Htr A1、Survivin在早發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中的表達(dá)及意義

李春芳，茍文麗，宗 璐，李 揚(yáng)

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西西安 710061)

Htr A1、Survivin在早發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中的表達(dá)及意義

李春芳，茍文麗，宗 璐，李 揚(yáng)

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西西安 710061)

目的探討Htr Al(high temperature requirement A1，Htr Al)及Survivin在早發(fā)型重度子癇前期(early-onset severe preeclampsia，ES-PE)胎盤組織中的表達(dá)及其意義。方法采用SABC法測定早發(fā)型(30例)與晚發(fā)型(35例)重度子癇前期患者胎盤組織中Htr A1及Survivin的表達(dá)。結(jié)果Htr Al在早發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中的表達(dá)明顯高于晚發(fā)型，平均灰度值分別為142.63±3.48和158.72±4.26(平均灰度值與表達(dá)強(qiáng)度成負(fù)相關(guān))，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；Survivin在早發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中的表達(dá)明顯低于晚發(fā)型，平均灰度值分別為138.32± 3.26和126.47±2.85，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；Htr A1和Survivin在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r= -0.67，P＜0.05)。結(jié)論Htr A1、Survivin與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生密切相關(guān)，提示早發(fā)型重度子癇前期與晚發(fā)型發(fā)病機(jī)制可能不同。

Htr Al；Survivin；早發(fā)型重度子癇前期；胎盤

子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有疾病，易伴發(fā)嚴(yán)重母嬰并發(fā)癥，尤其是早發(fā)型重度子癇前期，發(fā)病早、病情重、母嬰預(yù)后差，是導(dǎo)致母嬰死亡的重要原因。起病于34周前的重度子癇前期稱為早發(fā)型(early-onset severe preeclampsia，ES-PE)，在此后發(fā)病者稱為晚發(fā)型重度子癇前期。Htr A1(high temperature requirement A1)是一種具有熱休克蛋白性質(zhì)的膜絲氨酸蛋白酶。既往研究發(fā)現(xiàn)［1］，Htr A1參與早期妊娠胎盤發(fā)育，可能與滋養(yǎng)細(xì)胞增殖分化及凋亡有關(guān)；Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)凋亡抑制因子，與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)［2］。目前，認(rèn)為早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期可能存在不同的病因和發(fā)病機(jī)制［3-4］，早發(fā)型重度子癇前期更傾向于一種胎盤性疾病。因此，推測Htr A1及Survivin與早發(fā)型重度子癇前期發(fā)生有關(guān)。本研究通過測定早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織Htr A1及Survivin的表達(dá)，初步闡明早發(fā)型與晚發(fā)型可能存在不同的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2013年1月至2014年1月在西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院行剖宮產(chǎn)的65例子癇前期患者及60例正常妊娠患者作為研究對象。其中早發(fā)型重度子癇前期30例，非妊高病早產(chǎn)組30例作為對照，兩組平均年齡(28.4±2.3)歲，平均孕期(31.4±2.2)周，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；晚發(fā)型重度子癇前期35例，正常足月組30例作為對照，兩組平均年齡(28.8±1.8)歲，平均孕期(36.4± 2.7)周，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組患者平均年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.26，P＞0.05)。所有孕婦均無煙酒等嗜好；既往均無糖尿病、心臟病及肝腎疾病史，無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥；均已簽署知情同意書。重度子癇前期診斷及分類嚴(yán)格按照人民衛(wèi)生出版社出版的《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版之分類標(biāo)準(zhǔn)。妊娠34周之前發(fā)病者為早發(fā)型重度子癇前期。重度子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)：BP≥160/110 mm Hg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或隨機(jī)尿蛋白≥(?)或有其他臟器損害的指標(biāo)異常。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本收集及處理 剖宮產(chǎn)胎盤娩出后即時自胎盤母體面中央取絨毛組織約1 cm×1 cm×1 cm，充分漂洗后置40 g/L多聚甲醛溶液中固定24 h以上，常規(guī)石蠟包埋，制成蠟塊，-20℃干燥保存，待切片、染色。

