頸內(nèi)動脈阻塞后再通對大鼠慢性腦缺血損傷的保護作用

韓建峰，霍 康，白 艷，袁興運，宋文峰，屈秋民

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，陜西西安 710061)

頸內(nèi)動脈阻塞后再通對大鼠慢性腦缺血損傷的保護作用

韓建峰，霍 康，白 艷，袁興運，宋文峰，屈秋民

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，陜西西安 710061)

目的通過建立慢性腦缺血動物模型，證實慢性腦缺血恢復(fù)血流可改善動物模型認知功能和神經(jīng)細胞凋亡。方法經(jīng)頸外動脈線栓法雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞術(shù)制備慢性腦缺血模型，并通過神經(jīng)功能缺陷評分驗證動物模型，恢復(fù)血流后用Morris水迷宮測試大鼠的空間學(xué)習(xí)能力和空間記憶能力，再將腦組織固定和染色，用HE染色和Nissl染色觀察神經(jīng)元數(shù)量變化情況，利用Fluoro-Jade C染色法特異性標記腦片中正在發(fā)生變性的神經(jīng)元，觀察阻斷后及再通后變性的神經(jīng)元數(shù)目的變化，通過觀察雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織Bcl-2及Caspase 3的表達變化反映神經(jīng)元的變性和丟失。結(jié)果雙側(cè)頸內(nèi)動脈血流阻斷能造成慢性腦缺血，引起神經(jīng)元變性和死亡，導(dǎo)致大鼠感覺運動及空間學(xué)習(xí)記憶功能損害。腦血流的恢復(fù)能促進抗凋亡基因Bcl-2和Caspase 3的表達，從而逆轉(zhuǎn)了慢性缺血對腦組織的損害，減緩了神經(jīng)元的變性和丟失，有利于大鼠感覺運動和空間認知功能恢復(fù)。結(jié)論慢性腦缺血恢復(fù)血流可改善動物模型認知功能和神經(jīng)細胞凋亡。

慢性腦缺血；認知功能；神經(jīng)細胞凋亡；Bcl-2；Caspase 3

過去進行的癥狀性腦血管狹窄的研究中，大多數(shù)關(guān)注的是終點事件。例如，卒中、血管性死亡、心梗等，過多關(guān)注的重點是心腦血管病的復(fù)發(fā)［1-3］。但是，我們知道癥狀性顱內(nèi)動脈狹窄所導(dǎo)致的不僅僅是急性血管病事件(TIA、梗塞)，很多情況下會導(dǎo)致慢性腦供血障礙，臨床上可以出現(xiàn)癡呆、MCI、認知功能下降，甚至精神行為異常，這些現(xiàn)象產(chǎn)生的原因是由于顱內(nèi)外動脈狹窄導(dǎo)致大腦慢性缺氧、灌注下降造成的，常常會造成患者神經(jīng)功能的緩慢下降，使致殘率增加。慢性腦缺血發(fā)生、發(fā)展可使腦組織產(chǎn)生不同程度的病理損傷，從而導(dǎo)致不同程度的神經(jīng)功能障礙。因此，本次實驗研究利用大鼠慢性腦缺血模型，觀察了慢性腦缺血后大鼠腦結(jié)構(gòu)和功能的損傷，腦血流恢復(fù)對腦組織和神經(jīng)功能損傷的逆轉(zhuǎn)作用，為臨床治療此類疾病提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠80只，體質(zhì)量280～320 g，雄性，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。大鼠購回后飼養(yǎng)于溫度22～26℃、濕度40%～60%環(huán)境中一周后進行實驗。假手術(shù)組20只作為對照，每組10只分別于4周、8周處死，其余60只分4組，雙頸內(nèi)動脈阻塞后2周、4周、8周后再通組及不再通組各15只。

