吉非替尼聯(lián)合用藥對肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株的實驗研究

李娟+李寶平+張雷+梁娟

[摘要] 目的 研究吉非替尼聯(lián)合用藥對肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株的影響。方法 用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測和培養(yǎng)肺癌敏感A549和耐藥A549/GR細胞株，待24 h、48 h、72 h后采用不同濃度的吉非替尼、奧曲肽、順鉑、5-FU進行單用和聯(lián)用處理，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率，分析藥物的增效效果。 結(jié)果 聯(lián)合用藥對肺癌敏感A549和耐藥A549/GR細胞株可起到協(xié)同抑制作用，與單獨用藥組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。聯(lián)合用藥組的肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株培育48 h后的IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8） mg/L，單藥組IC50=（20.1±1.2）、（20.3±1.4） mg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對照組、單藥組、聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)肺癌敏感A549和耐藥A549/GR細胞株后凋亡率差異明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 吉非替尼聯(lián)合用藥對細胞的增生具有協(xié)同抑制作用，對其他肺癌的治療也具有一定的效果。

[關(guān)鍵詞] 吉非替尼；奧曲肽；肺癌敏感A549；肺癌耐藥A549/GR；順鉑；5-FU

[中圖分類號] R734.2 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2014）14-0024-04

在臨床治療中肺癌是一種比較常見的呼吸道惡性腫瘤，并且一些小細胞肺癌不能進行手術(shù)治療，因此化療成為臨床治療的主要手段[1]。因為采用傳統(tǒng)化療藥物并不能獲得滿意的治療效果，并且治療后會發(fā)生較多的不良反應(yīng)，所以臨床對于新藥物和有效治療方法極其渴求。根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果證明，生長抑素及其類似物對許多腫瘤增生起到抑制作用，并且可以提高化療藥物的作用[2]。本次研究通過對肺癌耐藥A549/GR和敏感A549細胞株進行研究和分析，探討單獨用藥和聯(lián)合用藥對肺癌細胞株的影響，現(xiàn)總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1 研究時間

本研究開展時間為2013年1～12月。

1.2細胞與試劑

人肺癌細胞株A549由武漢博士德生物有限公司提供，吉非替尼為阿斯利康有限公司生產(chǎn)，規(guī)格150 g/片，國藥準(zhǔn)字H20090759，奧曲肽為遼寧諾維諾制藥股份有限公司，規(guī)格0.1 mg，國藥準(zhǔn)字H20080393。順鉑為錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10 g，國藥準(zhǔn)字H21020213。氟尿嘧啶（5-FU）為安徽國森藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格50 mg，國藥準(zhǔn)字H34023446。四甲基偶氮唑藍（MTT）購于美國Sigma公司，小牛血清購于上海江萊生物科技有限公司。二甲基亞砜（DMSO）購于無錫先創(chuàng)化學(xué)品有限公司，PBS粉劑購于行知生物科技有限公司，胰酶粉劑購于上海信然生物科技有限公司，EDTA購于北京中諾泰安科技有限公司。

1.3 儀器設(shè)備

二氧化碳孵箱（上海巴玖實業(yè)有限公司，型號2406-2）、超凈臺（上海雷韻試驗儀器制造有限公司，型號：VD-650）、倒置顯微鏡（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司，型號DSZ5000X）、酶標(biāo)儀（北京亞興泰機電設(shè)備有限公司，型號：CA-2000）、96孔板（北京華興科諾生物技術(shù)有限公司，規(guī)格型號：3897）、全自動化學(xué)發(fā)光儀（北京科美東雅生物技術(shù)有限公司，型號：CHEMCLIN 600），流式細胞分析儀（湖南弘林科學(xué)儀器有限公司，型號：FC，500）。

