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)可受12-otetrade-canoyl_phorbol一13acetate，細(xì)胞因子，癌基因，TNF-α，Z蛋白和細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子等的影響。IL-1、TNF-α、TGF-α等可誘導(dǎo)MMPs合成增加，而TGF-β、肝素、可的松等則可抑制MMP基因的表達(dá)。MMPs自身的某些成分亦可調(diào)節(jié)MMPs的合成。此外，Pro-MMP還受基質(zhì)微環(huán)境的調(diào)節(jié)。目前認(rèn)為，MMPs的轉(zhuǎn)錄激活機(jī)理中AP-1結(jié)合位點(diǎn)是研究的熱點(diǎn)。

1.2.2 轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)： 研究發(fā)現(xiàn)，某些介質(zhì)可以改變MMPmRNA的穩(wěn)定性。如TGF-β可以延長(zhǎng)明膠酶A的mRNA的半衰期；EGF則可增加間質(zhì)性膠原酶和間質(zhì)溶素1的mRNA穩(wěn)定性。地塞米松降低二者的穩(wěn)定性。

1.2.3 酶原的活化： 除了膜型MMPs和MMP-11外，所有MMPS的分泌均以無(wú)活性的前體形式，只有在活化后才能進(jìn)行基質(zhì)的降解。MMPs的活化，在細(xì)胞問(wèn)質(zhì)內(nèi)經(jīng)過(guò)外原酶的作用下，切斷活性前區(qū)片段，使半胱氨酸與鋅離子分離，暴露活化中心。常見(jiàn)的外源酶有纖溶酶、激肽釋放酶、組蛋白酶及中性彈力酶等。MMPs可相互作用，引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)。如纖溶酶活化MMP3，后者再活化MMP-9，MMP-3亦可活化MMP一9。此過(guò)程必須MMP-3與纖維蛋白溶酶同時(shí)存在。膜型MMPs在分泌過(guò)程中逐步活化，到達(dá)基質(zhì)時(shí)已呈活化形式。MTI-MMP和MMP-2協(xié)同存在于腫瘤細(xì)胞質(zhì)膜。MTI-MMP是MMP-2的細(xì)胞表面受體。二者結(jié)合成受體復(fù)合物，調(diào)節(jié)MMP-2的激活，通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-2和MTl-MMP表達(dá)促進(jìn)腫瘤的侵襲。

1.2.4 基因水平的調(diào)控： MMPs基因定位于人1 1、14、16、20、22號(hào)染色體，它們的基因組由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子組成。MMP-9基因的啟動(dòng)子包含一個(gè)與轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)相鄰近的TPA反應(yīng)元件（TRE），它是受到TNF一α或TPA刺激后基因轉(zhuǎn)錄的必需元件。在MMP-9基因上游調(diào)節(jié)元中，尚含有NF-kβ和SP-1蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，兩者與TRE協(xié)I司作用，從而啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄：MMP-2基因的非翻譯區(qū)不僅與MMP.9基因啟動(dòng)子顯著不同，而且與迄今為止所確定的其它MMPs基因啟動(dòng)子存在顯著差異，這主要表現(xiàn)在MMP一2基因啟動(dòng)子缺乏對(duì)TPA的反應(yīng)

1.2.5 金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）： 金屬蛋白酶組織抑制劑是金屬蛋白酶的特異性抑制劑，在調(diào)控MMP 的活性方面起著重要作用。TIMP在體內(nèi)分布廣泛，目前報(bào)道的共有4 種： TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4，有關(guān)TIMP-1和TIMP-2的研究較多，而TIMP-3 和TIMP-4研究略少，TIMP-1是分子質(zhì)量為28.5 kDa的糖蛋白，可與活化的間質(zhì)膠原酶、活化的間質(zhì)溶解素和MMP-9形成復(fù)合物， TIMP-2是分子質(zhì)量為 21kDa 的非糖基化蛋白， 選擇性地與 MMP-2形成復(fù)合物， TIMP-2既可以與活化的MMP-2也可以與非活化的MMP-2以非共價(jià)鍵結(jié)合，還可以抑制MMP 家族所有成員的水解活性，達(dá)到抑制瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的目的。與其他MMP不同， TIMP-3是細(xì)胞外基質(zhì)的一種組成部分，以不可溶解的形式存在。TIMP-4是一種新發(fā)現(xiàn)的MMP組織抑制劑，它不但抑制活性強(qiáng)，而且能對(duì)多種MMP起作用。除調(diào)節(jié)MMP 的活性外， TIMP 還至少具有兩個(gè)獨(dú)立作用： 抑制腫瘤血管生成和促進(jìn)紅細(xì)胞以及纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)。

1.3 與腫瘤的關(guān)系

1.3.1 MMPs與腫瘤演進(jìn)：

腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程，可被稱為多階梯瀑布過(guò)程：早期原發(fā)癌生長(zhǎng)；微血管化；細(xì)胞從原發(fā)灶脫落、黏附并穿過(guò)不完整的基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，侵入循環(huán)管道并再次穿出血管，到達(dá)其他部位臟器形成轉(zhuǎn)移灶。

1.3.2 MMPs促進(jìn)生長(zhǎng)因子分泌， 加速腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移：

腫瘤及其微環(huán)境形成過(guò)程中，基質(zhì)細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞都能分泌MMPs，MMP又能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌各類生長(zhǎng)因子：表皮生長(zhǎng)因子（EGF），成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）， 胰島素樣生長(zhǎng)因子（IG-Fs），這些因子都具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞有絲分裂的能力，生長(zhǎng)因子的增加大大加快的腫瘤細(xì)胞的增殖。YU，stamenkovic等還報(bào)道 MMP- 9能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌具有上調(diào)腫瘤細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 B（TGF- B）。