1.2 大鼠頸內(nèi)動脈（internal carotid artery，ICA）阻塞及再通模型制備的方法

1.2.1 經(jīng)頸外動脈線栓法行頸內(nèi)動脈阻塞術(shù) 大鼠經(jīng)10 m L/L水合氯醛腹腔注射麻醉(40 mg/kg)后，仰臥位固定于大鼠手術(shù)臺上，剪毛，常規(guī)消毒頸部皮膚，取頸部正中切口切開皮膚及皮下組織，分別分離雙側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內(nèi)動脈(ICA)。分離后，電凝阻斷ECA的分支并結(jié)扎遠心端，隨后從結(jié)扎處的遠側(cè)切斷ECA，拉向下方；分別用動脈夾夾閉ICA和CCA，手術(shù)顯微鏡下，用顯微剪在ECA近動脈分叉處剪一小口，將準備好的栓線經(jīng)ECA插入ICA內(nèi)(栓線為直徑0.2 mm的黑色魚線，其頭端已燒制成光滑的均勻棒狀)，進入長度為距CCA分叉處約5 mm。隨后，在ECA處用醫(yī)用縫線結(jié)扎固定栓線以阻止出血并確保阻斷ICA血流。逐層縫合皮下組織及皮膚，燈照取暖保溫，保持呼吸道通暢，待麻醉蘇醒后送回動物房，常規(guī)飼養(yǎng)。1.2.2 頸內(nèi)動脈阻塞后的再通 ICA阻塞后4周，選擇經(jīng)神經(jīng)功能缺陷評分確定的有腦缺血癥狀的大鼠進行ICA再通手術(shù)。動物麻醉固定于手術(shù)臺，切開頸部皮膚，分離ECA，尋找栓線尾端，用動脈夾夾閉CCA和ICA，經(jīng)ECA拔出栓線，靠近CCA分叉處結(jié)扎ECA，確保無出血，逐層縫合傷口、保溫，麻醉蘇醒后，常規(guī)飼養(yǎng)8周。

1.3 神經(jīng)功能缺陷評分（neurological deficit score，NDS）參考BECK等［4］的方法，對雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后大鼠的感覺運動功能缺陷進行評價，評價項目包括斜面反射、握持反射、觸須反射、跌落反射、角膜反射、耳廓反射、自發(fā)性運動、轉(zhuǎn)圈運動、前肢彎曲、扭身反射及噬咬反射，正常大鼠總得分為21分，感覺運動缺陷大鼠得分顯著降低。

1.4 Morris水迷宮Morris水迷宮用于測試頸內(nèi)動脈阻塞及再通后大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能的變化。大鼠游泳的圓形水池直徑為120 cm，水深50 cm，水溫為(24±2)℃，水池被分為4個象限，在其中一個象限中央放置一隱藏于水面下2 cm的透明平臺，水中加入牛奶以避免動物看見平臺。水池上方中央安放攝像頭，連結(jié)至電腦和記錄軟件，用以記錄和分析動物的游泳時間和運動軌跡(附圖6A)。測試分為定位航線實驗和空間探索實驗兩部分。定位航線實驗共4 d，經(jīng)8個訓(xùn)練段，每個訓(xùn)練段游泳4次。每次訓(xùn)練隨機選取一個象限，將大鼠頭朝向池壁放入水中，觀察和記錄120 s內(nèi)大鼠尋找水下平臺的運動軌跡和時間(即逃避潛伏期，escape latency)，用于測試大鼠的空間學(xué)習(xí)能力?？臻g探索實驗于第5天進行，撤去平臺，將大鼠于平臺對面象限放入水中，記錄大鼠在120 s中在平臺象限的停留時間及穿經(jīng)平臺次數(shù)，用于測試大鼠的空間記憶能力。

1.5 腦組織固定和染色

1.5.1 大鼠腦組織灌注固定 將接受頸內(nèi)動脈阻塞后4周、阻塞后再通8周和假手術(shù)組動物進行灌注固定。100 m L/L水合氯醛(40 mg/kg體質(zhì)量)腹腔注射麻醉后，開胸，暴露心臟，左心室插管，剪開右心耳，用9 g/L氯化鈉溶液200 m L快速灌注沖洗出血液，至流出液體清亮；再用500 m L含40 g/L多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液(PB，p H 7.4)灌注固定1 h；斷頭取腦，修整成厚約1 cm的冠狀腦塊，放入40 g/L多聚甲醛中，4℃后固定過夜，然后移入300 g/L蔗糖溶液中，至其沉入容器底部。