1.2.2 試劑及方法 Htr A1抗體(美國Abcam)，兔抗人Survivin多克隆抗體(北京中杉)。采用SABC法測定胎盤組織中Htr A1及Survivin的表達(dá)。實驗步驟按試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 采用德國LEICA公司生產(chǎn)的生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Q550CW)進(jìn)行灰度定量分析。由顯微攝像機(jī)將切片圖像輸入計算機(jī)，每張切片隨機(jī)選取5個不重疊的40倍視野，分別計算每視野的Htr A1、Survivin平均灰度值，進(jìn)而求出每例胎盤標(biāo)本的平均灰度值。用平均灰度值代表Htr A1、Survivin在胎盤的表達(dá)水平。陽性區(qū)表達(dá)的強(qiáng)弱和灰度值呈負(fù)相關(guān)，灰度值越大則陽性表達(dá)越弱。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件處理，結(jié)果用表示。組間比較采用t檢驗，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Htr A1及Survivin在胎盤組織的定位表達(dá)兩組孕婦胎盤組織中均可檢測到Htr A1及Survivin表達(dá)。Htr A1主要表達(dá)于胎盤絨毛小葉的合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞，胎盤絨毛和蛻膜的間質(zhì)中也有表達(dá)，定位于細(xì)胞漿，隨孕周增加，Htr A1表達(dá)逐漸增強(qiáng)；早發(fā)型重度子癇前期胎盤染色較晚發(fā)型重度子癇前期深，并且分布較集中。Survivin主要表達(dá)于胎盤絨毛小葉的合體滋養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿中，隨孕周增加，Survivin表達(dá)逐漸降低；早發(fā)型重度子癇前期胎盤染色較晚發(fā)型重度子癇前期淺(圖1、圖2)。

圖1 Htr Al、Survivin在早產(chǎn)組和足月產(chǎn)組胎盤組織的表達(dá)Fig.1 Expressions of Htr Al and Survivin in the placenta of premature and normal pregnancy(×200)

圖2 Htr Al、Survivin在早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中的表達(dá)Fig.2 Expressions of Htr Al and Survivin in the placenta of early-onset and late-onset preeclampsia(×200)

2.2 兩組孕婦胎盤組織中Htr A1及Survivin的表達(dá)情況對Htr A1、Survivin在胎盤組織中的表達(dá)分別進(jìn)行正態(tài)性檢驗(WHtrA1=1.256，P=0.372；WSurvivin=1.824，P=0.388)，方差齊性檢驗(FHtrA1=1.172，P=0.328；FSurvivin=1.756，P=0.365)，P＞0.05，可知均服從正態(tài)分布。在正常妊娠患者胎盤組織中，Htr A1的表達(dá)隨著孕周的增加而增強(qiáng)，Survivin的表達(dá)隨著孕周的增加而降低，早產(chǎn)組與足月組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(表1)。與晚發(fā)型重度子癇前期比較，早發(fā)型重度子癇前期孕婦胎盤組織中Htr A1表達(dá)明顯增高，平均灰度值明顯低于晚發(fā)型(t=4.36，P= 0.02)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；Survivin表達(dá)早發(fā)型重度子癇前期較晚發(fā)型明顯降低，平均灰度值明顯高于晚發(fā)型(t=3.87，P=0.03)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表2)。

表1 早產(chǎn)組和足月組的Htr A1及Survivin表達(dá)的比較Tab.1 Expressions of Htr Al and Survivin in placenta of premature and full-term groups()

表1 早產(chǎn)組和足月組的Htr A1及Survivin表達(dá)的比較Tab.1 Expressions of Htr Al and Survivin in placenta of premature and full-term groups()

與足月組比較，*P＜0.05。

組別例數(shù)胎盤Htr A1 (平均灰度值)胎盤Survivin (平均灰度值)早產(chǎn)組30 165.39±1.36*118.34±2.76*足月組30 161.89±1.22 120.65±2.13

表2 不同類型的Htr A1及Survivin表達(dá)的比較Tab.2 Expressions of Htr Al and Survivin in placenta of early-onset and late-onset preeclampsia()

表2 不同類型的Htr A1及Survivin表達(dá)的比較Tab.2 Expressions of Htr Al and Survivin in placenta of early-onset and late-onset preeclampsia()

