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    微衛(wèi)星不穩(wěn)定性,EGFR蛋白,P53蛋白的表達(dá)與大腸癌的臨床病理特征關(guān)系的相關(guān)性

    2022-03-18 00:27:10郝鵬巖吳勇劉曉梅張鏑李文杰
    健康體檢與管理 2022年1期
    關(guān)鍵詞:大腸癌

    郝鵬巖 吳勇 劉曉梅 張鏑 李文杰

    【摘要】目的:探討大腸癌中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)狀態(tài),EGFR蛋白及P53蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。方法:應(yīng)用免疫組化方法,檢測(cè)90例大腸癌組織中MSI蛋白(MLH1蛋白,PMS2蛋白,MSH2蛋白,MSH6蛋白)、EGFR蛋白及P53蛋白表達(dá)狀態(tài),檢測(cè)MSI基因體系及胚系突變情況,分析不同臨床病理特征的關(guān)系。

    結(jié)果:在90例大腸癌組織中,免疫組化檢測(cè)出微衛(wèi)星不穩(wěn)定共16例,占比17.8%,基因檢測(cè)出微衛(wèi)星不穩(wěn)定體系突變6例,占比6.7%,其中體系與胚系均突變1例,占比1.1%。免疫組化結(jié)果顯示:腺癌伴粘液腺癌成分共15例,微衛(wèi)星不穩(wěn)定6例,占比40%,高于腺癌占比13.3%(P=0.014)。右半結(jié)腸癌共21例,微衛(wèi)星不穩(wěn)定7例,占比33.3%,高于左半結(jié)腸癌占比13.0%(P=0.033)。

    免疫組化檢測(cè)出EGFR陽(yáng)性共49例,占比54.4%。其中,年齡大于67歲者46例,EGFR陽(yáng)性30例,占比65.2%,高于年齡小于66歲者占比43.2%(P=0.036);腫瘤最長(zhǎng)徑小于4.7cm者共42例,EGFR陽(yáng)性34例,占比81%,高于腫瘤最長(zhǎng)徑大于4.7cm者占比31%(P=0.000).

    免疫組化檢測(cè)出P53突變共59例,占比65.6%。其中,淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移者55例,P53突變41例,占比74.5%,高于淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者占比51.4%(P=0.024)。

    結(jié)論:在大腸癌組織中,微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與癌癥類型及部位相關(guān),EGFR蛋白表達(dá)與患者年齡及腫瘤大小相關(guān),P53蛋白與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此,MLH1、PMS2、MSH2、MSH6、EGFR、P53聯(lián)合篩查可以為靶向治療提供用藥指導(dǎo),可以提高患者的生存預(yù)期。

    【關(guān)鍵詞】大腸癌;微衛(wèi)星不穩(wěn)定;MMR;EGFR;P53

    研究背景:

    大腸癌是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。隨著政府對(duì)大腸癌篩查的重視,腸鏡的應(yīng)用,使很多大腸癌能夠做到早發(fā)現(xiàn),早治療。但隨著人們生活習(xí)慣的改變,發(fā)病率仍呈現(xiàn)上升化、年輕化趨勢(shì)。目前大腸癌多采取以手術(shù)為主,放、化療為輔的綜合治療手段。雖然部分患者可以通過(guò)免疫療法或靶向治療獲益,但大腸癌患者的死亡率和發(fā)病率仍然呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),5年生存率僅在50%左右,疾病防控形式仍然嚴(yán)峻。

    林奇綜合征是由四種錯(cuò)配修復(fù)基因(MLH1,MSH2, MSH6, PMS2)突變引起的,會(huì)增加患癌癥的風(fēng)險(xiǎn),尤其是結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜癌。錯(cuò)配修復(fù)基因是造成微衛(wèi)星不穩(wěn)定的主要因素,也就是說(shuō)是由于錯(cuò)配修復(fù)蛋白( Mismatch repair? MMR) 的表達(dá)缺失造成的。確認(rèn)林奇綜合癥攜帶者能預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)癌癥,并且對(duì)高危親屬的進(jìn)行體檢;可以改善疾病的預(yù)后,降低醫(yī)療成本。

    表皮生長(zhǎng)因子受體( EGFR) 屬于受體酪氨酸激酶HER/erbB。EGFR參與細(xì)胞損傷修復(fù)、介導(dǎo)細(xì)胞黏附、侵襲、遷移、生存、分化以及激活重要的細(xì)胞信號(hào)通路等。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示,EGFR 的過(guò)表達(dá)與多種實(shí)體瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)。

    p53的研究較多, 是迄今發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤關(guān)系最密切最常見(jiàn)的突變基因。 p53 基因在大腸癌中突變率高達(dá)70 %。因此檢測(cè)P53基因突變,并能改善p53 基因的功能對(duì)治療結(jié)腸癌尤為重要。Rayburn 等 研究發(fā)現(xiàn), 通過(guò)改善p53 的功能,TLR9( tol1-1ike receptor 9) 激動(dòng)劑可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡, 增加癌細(xì)胞對(duì)放、化療的敏感性。