1.5.2 冰凍切片 處理好的腦塊置于樣本座上，用OCT包埋，放入恒冷箱切片機內(nèi)快速冷凍，然后行冠狀切片，片厚20μm，錨定于鉻釩明膠包被的載玻片上，用于HE、Nissl和Fluoro-Jade C染色。

1.5.3 HE染色 冰凍切片復(fù)至室溫，蒸餾水洗去片上的OCT，浸入蘇木素染液內(nèi)，室溫30 min；流水洗去多余染液，用10 g/L鹽酸乙醇分色，浸入自來水中復(fù)藍；浸入伊紅染液內(nèi)1 min，流水洗去殘余染液；經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，中性樹膠封片、晾干，顯微鏡觀察和照相。

1.5.4 Nissl染色 主要用于顯示腦片上的神經(jīng)元。切片放入5 g/L甲苯胺藍(700 m L/L乙醇配制)中染色10 min，700 m L/L酒精分色，至切片為淡藍色；脫水、透明、中性樹膠封片，顯微鏡觀察和照相。

1.6 Fluoro-Jade C染色Fluoro-Jade C是一類新近發(fā)展的陰離子熒光配體染料，它可以與中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)正發(fā)生變性的神經(jīng)元結(jié)合，特異性標記腦內(nèi)的變性神經(jīng)胞體及其突起，具有染色時間短、不易衰減、高對照性等優(yōu)點。是一種快速、敏感及可靠的熒光染料，可方便的用于變性神經(jīng)元的檢測和定位［5-7］。圖像采集分析是在熒光顯微鏡下觀察Fluoro-Jade C陽性細胞并照相。

1.7 Western blot蛋白檢測蛋白提取→BCA法蛋白濃度測定→蛋白電泳樣品制備→SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳及蛋白的電轉(zhuǎn)移→免疫學(xué)染色→數(shù)據(jù)采集和結(jié)果分析：應(yīng)用BioRad凝膠成像系統(tǒng)采集數(shù)據(jù)，采用ImageJ計算每個條帶的積分吸光度值(IA)，用目標蛋白與內(nèi)參蛋白(β-Actin)條帶的積分吸光度比值表示目標蛋白的相對表達量，進行進一步的統(tǒng)計學(xué)分析。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差()表示，應(yīng)用SPSS 16.0進行數(shù)據(jù)分析，樣本均數(shù)間的比較采用配對t檢驗或成組t檢驗，檢驗水準取0.05。

2 結(jié) 果

2.1 雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后神經(jīng)功能缺陷評分的變化為了觀察雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后大鼠的感覺運動功能變化，評價模型是否成功，參照文獻報道的方法，我們在手術(shù)后不同時間點對大鼠進行了神經(jīng)功能缺陷評分。研究結(jié)果顯示，ICA阻塞后1周動物的評分與假手術(shù)組未見顯著變化；ICA阻塞后2周，約50%的動物評分顯著降低；ICA阻塞后4周，約70%的動物的評分顯著低于假手術(shù)組。因此，我們選擇了阻塞后4周評分顯著降低的動物進行后續(xù)的再通實驗。頸內(nèi)動脈再通后，動物的評分有所升高，在ICA再通后4周和8周顯著高于ICA阻塞4周組(圖1)。

