乳腺癌組織中VEGF、bFGF表達(dá)變化及其與微血管密度的關(guān)系

沈 葉，盛友華，馮一中

(1上海市第六人民醫(yī)院南院奉賢區(qū)中心醫(yī)院，上海201499;2蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡不斷趨于年輕化［1］。大量研究已證實，腫瘤組織內(nèi)新血管的生成是腫瘤生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要影響因素［2］，而血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是最重要的血管生成正性調(diào)控因子［3，4］，在多種實體腫瘤中有高表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、預(yù)后密切相關(guān)［5］。腫瘤微血管密度(MVD)是特定腫瘤區(qū)域微血管計數(shù)，現(xiàn)已被視為生物學(xué)侵襲性、轉(zhuǎn)移潛能的判定指標(biāo)，其中以血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34的抗原敏感性最高，但關(guān)于乳腺癌血管生成活性與MVD關(guān)系的報道較少。本研究通過檢測乳腺癌組織中VEGF、bFGF、CD34的表達(dá)，探討其與MVD的關(guān)系，為乳腺癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 上海市交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院奉賢區(qū)中心醫(yī)院2009年1月～2012年12月手術(shù)切除且臨床資料齊全的乳腺癌組織標(biāo)本75例(觀察組)，均經(jīng)手術(shù)及組織病理學(xué)確診，術(shù)前均未行放、化療?；颊呔鶠榕裕挲g39～76(54.7±6.1)歲;AJCC分期:Ⅰ期26例，Ⅱ期20例，Ⅲ期24例，Ⅳ期5例;病理分型:浸潤性導(dǎo)管癌42例，導(dǎo)管內(nèi)癌21例，浸潤性小葉癌12例。另取我院同期收治的20例女性乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為對照組，兩組年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組化SP法。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，制成厚4 μm的切片;常規(guī)脫蠟、水化、0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復(fù)?？谷薭FGF單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術(shù)公司，抗人 VEGF、CD34、bFGF單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒均購自上海森雄科技實業(yè)有限公司;均采用試劑盒已知陽性組織作為陽性對照，以PBS代替一抗體作為陰性對照。bFGF、VEGF的判定標(biāo)準(zhǔn):隨機選擇10個高倍鏡視野(×400)計數(shù)1 000個腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。采用許良中等［6］的計分方法對陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及染色程度進行計分，兩項積分乘積≥3為陽性。MVD計數(shù):CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞核，呈棕黃色，胞質(zhì)可見棕黃色顆粒，參照Weidner［7］的方法，計算 MVD 值。

1.2.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，比較采用t檢驗或方差分析;計數(shù)資料以率或百分比表示，比較采用χ2檢驗;相關(guān)性用配對資料的關(guān)聯(lián)分析，用Spearman秩相關(guān)系數(shù)表示。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組VEGF、bFGF蛋白表達(dá)及MVD比較 觀察組VEGF、bFGF蛋白陽性表達(dá)率分別為72.0%、69.3%，MVD 為(33.81±10.95)條/HP;對照組分別為 20.0%、25.0%、(17.41±6.04)條/HP，P 均 ＜0.05。

2.2 觀察組VEGF、bFGF表達(dá)及MVD與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VEGF、bFGF表達(dá)及MVD均與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)，且VEGF與腫瘤直徑有關(guān)(P ＜0.05)。

表1 VEGF、bFGF及MVD與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4 觀察組VEGF、bFGF表達(dá)與MVD的關(guān)系 乳腺癌患者組織中VEGF、bFGF表達(dá)與MVD均呈正相關(guān)(r分別為 0.687、0.573，P 均 ＜0.05)。

3 討論

乳腺癌的生長、轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，其中腫瘤組織內(nèi)新生血管的生成是較為重要的影響因素。研究認(rèn)為，當(dāng)腫瘤直徑＞2 mm時，逐步進入血管化期，腫瘤病灶將局部迅速擴散，其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力也大大增強［8，9］。腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)血管生成的潛能，需經(jīng)生長因子的刺激才能轉(zhuǎn)變?yōu)榘l(fā)揮作用的表型，其中以VEGF、bFGF對腫瘤血管生成的調(diào)控占據(jù)主導(dǎo)地位［10］。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中VEGF、bFGF陽性表達(dá)率及MVD計數(shù)顯著高于乳腺腺瘤組織。其機制可能是VEGF、bFGF促進腫瘤血管生成，導(dǎo)致腫瘤組織血管數(shù)量及血管通透性增加，促進血管內(nèi)物質(zhì)外滲，腫瘤細(xì)胞所需氧和營養(yǎng)物質(zhì)更加充分［11］。進一步分析發(fā)現(xiàn)，乳腺癌腫瘤組織中VEGF、bFGF陽性表達(dá)率及MVD計數(shù)隨腫瘤直徑的增大、TNM臨床分期增高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增高，說明其對判斷乳腺癌的惡性程度、浸潤及轉(zhuǎn)移具有重要價值。

目前，關(guān)于惡性腫瘤VEGF、bFGF表達(dá)與MVD的相關(guān)性仍存在爭議。研究認(rèn)為，VEGF表達(dá)越高的結(jié)腸癌MVD也越高，且伴轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌VEGF及其受體的表達(dá)水平高于未轉(zhuǎn)移者;但亦有學(xué)者指出，卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等的MVD計數(shù)與其組織學(xué)分型、分化程度無關(guān)。本組資料中，乳腺癌組織中VEGF、bFGF表達(dá)均與MVD計數(shù)呈正相關(guān)。VEGF、bFGF過度表達(dá)促進血管再生，進而產(chǎn)生大量結(jié)構(gòu)與功能異常的腫瘤血管，最終導(dǎo)致MVD增加。這表明腫瘤血管新生是一個多因素共同參與的復(fù)雜過程，各個因素相互協(xié)同作用，為乳腺癌腫瘤細(xì)胞的侵襲性生長提供了條件。

綜上所述，乳腺癌患者癌組織中VEGF、bFGF呈過度表達(dá)，且與MVD計數(shù)呈正相關(guān)，共同參與了乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的過程，有望成為乳腺癌抗血管生成治療的重要生物靶點。

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