與晚發(fā)型比較，△P＜0.05。

組別例數(shù)胎盤Htr A1 (平均灰度值)胎盤Survivin (平均灰度值)早發(fā)型30 142.63±3.48△138.32±3.26△晚發(fā)型35 158.72±4.26 126.47±2.85

2.3 胎盤組織中Htr A1及Survivin表達(dá)的相關(guān)性對胎盤組織中的Htr A1及Survivin表達(dá)水平進(jìn)行直線相關(guān)回歸分析，結(jié)果顯示Htr A1及Survivin的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.67，P＜0.05)。

3 討 論

3.1 早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期的差異與晚發(fā)型比較，早發(fā)型重度子癇前期發(fā)病早，更易出現(xiàn)各種嚴(yán)重合并癥，嚴(yán)重危害母嬰健康。目前，被廣泛接受的重度子癇前期發(fā)病機(jī)制學(xué)說為兩階段模式［5］：第一階段，妊娠早期滋養(yǎng)層細(xì)胞浸潤不足，導(dǎo)致胎盤“淺著床”和螺旋動脈重鑄不良，胎盤低灌注。第二階段，胎盤缺血再灌注損傷，胎盤因子釋放入母體血液循環(huán)，導(dǎo)致系統(tǒng)性炎癥和內(nèi)皮損傷。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為［4，6］早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期發(fā)病機(jī)制不同，研究發(fā)現(xiàn)ES-PE患者的胎盤組織凋亡明顯增加，滋養(yǎng)細(xì)胞侵入受限，胎盤著床較淺，螺旋小動脈狹窄。早發(fā)型重度子癇前期起源于胎盤，母胎界面發(fā)生的病理生理改變導(dǎo)致各種因子通過血液循環(huán)播散到全身，引發(fā)全身各臟器功能改變，同時滋養(yǎng)細(xì)胞分化增殖、凋亡和功能異常，使滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力受損，導(dǎo)致子宮螺旋小動脈生理重鑄過程障礙，胎盤“淺著床”，胎盤灌注減少，缺血缺氧，產(chǎn)生更多的毒性因子及代謝產(chǎn)物，血管內(nèi)皮功能受損，形成惡性循環(huán)。而晚發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生過程更傾向于母體性疾病，是機(jī)體與疾病之間一個長期耐受最終失衡的過程，發(fā)病較晚，病情多不嚴(yán)重。

3.2 Htr A1、Survivin與重度子癇前期的關(guān)系胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞浸潤功能與細(xì)胞增殖、凋亡有關(guān)，而重度子癇前期發(fā)病機(jī)制之一即為胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力降低，胎盤“淺著床”［7］。Htr A1是一種具有熱休克蛋白性質(zhì)的膜絲氨酸蛋白酶，屬于Htr A絲氨酸蛋白酶家族。既往研究發(fā)現(xiàn)，Htr A1參與早期妊娠胎盤發(fā)育，可能與滋養(yǎng)細(xì)胞增殖分化及凋亡有關(guān)，進(jìn)而推測Htr A1與子癇前期發(fā)生有關(guān)［8-9］。我們既往研究發(fā)現(xiàn)［10-11］，正常妊娠時Htr A1在胎盤組織中的表達(dá)隨著妊娠的進(jìn)展而逐漸增強(qiáng)。本研究亦發(fā)現(xiàn)，足月產(chǎn)組胎盤組織Htr A1表達(dá)較早產(chǎn)組高，說明早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞增殖分化活躍，分泌Htr Al增多。Htr Al可降低滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力，調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕深度及范圍，孕晚期Htr Al升高，促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，與胎盤組織成熟老化有關(guān)；子癇前期胎盤組織中Htr A1的表達(dá)高于正常妊娠，初步提示滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力降低與子癇前期的發(fā)生有關(guān)［12］。本研究發(fā)現(xiàn)與晚發(fā)型比較，早發(fā)型重度子癇前期Htr A1表達(dá)明顯增高，進(jìn)一步說明早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤密切相關(guān)，與既往研究一致［4，6］。

Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)凋亡抑制因子，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力與細(xì)胞凋亡增殖有關(guān)。隨著妊娠的進(jìn)展，胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡增加，Survivin表達(dá)隨孕周增加而降低。本研究發(fā)現(xiàn)，足月產(chǎn)組胎盤組織Survivin表達(dá)較早產(chǎn)組降低，差異有顯著性。我們既往研究［13-14］已發(fā)現(xiàn)子癇前期患者胎盤組織中Survivin表達(dá)明顯低于正常妊娠，且與病情嚴(yán)重程度成負(fù)相關(guān)，病情越重，Survivin表達(dá)越低，提示子癇前期的發(fā)生與滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡異常增加，侵襲能力下降有密切關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)，與晚發(fā)型比較早發(fā)型重度子癇前期Survivin表達(dá)明顯降低，提示早發(fā)型胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能異常更為明顯，與KADYROW等［2］研究一致。但其導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞淺植入的具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生與胎盤功能異常關(guān)系密切。因此，Htr A1及Survivin等與滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力相關(guān)的因子，其表達(dá)程度與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生關(guān)系密切。本研究發(fā)現(xiàn)早發(fā)型重度子癇前期胎盤組織中Htr A1的表達(dá)明顯高于晚發(fā)型，差異有顯著性；Survivin的表達(dá)明顯低于晚發(fā)型重度子癇前期，差異有顯著性，且二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.67，P＜0.05)。提示早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞增殖凋亡有關(guān)，增殖能力降低，凋亡增加，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力降低。因此，早發(fā)型重度子癇前期發(fā)病機(jī)制更傾向于胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力降低，胎盤淺著床，缺血缺氧，釋放某些物質(zhì)引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致出現(xiàn)子癇前期的臨床表現(xiàn)［15-16］。

盡管研究提示早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生與調(diào)節(jié)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能的因子Htr A1、Survivin等有關(guān)，但其調(diào)控的具體機(jī)制尚不清楚，需進(jìn)一步研究其調(diào)節(jié)通路，以期闡明子癇前期的發(fā)病機(jī)制。

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(編輯 韓維棟)

Expressions and significance of high temperature requirement A1 and Survivin in placenta of early-onset severe preeclampsia

LI Chun-fang，GOU Wen-li，ZONG Lu，LI Yang
(Department of Gynecology&Obstetrics，the First Affiliated Hospital，Medical School of Xi'an Jiaotong University，Xi'an 710061，China)

ObjectiveTo investigate the expressions and significance of high temperature requirement A1 (Htr Al)and Survivin in placenta of early-onset severe preeclampsai.MethodsWe detected the expressions of Htr Al and Survivin in placenta of early-onset severe preeclampsia and late-onset severe preeclampsia(including 30 early-onset and 35 late-onset)by immunohistochemical SABC method.ResultsCompared with that in late-onset severe preeclampsia，the expression of Htr A1 was elevated in early-onset severe preeclampsia，and there was a negative correlation between the mean grey value and the expression.In early-onset and late-onset severe preeclampsia，the average gray value was 142.63±3.48 and 158.72±4.26，respectively(P＜0.05).In contrast，the expression of Survivin was decreased in early-onset severe preeclampsia；the average gray value was 138.32± 3.26 and 126.47±2.85，respectively(P＜0.05).The expressions of Htr Al and Survivin in preeclampsia placenta were negatively correlated(r=-0.67，P＜0.05).ConclusionHtr Al and Survivin are closely related to earlyonset severe preeclampsia，which suggests that the mechanism of early-onset preeclampsia may differ from that of late-onset preeclampsia.

high temperature requirement A1(Htr A 1)；Survivin；early-onset severe preeclampsia；placenta

R714.24

A

1671-8259(2014)05-0678-04

10.7652/jdyxb201405022

2014-02-28

2014-04-28

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.30872773)；陜西省科技攻關(guān)項目(No.2012K17-02-08) Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30872773)and the Sci-Tech Project of Shaanxi Province(No. 2012K17-02-08)

茍文麗，教授.博士生導(dǎo)師.E-mail：gwll2861@126.com

李春芳(1972-)，女(漢族)，副主任醫(yī)師.研究方向：妊娠期高血壓疾病.E-mail：lichunfang626@126.com

時間：2014-07-22 17∶12 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20140722.1712.014.html