2.2 利用Morris水迷宮實驗評價雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞后對大鼠空間認知能力的影響Morris水迷宮實驗是顯示腦損傷后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能變化的主要方法之一。利用該方法進一步評價雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞后對大鼠空間認知能力的影響及頸內(nèi)動脈再通后的變化。定位航線實驗的統(tǒng)計結(jié)果顯示，ICA阻塞后4周動物的逃避潛伏期顯著高于假手術(shù)組；ICA再通后4周，其逃避潛伏期在第4到第8個測試段中顯著下降，但仍明顯高于假手術(shù)組；ICA再通后8周的逃避潛伏期繼續(xù)下降，但與ICA再通后4周相比，沒有統(tǒng)計學(xué)差異，提示ICA阻塞可損傷大鼠的空間學(xué)習(xí)功能，而ICA再通可促進其空間學(xué)習(xí)功能恢復(fù)(圖2)。定位航線實驗顯示，ICA阻塞4周組動物在平臺象限的停留時間明顯少于假手術(shù)組，ICA再通后，動物的平臺象限停留時間逐漸提高，在ICA再通4周和8周組顯著高于ICA阻塞4周組，但仍然低于假手術(shù)組，提示ICA阻塞可損傷大鼠的空間記憶能力，而ICA再通可促進其空間記憶能力的恢復(fù)(圖3)。

圖1 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后的神經(jīng)功能缺陷評分Fig.1 Neurological deficit scores of rats after ICA occlusion and reperfusion

圖2 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后Morris水迷宮實驗的逃避潛伏期的變化Fig.2 Changes of escape latency in the Morris water maze test after ICA occlusion and reperfusion

圖3 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后Morris水迷宮實驗的平臺象限停留時間的變化Fig.3 Changes of platform quadrant stay time in the Morris water maze test after ICA occlusion and reperfusion

2.3 HE及Nissl染色觀察雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織的形態(tài)學(xué)變化為了觀察雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織的形態(tài)學(xué)變化，我們選取了頸內(nèi)動脈供血區(qū)的額葉皮質(zhì)，進行了HE和Nissl染色。HE染色結(jié)果顯示(圖4)，假手術(shù)組大鼠腦組織中的神經(jīng)元形態(tài)正常，表現(xiàn)為細胞核光滑，淡染后有明顯的核仁；ICA阻塞4周的腦組織切片上神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，有散在的形態(tài)異常神經(jīng)元，出現(xiàn)了較多的空泡，部分空泡中有固縮的核染色質(zhì)；另外，與假手術(shù)組相比，切片上出現(xiàn)了較多的核小且濃染的浸潤炎性細胞。ICA再通后8周，切片上神經(jīng)元數(shù)量未見明顯增加；但炎性細胞較ICA阻塞4周組明顯減少；可觀察多個管腔較大的增生血管。到

圖4 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織的形態(tài)學(xué)變化Fig.4 Morphological changes of brain slices after ICA occlusion and reperfusion

Nissl染色的主要目的是顯示腦片的神經(jīng)元變化。結(jié)果顯示(圖5)，對照組(假手術(shù)組)動物切片上可見神經(jīng)元形態(tài)正常，胞質(zhì)內(nèi)Nissl體明顯，細胞核大，輪廓平滑，染色質(zhì)疏松，核仁清晰。ICA阻塞4周，腦切片上出現(xiàn)了數(shù)個損傷神經(jīng)元，表現(xiàn)為核固縮濃染，胞體萎縮變形，且有神經(jīng)元丟失后遺留的空泡。ICA再通后8周，存活神經(jīng)元形態(tài)正常，有散在的固縮細胞核和空泡。

圖5 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織的Nissl染色Fig.5 Nissl staining of brain slices after ICA occlusion and reperfusion

2.4 利用Fluoro-Jade C染色法特異性標記腦片中正在發(fā)生變性的神經(jīng)元在熒光顯微鏡下，F(xiàn)luoro-Jade C染色陽性細胞呈綠色熒光，損傷神經(jīng)元的胞體和突起均清晰可見，但已經(jīng)死亡神經(jīng)元及其他細胞不能被標記。本研究顯示，假手術(shù)組動物的腦切片上未見標記的染色陽性神經(jīng)元；ICA阻塞4周后，切片上可見到Fluoro-Jade C陽性神經(jīng)元，其數(shù)量為(11.5 ±2.2)個/視野；ICA再通8周后，腦片上的陽性細胞數(shù)顯著降低為(3.2±1.1)個/視野(圖6)。