1.3.3 MMPs誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡耐受：

腫瘤細(xì)胞能逃避凋亡是腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。MMPs能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡耐受而長(zhǎng)期存活致腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn) MMP- 2能裂解組織衍生的單核細(xì)胞趨化因子 3（MCP- 3）， MCP- 3能與許多免疫細(xì)胞表面受體結(jié)合，促進(jìn)免疫細(xì)胞鈣離子內(nèi)流及向病灶游走，當(dāng) MCP- 3被MM P- 2裂解后，免疫細(xì)胞即喪失了趨化功能， 從而阻止免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除。

1.3.4 MMPs降解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移：

腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，其中細(xì)胞外基質(zhì)的降解起著重要的作用， 細(xì)胞外基質(zhì)是阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的第一道屏障，它主要由膠原， 糖蛋白，蛋白多糖和蛋白聚糖等組成。目前發(fā)現(xiàn) MMPs能降解幾乎所有的 ECM成份。如 MMP- 1能降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ、Ⅺ型膠原，明膠， 蛋白聚糖，纖維蛋白，層黏連蛋白， 等； MMP-2能降解Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原及蛋白聚糖，纖維蛋白， 層黏連蛋白，等； MM P-9能降解 Ⅳ、Ⅺ、Ⅴ型膠原， 蛋白多糖， 明膠， 彈力蛋白， 層黏連蛋白，蛋白聚糖等。

1.4 與腫瘤血管形成的關(guān)系：

新生血管的形成包括毛細(xì)血管內(nèi)皮層下基底膜降解、內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖、新生血管形成和新的基底膜形成等一系列過(guò)程。體外實(shí)驗(yàn)表明，在血管形成與腫瘤轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞均能分泌基質(zhì)金屬蛋白酶降解ECM，在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用，如Ⅳ型膠原酶（MMP-2、MMP-9）參與基底膜降解的過(guò)程； 移行過(guò)程中間質(zhì)膠原酶（MMP-1）、多形核膠原酶（ MMP- 8）能降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原； MTI- MMP 在內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)則促使局部膠原和層粘連蛋白降解，腫瘤新生血管形成過(guò)程中，許多細(xì)胞因子以自分泌或旁分泌的形式相互作用， 參與毛細(xì)血管的形成過(guò)程，其中包括VEGF、bFGF、TGF、HGF等， 這些細(xì)胞因子能上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞uPA的表達(dá)，而uPA能激活纖溶酶， 并進(jìn)而激活MMP，同時(shí)這些細(xì)胞因子也能直接誘導(dǎo)細(xì)胞MMP基因的轉(zhuǎn)錄，TIMP作為MMP的天然抑制物在多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮抑制新生血管形成的作用， 如阻礙MMP介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng)、抑制基質(zhì)中促血管生成因子的釋放、防止ECM 降解等，體外測(cè)定中發(fā)現(xiàn)加入過(guò)量的TIMP-1或TIMP-2均可阻礙內(nèi)皮細(xì)胞管的形成，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn) TIMP抑制新生血管形成的作用與其抑制金屬蛋白酶的活性無(wú)關(guān)， TIMP-2能抑制bFGF 刺激人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HME）生長(zhǎng)的作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)人工合成的金屬蛋白酶抑制劑（BB94）和MMP- 2 抗體都不能抑制HME細(xì)胞的增殖效應(yīng)。66kD的TIMP-1聚合物能抑制猴主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形成內(nèi)皮細(xì)胞管的能力，但不抑制膠原酶活性近來(lái)， TIMP-1和TIMP-2能抑制血管生成素誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞出芽，然而TIMP與MMP在腫瘤新生血管形成中的作用可能涉及更為復(fù)雜的機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的MMP- 12 能分解人纖溶酶原， 產(chǎn)生類血管抑素片段， 后者是有力的血管形成抑制物?；|(zhì)溶素（MMP-7）、Ⅳ型膠原酶產(chǎn)生血管抑素碎片1由此可見(jiàn)TIMP與MMP 在腫瘤新生血管形成中起著重要的作用， 但其確切機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

2.1 與OSCC的關(guān)系：

口腔鱗癌是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，占口腔癌的首位，惡性程度高、侵襲能力強(qiáng)、轉(zhuǎn)移快，而且近年來(lái)有發(fā)病率增高，發(fā)病年齡下降的趨勢(shì)。因此研究口腔鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移，提高患者的治愈率和生存率是目前研究的焦點(diǎn)課題。研究發(fā)現(xiàn)有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC 比無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者有較高水平的MMP-2、9表達(dá) 。對(duì) 96例OSCC 組織進(jìn)行免疫組化研究發(fā)現(xiàn) ，MMP-2、9 表達(dá)增強(qiáng)的病例中ECM的染色減弱；在有侵襲和轉(zhuǎn)移的病例中，MMP-2、9 表達(dá)增強(qiáng)。對(duì)106例頭頸鱗癌手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，均有 MMP-2、9 的過(guò)度表達(dá)，而且進(jìn)一步證實(shí)，有 MMP-2 表達(dá)的患者預(yù)后較差，

即使是區(qū)域淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移的患者，也可能較早出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)。大多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果認(rèn)為 MMP-2 表達(dá)升高和活性增加與OSCC頸淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但與其病理分級(jí)和臨床分期無(wú)關(guān)。從目前研究的現(xiàn)狀看，學(xué)者們一致公認(rèn)的是MMPs不僅可作為OSCC 的標(biāo)志物，而且還可作為評(píng)價(jià)OSCC侵襲、轉(zhuǎn)移、判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

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