1.4 MTT法檢測A459細胞增殖情況

在溫度為37℃、CO2濃度為5%的環(huán)境下，取對數(shù)生長期的A549細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，孔內(nèi)面積為5×103，培養(yǎng)24 h后吸取培養(yǎng)液[3]。試驗設(shè)對照組為等量培養(yǎng)液；單藥組包括：奧曲肽組：溶液濃度分為 1.3、2.6、5.2、10.4、20.8、41.6、83.3、166.7 mg/L；吉非替尼組：溶液濃度為：2.5、5、10、20、40 μmol/L；順鉑濃度0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L；5-Fu濃度為 0.8、3.2、12.5、50、200、800、3200 mg/L；聯(lián)合用藥組包括：吉非替尼+奧曲肽組：按順序劑量比值為1∶1、1∶2；順鉑+5-Fu組：按劑量的比值分別為 1∶2、1∶1、2∶1；奧曲肽+順鉑+5-Fu組：奧曲肽濃度為20 mg/L，40 mg/L，順鉑聯(lián)合5-Fu劑量的比值為2∶1；吉非替尼+奧曲肽+順鉑+5-FU組：奧曲肽濃度為20 mg/L，40 mg/L。剩下的三種藥按順序劑量比值為1∶1∶1、1∶2∶1、1∶1∶2、2∶1∶1；吉非替尼+順鉑+5-FU組按順序劑量比值為1∶1∶1、1∶2∶1、1∶1∶2、2∶1∶1。每組中同一藥物濃度設(shè)4個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次，分別孵育24、48、72 h。

1.5 流式細胞術(shù)檢測肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株凋亡

采用流式細胞儀從各個組別中挑選出濃度明顯的只做48 h，并計算出各組的IC50值。待以上各組的胰酶-EDTA消化后，收集懸浮和貼壁細胞，在溫度為4℃的環(huán)境下，用濃度為70%的乙醇進行固定，時間控制在2 h[4]。加入加RNase（終質(zhì)量濃度50 mg/L），37℃水浴1 h。加入碘化丙啶染色30 min[5]。流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況。以上實驗重復(fù)3次。

1.6 觀察指標(biāo)

觀察單組藥以及聯(lián)合用藥組在24、48、72 h三個時刻的肺癌細胞生長情況，并計算細胞生長抑制率；檢測培育肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株48 h后的IC50水平；檢測對照組、單藥組、聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)肺癌敏感A549細胞株后的細胞凋亡情況并計算凋亡率。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，兩組比較行t檢驗，多組比較行F檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較行χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1單藥組和聯(lián)合用藥組對肺癌細胞生長的抑制作用

不同濃度的吉非替尼、奧曲肽、順鉑、5-FU單獨應(yīng)用對肺癌細胞的增殖均起到抑制作用，聯(lián)合用藥組的抑制率明顯高于單用組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。其中單藥組的肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株培育48 h后的IC50為20 mg/L左右，并呈劑量依賴性（P<0.01），聯(lián)合用藥組IC50明顯低于單獨用藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.2三組對肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株凋亡的影響

通過流式細胞儀檢測對照組、單藥組、聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)肺癌敏感A549細胞株后，三組之間凋亡率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。誘導(dǎo)肺癌耐藥A549/GR細胞株后，對照組、單藥組、聯(lián)用組之間凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3討論

近年來，在種類眾多的治癌藥物中，順鉑作用似烷化劑，與多種抗腫瘤藥有協(xié)同作用、且無交叉耐藥等特點，作為當(dāng)前聯(lián)合化療中最常用的藥物之一，應(yīng)用廣泛，但因其又對腎功能有損害、嚴重骨髓抑制的副作用，讓人很擔(dān)憂。5-FU對消化系統(tǒng)癌（食管癌、胃癌、腸癌、胰腺癌、肝癌）和乳腺癌療效較好，對宮頸癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤也有效，但同樣有嚴重的骨髓抑制副作用。所以近些年來，吉非替尼被認為是治療非小細胞肺癌的首先藥物，由各國研究人員對其治療效果進行了臨床試驗，同時也對不同的腫瘤細胞進行了各種嘗試，被證實其對多種腫瘤細胞的增長均能起到抑制作用[6]。王亞麗等[3]研究發(fā)現(xiàn)，吉非替尼可抑制肺腺癌細胞的增殖，并且能夠影響表皮生長因子受體的表達，從而起到治療的作用。然而有部分學(xué)者認為吉非替尼的作用效果還存在進一步研究的價值，有報道稱，通過吉非替尼治療晚期肝癌的臨床效果并不顯著，并且在多數(shù)小細胞肺癌中也為達到令人滿意的效果[7]，所以，有必要進行吉非替尼與傳統(tǒng)化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，對其是否能增強治療效果進行探討。