圖6 大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織的Fluoro-Jade C染色Fig.6 Fluoro-Jade C staining of brain slices after ICA occlusion and reperfusion

2.5 雙側(cè)頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織Bcl-2及Caspase 3的表達變化Bcl-2和Caspase 3是細胞內(nèi)兩種重要的抗凋亡基因，其在細胞內(nèi)表達或含量的變化與損傷后神經(jīng)元存活與凋亡有著密切的關(guān)系。本研究利用Western blot方法，顯示了頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦組織內(nèi)Bcl-2和Caspase 3在蛋白水平的變化。結(jié)果顯示，ICA阻塞后，Bcl-2表達顯著降低，與對照組相比，P＜0.05，與頸內(nèi)動脈阻塞4周組相比，P＜0.05，ICA再通后，Bcl-2顯著上調(diào)(圖7)。同樣，其下游分子Caspase 3的含量與對照組相比，P＜0.05，與頸內(nèi)動脈阻塞4周組相比，P＜0.05。ICA再通后，Caspase 3顯著上調(diào)(圖8)。

圖7 Western blot顯示大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦內(nèi)Bcl-2表達的變化Fig.7 The expression of Bcl-2 protein detected by Western blot after ICA occlusion and reperfusion in rats

圖8 Western blot顯示大鼠頸內(nèi)動脈阻塞及再通后腦內(nèi)Caspase 3表達的變化Fig.8 The expression of Caspase 3 protein detected by Western blot after ICA occlusion and reperfusion in rats

3 討 論

慢性腦缺血的動物模型常用的方法是雙側(cè)頸動脈結(jié)扎，兩血管法(2-vessels occlusion，2VO)慢性腦缺血模型最早是由TORTE等建立，該模型通過結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈，阻斷了雙側(cè)頸內(nèi)動脈的血流，使腦血流量降低52%～64%，造成大腦的慢性低灌注狀態(tài)［8-9］。本研究為觀察頸內(nèi)動脈血流恢復(fù)后大鼠的神經(jīng)功能及腦組織病理變化，將上述方法改良為經(jīng)頸外動脈向頸內(nèi)動脈內(nèi)放置線栓的方法，阻斷頸內(nèi)動脈血流；再通過二次手術(shù)經(jīng)頸外動脈取出栓線的方法恢復(fù)頸內(nèi)動脈血流，與DUAN等［7］的方法相比，血流再通的成功率大大提高，解決了因長期結(jié)扎頸總動脈后引起血管閉塞而不能再通的問題；與結(jié)扎頸總動脈然后再吻合血管的方法相比，手術(shù)操作難度顯著降低。因此，本模型可作為研究慢性腦缺血后血流再通的理想工具。

既往研究表明［8-10］，阻斷大鼠雙側(cè)頸內(nèi)動脈血流后，最初并沒有表現(xiàn)出明顯的腦結(jié)構(gòu)和功能損傷，隨著缺血時間的延長，在缺血后2周逐漸出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙，在缺血后4～6周，在腦組織切片上就可以觀察到明顯的神經(jīng)元損傷。我們的研究結(jié)果表明，缺血4周大鼠的神經(jīng)功能缺陷評分顯著降低，Morris水迷宮的逃避潛伏期顯著延長，腦組織切片上也出現(xiàn)了明顯的變性和壞死神經(jīng)元。在熒光顯微鏡下，F(xiàn)luoro-Jade C染色陽性細胞呈綠色熒光，損傷神經(jīng)元的胞體和突起均清晰可見，但已經(jīng)死亡神經(jīng)元及其他細胞不能被標記；ICA阻塞4周后，切片上可見到Fluoro-Jade C陽性神經(jīng)元，ICA再通8周后，腦片上的陽性細胞數(shù)顯著降低，提示再通可明顯減少神經(jīng)元變性。這些與文獻報道的結(jié)果基本一致［11-15］，也證實慢性腦缺血隨著缺血時間的延長，會造成實驗動物行為學(xué)的異常和神經(jīng)元的變性改變。

在本實驗中，作為一種治療手段，我們在阻斷頸內(nèi)動脈血流4周后恢復(fù)了腦血流。腦血流的恢復(fù)可能會帶來兩方面的影響。一方面，有利于腦能量和物質(zhì)代謝功能的恢復(fù)，從而改善慢性腦缺血狀態(tài)，恢復(fù)腦功能；另一方面，也可能造成腦的再灌注損傷，加重腦損傷。因此，我們進一步觀察了腦血流恢復(fù)后不同時間腦結(jié)構(gòu)和神經(jīng)功能的變化。結(jié)果表明，慢性腦缺血大鼠腦血流的有效恢復(fù)可顯著促進大鼠感覺運動功能和空間認知障礙的改善，提示慢性腦缺血后腦血流恢復(fù)能夠有效逆轉(zhuǎn)腦功能障礙，有利于神經(jīng)功能恢復(fù)。我們的研究也提示，由于神經(jīng)元不具備再生能力，腦血流的恢復(fù)不能逆轉(zhuǎn)腦組織結(jié)構(gòu)的損傷，血流恢復(fù)后神經(jīng)功能的改善更多地是由于減少了神經(jīng)元的損傷和丟失，而腦內(nèi)其他正常神經(jīng)元進行了有效的功能代償。說明恢復(fù)正常血流可明顯改善患者慢性腦缺血所造成的神經(jīng)元的損傷，減少神經(jīng)元細胞的凋亡速度。

總之，雙側(cè)頸內(nèi)動脈血流阻斷能造成慢性腦缺血，引起神經(jīng)元變性和死亡，導(dǎo)致大鼠感覺運動及空間學(xué)習(xí)記憶功能的損害。腦血流的恢復(fù)能促進抗凋亡基因Bcl2和Caspase 3的表達，從而逆轉(zhuǎn)了慢性缺血對腦組織的損害，減緩了神經(jīng)元的變性和丟失，有利于大鼠感覺運動和空間認知功能的恢復(fù)。

［1］丁建平，王擁軍，華揚，等.缺血性腦血管病患者顱內(nèi)外動脈狹窄發(fā)生率的對比研究［J］.中華外科雜志，2002，40(12)：9-11.

［2］CHIMOWITZ MI，KOKKINOS J，STRONGE J，et al.Stenting versus aggressive medical therapy for intracranial arterial stenosis［J］.N Engl J Med，2011，365(11)：993-1003.

［3］DERDENYN CP，CHIMOWITZ MI，LYNN M，et al.Aggressive medical treatment with or without stenting in high-risk patients with intracranial artery stenosis(SAMMPRIS)：the final Results of a randomized trail［J］.N Engl J Med，2013，223 (10)：787-793.

［4］BECK J，STUMMER W，LEHMBERG J，et al.Activation of leukocyte-endothelial interactions and reduction of selective neuronal death after global cerebral ischemia［J］.Neurosci Lett，2007，414(2)：159-164.

［5］王蓮，劉永紅，魏玲.Fluoro-Jade C染色在小鼠匹羅卡品癲癇模型中的應(yīng)用［J］.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2012，1(3)216-220.

［6］EHARA A，UEDA S.Application of Fluoro-Jade C in acute and chronic neurodegeneration models：utilities and staining differences［J］.Acta Histochem Cytochem，2009，42(6)：171-179.

［7］DUAN W，ZHANG CQ，ZHENG J，et al.Relief of carotid stenosis improves impaired cognition in a rat model of chronic cerebral hypoperfusion［J］.Acta Neurobiol Exp，2011，71：233-243.

［8］顧兵，程翔，金建波，等.腦缺血動物模型及其實驗治療學(xué)應(yīng)用［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2010，15(9)：1074-1080.