有報道稱吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合作用可有效延長肺腺癌的一年內(nèi)無進展生存率和中位生存期，所以確定最佳的聯(lián)合方案必須通過大量的研究才能應(yīng)用于臨床[8]。溫瑩浩等[9]索拉非尼與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用于人肺癌細胞株A549研究，結(jié)果顯示，兩藥聯(lián)合能夠有效抑制人肺癌細胞株A549的生長。陳智偉等[5]研采用CCK8法檢測人肺癌細胞A549、H460、H1299、SPC-A、95C、95D對于吉非替尼與西妥昔單抗的IC50，并以流式細胞技術(shù)進行細胞凋亡監(jiān)測，結(jié)果顯示，1 nmol/L吉非替尼與5 μmol/L西妥昔單抗對于A549細胞的生長抑制率約為30%和40%，而將兩者聯(lián)合應(yīng)用時，抑制率可提高至50%以上；兩藥單獨應(yīng)用時，A549細胞遷移降低率分別為18%、22%，兩藥聯(lián)合應(yīng)用時，細胞遷移降低率為35%。由此可見，將吉非替尼與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用可能具有協(xié)同作用，有望提高藥物對于肺癌細胞生長及遷移的抑制作用，可能對于肺癌的治療具有較大潛力。本次研究結(jié)果顯示，在體外肺癌細胞試驗中，吉非替尼單用組與奧曲肽單用組對細胞增長均起到抑制作用，并且具有濃度依賴性的特點，隨著濃度的增加抑制率也逐漸增強，當(dāng)奧曲肽濃度超過50 mg/L以上后，抑制率未進一步增加，可能是肺癌A549細胞達到飽和狀態(tài)，這種情況在其他研究中也有類似現(xiàn)象[10]。當(dāng)吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合應(yīng)用時抑制率明顯高于單獨用藥，因此表明兩種藥物具有協(xié)同抑制作用，可增加藥物的敏感性，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制DNA的合成，從而提高化療效果。同時本次研究結(jié)果顯示，吉非替尼組的凋亡率與奧曲肽組相比差異不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但是對照組、單藥組、聯(lián)用組之間差異較明顯（P<0.05），A549細胞的凋亡率顯著升高，說明聯(lián)合用藥對細胞的增生具有協(xié)同抑制作用，可促進細胞凋亡，增加治療效果。研究結(jié)果中，聯(lián)合用藥組IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8）mg/L低于兩組單獨用藥組（20.1±1.2）、（20.3±1.4）mg/L，說明聯(lián)合用藥對治療其他肺癌也具有一定的療效，敏感A549與耐藥A549/GR肺癌細胞株間對肺癌A549的治療效果不影響。

總之，吉非替尼聯(lián)合用藥可增強對細胞的抑制作用，將其與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用于肺癌的治療具有良好療效。

[參考文獻]

[1] 秦培艷，莊洪卿，袁智勇，等. 吉非替尼不同加藥時間肺癌A549細胞放射增敏研究[J]. 中華放射腫瘤學(xué)雜志，2010，19（2）：150-152.

[2] 康小紅，龔亞斌，王立芳，等. 蟾毒靈聯(lián)合吉非替尼對肺癌細胞H1975的影響及機制研究[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（8）：1081-1085.

[3] 王亞麗，牟曉燕，游力，等. 吉非替尼對肺腺癌細胞增殖和表皮生長因子受體表達的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2010，30（6）：805-808.

[4] 周曉，王偉，戴捷，等. 順鉑與氟尿嘧啶聯(lián)合化療對腹壁皮瓣的影響[J]. 組織工程與重建外科雜志，2011，6（14）：109-110.

[5] 陳智偉，虞永峰，李子明，等. 吉非替尼和西妥昔單抗聯(lián)合治療非小細胞肺癌的體外實驗研究[J]. 中國癌癥雜志，2010，20（4）：275-280.

[6] 陶顯東，鐘鐳，薛磊，等. 載順鉑的納米羥基磷灰石對A549肺腺癌細胞體外脹亡的影響[J]. 組織工程與重建外科雜志， 2012，1（15）：121-122.

[7] 馬麗，韓曉紅，王帥，等. 鹽酸?？颂婺釋Ψ伟┘毎鲋澈偷蛲龅挠绊慬J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（36）：2561-2564.

[8] 玄香蘭，周彩存，安昌善，等. 不同用藥順序吉非替尼、多西他賽聯(lián)用對非小細胞肺癌細胞的體外抑制作用[J]. 山東醫(yī)藥，2012，52（17）：32-34.

[9] 溫瑩浩，林小小，錢海華，等. 索拉非尼聯(lián)合吉非替尼對人肺癌細胞株A549的生長抑制作用[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2013， 34（12）：1826-1829.

[10] 魏超，周乃珍，郭慧，等. 不同序貫的吉非替尼與化療藥物聯(lián)合對人肝癌細胞Bel-7402增殖的抑制作用[J]. 安徽師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2011，34（3）：265-268.

（收稿日期：2014-02-28）

2結(jié)果

2.1單藥組和聯(lián)合用藥組對肺癌細胞生長的抑制作用

不同濃度的吉非替尼、奧曲肽、順鉑、5-FU單獨應(yīng)用對肺癌細胞的增殖均起到抑制作用，聯(lián)合用藥組的抑制率明顯高于單用組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。其中單藥組的肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株培育48 h后的IC50為20 mg/L左右，并呈劑量依賴性（P<0.01），聯(lián)合用藥組IC50明顯低于單獨用藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.2三組對肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株凋亡的影響

通過流式細胞儀檢測對照組、單藥組、聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)肺癌敏感A549細胞株后，三組之間凋亡率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。誘導(dǎo)肺癌耐藥A549/GR細胞株后，對照組、單藥組、聯(lián)用組之間凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3討論

近年來，在種類眾多的治癌藥物中，順鉑作用似烷化劑，與多種抗腫瘤藥有協(xié)同作用、且無交叉耐藥等特點，作為當(dāng)前聯(lián)合化療中最常用的藥物之一，應(yīng)用廣泛，但因其又對腎功能有損害、嚴重骨髓抑制的副作用，讓人很擔(dān)憂。5-FU對消化系統(tǒng)癌（食管癌、胃癌、腸癌、胰腺癌、肝癌）和乳腺癌療效較好，對宮頸癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤也有效，但同樣有嚴重的骨髓抑制副作用。所以近些年來，吉非替尼被認為是治療非小細胞肺癌的首先藥物，由各國研究人員對其治療效果進行了臨床試驗，同時也對不同的腫瘤細胞進行了各種嘗試，被證實其對多種腫瘤細胞的增長均能起到抑制作用[6]。王亞麗等[3]研究發(fā)現(xiàn)，吉非替尼可抑制肺腺癌細胞的增殖，并且能夠影響表皮生長因子受體的表達，從而起到治療的作用。然而有部分學(xué)者認為吉非替尼的作用效果還存在進一步研究的價值，有報道稱，通過吉非替尼治療晚期肝癌的臨床效果并不顯著，并且在多數(shù)小細胞肺癌中也為達到令人滿意的效果[7]，所以，有必要進行吉非替尼與傳統(tǒng)化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，對其是否能增強治療效果進行探討。

有報道稱吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合作用可有效延長肺腺癌的一年內(nèi)無進展生存率和中位生存期，所以確定最佳的聯(lián)合方案必須通過大量的研究才能應(yīng)用于臨床[8]。溫瑩浩等[9]索拉非尼與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用于人肺癌細胞株A549研究，結(jié)果顯示，兩藥聯(lián)合能夠有效抑制人肺癌細胞株A549的生長。陳智偉等[5]研采用CCK8法檢測人肺癌細胞A549、H460、H1299、SPC-A、95C、95D對于吉非替尼與西妥昔單抗的IC50，并以流式細胞技術(shù)進行細胞凋亡監(jiān)測，結(jié)果顯示，1 nmol/L吉非替尼與5 μmol/L西妥昔單抗對于A549細胞的生長抑制率約為30%和40%，而將兩者聯(lián)合應(yīng)用時，抑制率可提高至50%以上；兩藥單獨應(yīng)用時，A549細胞遷移降低率分別為18%、22%，兩藥聯(lián)合應(yīng)用時，細胞遷移降低率為35%。由此可見，將吉非替尼與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用可能具有協(xié)同作用，有望提高藥物對于肺癌細胞生長及遷移的抑制作用，可能對于肺癌的治療具有較大潛力。本次研究結(jié)果顯示，在體外肺癌細胞試驗中，吉非替尼單用組與奧曲肽單用組對細胞增長均起到抑制作用，并且具有濃度依賴性的特點，隨著濃度的增加抑制率也逐漸增強，當(dāng)奧曲肽濃度超過50 mg/L以上后，抑制率未進一步增加，可能是肺癌A549細胞達到飽和狀態(tài)，這種情況在其他研究中也有類似現(xiàn)象[10]。當(dāng)吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合應(yīng)用時抑制率明顯高于單獨用藥，因此表明兩種藥物具有協(xié)同抑制作用，可增加藥物的敏感性，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制DNA的合成，從而提高化療效果。同時本次研究結(jié)果顯示，吉非替尼組的凋亡率與奧曲肽組相比差異不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但是對照組、單藥組、聯(lián)用組之間差異較明顯（P<0.05），A549細胞的凋亡率顯著升高，說明聯(lián)合用藥對細胞的增生具有協(xié)同抑制作用，可促進細胞凋亡，增加治療效果。研究結(jié)果中，聯(lián)合用藥組IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8）mg/L低于兩組單獨用藥組（20.1±1.2）、（20.3±1.4）mg/L，說明聯(lián)合用藥對治療其他肺癌也具有一定的療效，敏感A549與耐藥A549/GR肺癌細胞株間對肺癌A549的治療效果不影響。