［9］TAOGOSHI T，NOMURA A，MURAKAMI T，et al.Transport of prostaglandin El across the mood-brain barrier in rats［J］.J Pharm Pharmaco1，2005，57(1)：6l-66.

［10］TORRE JC，F(xiàn)ORTIN T，PARK GA，et al.Chronic cerebrovascular insufficiency induces dementia-like deficit in age rats［J］.Brain Res，1992，582(2)：186-195.

［11］BENNETT S，TENNISWOOD M，CHEN JH，et al.Chronic cerebral hypoperfusion elicits neuronal apoptosis and behavioral impairment［J］.Neuro Report，1998，9：161-166.

［12］TOYRAN N，ZORLU F，DTINMEZ G，et al.Chronic hypoperfusion alters the content and structure of proteins and lipids of rat brain homogenates：a Fourier transform infrared spectroscopy study［J］.Eur Biophys J，2004，33(6)：549-554.

［13］YANG PB，CHEN XL，ZHAO JJ，et al.Effect of histamine on regional cerebral blood flow of the parietal lobe in rats［J］. Lasers Med Sci，2010，10(4)：783-788.

［14］張沛琳，婁季宇，范波勝，等.環(huán)杷明對急性腦梗死大鼠血管再生的影響［J］.西安交通大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2013，34(3)：357-360.

［15］MARKS MP，MARCELLUS ML.Intracranial angioplasty without stenting for symptomatic atherosclerotic stenosis：long-term followup［J］.AJNR，2005，26(7)：525-530.

(編輯 韓維棟)

Protective effects of internal carotid artery vascular recanalization on rats after chronic cerebral ischemia

HAN Jian-feng，HUO Kang，BAI Yan，YUAN Xing-yun，SONG Wen-feng，QU Qiu-min
(Department of Neurology，the First Affiliated Hospital，Medical School of Xi'an Jiaotong University，Xi'an 710061，China)

ObjectiveTo establish the chronic cerebral ischemia animal model so as to prove that chronic cerebral vascular ischemia recanalization may improve cognitive function and decrease neuronal apoptosis in the animal model.MethodsThe rats underwent chronic cerebral ischemia by using external carotid artery embolic suture methods.All rats were evaluated for neurological deficit score.After blood flow restoration，spatial learning ability and spatial memory ability of the rats were evaluated by the Morris water maze test.The rat brain tissues were fixed and stained to observe pathological changes.The neuron numbers were compared between blocked and recanalization groups.HE staining and Nissl staining were used to observe the change in the number of neurons. Fluoro-Jade C staining was used to label the degenerating neurons on brain slices.The expressions of Bcl2 and Caspase 3 in rats pretreated with external carotid artery embolic sutureMethodswere observed for the neuronal degeneration and loss.ResultsBilateral carotid artery blocking could induce chronic cerebral ischemia which led to neuronal degeneration and death.Spatial learning ability and spatial memory ability in rats were damaged. Cerebral blood flow restoration could promote anti-apoptotic Bcl2 gene and Caspase 3 gene expression，thereby reversing the damage of chronic ischemia to brain tissue and slowing down the degeneration and loss of neurons. Carotid artery vascular recanalization in rats helped the recovery of movement and spatial cognitive function in rats.ConclusionChronic ischemic vascular recanalization may improve cognitive function and decrease neuronal apoptosis in the animal model.

chronic cerebral ischemia；cognitive function；neuronal apoptosis；Bcl-2；Caspase 3

R743.32

A

1671-8259(2014)05-0605-06

10.7652/jdyxb201405008

2014-02-27

2014-04-07

陜西省科技攻關(guān)項目(No.2011K12-05-12) Supported by the Science and Technology Project of Shaanxi Province(No.2011K12-05-12)

韓建峰(1972-)，男(漢族)，臨床醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師.研究方向：腦血管病、腦血管介入治療.E-mail：rabbit1110@163.com

時間：2014-07-22 18∶19 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20140722.1819.020.html