總之，吉非替尼聯(lián)合用藥可增強對細胞的抑制作用，將其與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用于肺癌的治療具有良好療效。

[參考文獻]

[1] 秦培艷，莊洪卿，袁智勇，等. 吉非替尼不同加藥時間肺癌A549細胞放射增敏研究[J]. 中華放射腫瘤學(xué)雜志，2010，19（2）：150-152.

[2] 康小紅，龔亞斌，王立芳，等. 蟾毒靈聯(lián)合吉非替尼對肺癌細胞H1975的影響及機制研究[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（8）：1081-1085.

[3] 王亞麗，牟曉燕，游力，等. 吉非替尼對肺腺癌細胞增殖和表皮生長因子受體表達的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2010，30（6）：805-808.

[4] 周曉，王偉，戴捷，等. 順鉑與氟尿嘧啶聯(lián)合化療對腹壁皮瓣的影響[J]. 組織工程與重建外科雜志，2011，6（14）：109-110.

[5] 陳智偉，虞永峰，李子明，等. 吉非替尼和西妥昔單抗聯(lián)合治療非小細胞肺癌的體外實驗研究[J]. 中國癌癥雜志，2010，20（4）：275-280.

[6] 陶顯東，鐘鐳，薛磊，等. 載順鉑的納米羥基磷灰石對A549肺腺癌細胞體外脹亡的影響[J]. 組織工程與重建外科雜志， 2012，1（15）：121-122.

[7] 馬麗，韓曉紅，王帥，等. 鹽酸埃克替尼對肺癌細胞增殖和凋亡的影響[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（36）：2561-2564.

[8] 玄香蘭，周彩存，安昌善，等. 不同用藥順序吉非替尼、多西他賽聯(lián)用對非小細胞肺癌細胞的體外抑制作用[J]. 山東醫(yī)藥，2012，52（17）：32-34.

[9] 溫瑩浩，林小小，錢海華，等. 索拉非尼聯(lián)合吉非替尼對人肺癌細胞株A549的生長抑制作用[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2013， 34（12）：1826-1829.

[10] 魏超，周乃珍，郭慧，等. 不同序貫的吉非替尼與化療藥物聯(lián)合對人肝癌細胞Bel-7402增殖的抑制作用[J]. 安徽師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2011，34（3）：265-268.

（收稿日期：2014-02-28）

2結(jié)果

2.1單藥組和聯(lián)合用藥組對肺癌細胞生長的抑制作用

不同濃度的吉非替尼、奧曲肽、順鉑、5-FU單獨應(yīng)用對肺癌細胞的增殖均起到抑制作用，聯(lián)合用藥組的抑制率明顯高于單用組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。其中單藥組的肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株培育48 h后的IC50為20 mg/L左右，并呈劑量依賴性（P<0.01），聯(lián)合用藥組IC50明顯低于單獨用藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.2三組對肺癌敏感A549、耐藥A549/GR細胞株凋亡的影響

通過流式細胞儀檢測對照組、單藥組、聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)肺癌敏感A549細胞株后，三組之間凋亡率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。誘導(dǎo)肺癌耐藥A549/GR細胞株后，對照組、單藥組、聯(lián)用組之間凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3討論

近年來，在種類眾多的治癌藥物中，順鉑作用似烷化劑，與多種抗腫瘤藥有協(xié)同作用、且無交叉耐藥等特點，作為當(dāng)前聯(lián)合化療中最常用的藥物之一，應(yīng)用廣泛，但因其又對腎功能有損害、嚴重骨髓抑制的副作用，讓人很擔(dān)憂。5-FU對消化系統(tǒng)癌（食管癌、胃癌、腸癌、胰腺癌、肝癌）和乳腺癌療效較好，對宮頸癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤也有效，但同樣有嚴重的骨髓抑制副作用。所以近些年來，吉非替尼被認為是治療非小細胞肺癌的首先藥物，由各國研究人員對其治療效果進行了臨床試驗，同時也對不同的腫瘤細胞進行了各種嘗試，被證實其對多種腫瘤細胞的增長均能起到抑制作用[6]。王亞麗等[3]研究發(fā)現(xiàn)，吉非替尼可抑制肺腺癌細胞的增殖，并且能夠影響表皮生長因子受體的表達，從而起到治療的作用。然而有部分學(xué)者認為吉非替尼的作用效果還存在進一步研究的價值，有報道稱，通過吉非替尼治療晚期肝癌的臨床效果并不顯著，并且在多數(shù)小細胞肺癌中也為達到令人滿意的效果[7]，所以，有必要進行吉非替尼與傳統(tǒng)化療藥物的聯(lián)合應(yīng)用，對其是否能增強治療效果進行探討。

有報道稱吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合作用可有效延長肺腺癌的一年內(nèi)無進展生存率和中位生存期，所以確定最佳的聯(lián)合方案必須通過大量的研究才能應(yīng)用于臨床[8]。溫瑩浩等[9]索拉非尼與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用于人肺癌細胞株A549研究，結(jié)果顯示，兩藥聯(lián)合能夠有效抑制人肺癌細胞株A549的生長。陳智偉等[5]研采用CCK8法檢測人肺癌細胞A549、H460、H1299、SPC-A、95C、95D對于吉非替尼與西妥昔單抗的IC50，并以流式細胞技術(shù)進行細胞凋亡監(jiān)測，結(jié)果顯示，1 nmol/L吉非替尼與5 μmol/L西妥昔單抗對于A549細胞的生長抑制率約為30%和40%，而將兩者聯(lián)合應(yīng)用時，抑制率可提高至50%以上；兩藥單獨應(yīng)用時，A549細胞遷移降低率分別為18%、22%，兩藥聯(lián)合應(yīng)用時，細胞遷移降低率為35%。由此可見，將吉非替尼與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用可能具有協(xié)同作用，有望提高藥物對于肺癌細胞生長及遷移的抑制作用，可能對于肺癌的治療具有較大潛力。本次研究結(jié)果顯示，在體外肺癌細胞試驗中，吉非替尼單用組與奧曲肽單用組對細胞增長均起到抑制作用，并且具有濃度依賴性的特點，隨著濃度的增加抑制率也逐漸增強，當(dāng)奧曲肽濃度超過50 mg/L以上后，抑制率未進一步增加，可能是肺癌A549細胞達到飽和狀態(tài)，這種情況在其他研究中也有類似現(xiàn)象[10]。當(dāng)吉非替尼與奧曲肽聯(lián)合應(yīng)用時抑制率明顯高于單獨用藥，因此表明兩種藥物具有協(xié)同抑制作用，可增加藥物的敏感性，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制DNA的合成，從而提高化療效果。同時本次研究結(jié)果顯示，吉非替尼組的凋亡率與奧曲肽組相比差異不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但是對照組、單藥組、聯(lián)用組之間差異較明顯（P<0.05），A549細胞的凋亡率顯著升高，說明聯(lián)合用藥對細胞的增生具有協(xié)同抑制作用，可促進細胞凋亡，增加治療效果。研究結(jié)果中，聯(lián)合用藥組IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8）mg/L低于兩組單獨用藥組（20.1±1.2）、（20.3±1.4）mg/L，說明聯(lián)合用藥對治療其他肺癌也具有一定的療效，敏感A549與耐藥A549/GR肺癌細胞株間對肺癌A549的治療效果不影響。

總之，吉非替尼聯(lián)合用藥可增強對細胞的抑制作用，將其與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用于肺癌的治療具有良好療效。

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（收稿日期：2014-02-28）