    本研究通過(guò)免疫組化SP方法研究MMR蛋白質(zhì)的表達(dá),EGFR蛋白及P53蛋白表達(dá),MSI基因體系及胚系突變情況,并分析其表達(dá)情況與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系。希望可以找到該蛋白是如何影響大腸癌的發(fā)病及在不同部位大腸癌中的表達(dá)意義。

    材料與方法:

    研究對(duì)象:本研究得到了中美醫(yī)院道德倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。選取2018 年1月至2020 年12月在京東中美醫(yī)院手術(shù)的大腸癌患者90 例。納入標(biāo)準(zhǔn): 病理診斷證實(shí)為原發(fā)性大腸癌,術(shù)前未接受任何放化療等治療,臨床病理資料完整,均自愿參加并簽署知情同意書。大腸癌患者中男性47 例,女性43 例,年齡中位數(shù)為66歲,平均腫瘤直徑(4.7±1.77) cm; 腫瘤部位: 左半結(jié)腸69 例,右半結(jié)腸21 例; 臨床分期: Ⅰ期18 例,Ⅱ期35 例,Ⅲ期33 例,Ⅳ期4例; 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35 例,組織學(xué)分化: 低分化15 例,中分化44 例,高分化31 例。腺癌伴粘液腺癌成分15例。所有患者的組織樣本,均經(jīng)10% 的甲醛溶液固定,制成石蠟包埋切片。

    MMR基因檢測(cè):取患者癌組織(腫瘤成分在80%以上)及癌旁5cm處正常黏膜,常規(guī)切片8μm厚10張,送往北京基石醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)內(nèi)容:NR21、Bat26、NR27、Bat25、NR24、Mono27、Penta C、Penta D、Amelogenin 。檢測(cè)方法:多重?zé)晒釶CR—毛細(xì)管電泳。檢測(cè)設(shè)備:ABI 3730xl型遺傳分析儀。按照NCI對(duì)腫瘤MSI的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀,有2個(gè)及以上改變?yōu)楦叨任⑿l(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability-high,MSI-H),1 個(gè)改變?yōu)榈投任⑿l(wèi)星不穩(wěn)定性(m i c ro s ate l l i teins tabi l i ty- l ow,MSI -L),無(wú)改變?yōu)槲⑿l(wèi)星穩(wěn)定(microsatellite stable,MSS)。

    免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白(m i sma t c h r e p a i r p r o t e i n ,MMR)MLH1,PMS2,MSH2,MSH6表達(dá)。腫瘤旁正常組織為正常內(nèi)陽(yáng)性對(duì)照。MMR蛋白缺失表現(xiàn)為腫瘤組織核表達(dá)陰性,而腫瘤旁正常結(jié)腸黏膜上皮及淋巴細(xì)胞核陽(yáng)性。當(dāng)任何1 個(gè)蛋白表達(dá)缺失即定義為錯(cuò)配修復(fù)蛋白功能缺陷(MMR defi c i ent,dMMR)。均陽(yáng)性則為錯(cuò)配修復(fù)蛋白功能正常( M M R proficient,pMMR)(表1)。

    免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)EGFR蛋白表達(dá)。EGFR定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。計(jì)算EGFR時(shí)均根據(jù)染色強(qiáng)度以及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),判斷依據(jù)則可以將其得分作為參照。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn): 1 分( ≤25%) ;2 分( 26% ~ 50%) ; 3 分( 51% ~ 74%) ; 4 分( ≥75%) 。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn): 1 分( 淡棕色) ; 2 分( 棕黃色) ; 3 分( 棕褐色) 。綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn): 0 ~ 1 分( - ) ; 2 ~3 分( + ) ; 4 ~ 5 分( + + ) ; 6 ~ 7 分( + + + ) ,其中+~ + + + 為陽(yáng)性(表2)。

    免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)P53蛋白表達(dá)。p53蛋白表達(dá)于細(xì)胞核,腫瘤組織75%以上核彌漫強(qiáng)陽(yáng)性或<5%染色或全陰性,則為p53突變型,5%~75%強(qiáng)弱不等陽(yáng)性表達(dá)為p53蛋白野生型(表3)。

    所有免疫組化結(jié)果均由兩名主治級(jí)別以上醫(yī)師分別進(jìn)行判讀,后采用平均數(shù)。以上所有免疫組化抗體及試劑均購(gòu)自河南賽諾特生物技術(shù)有限公司,并嚴(yán)格按照試劑盒要求步驟進(jìn)行檢測(cè)。

    結(jié)果:

    在大腸癌腫瘤組織中MMR、EGFR、P53蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示,dMMR16例,占比17.8%,EGFR陽(yáng)性49例,占比54.4%,P53陽(yáng)性59例,占比65.6%。

    大腸癌臨床病理特征與MMR、EGFR、P53蛋白表達(dá)的關(guān)系。腺癌伴粘液腺癌成的腫瘤以及腫瘤部位與dMMR有明顯關(guān)系,年齡以及腫瘤大小與EGFR蛋白表達(dá)有明顯關(guān)系,腫瘤轉(zhuǎn)移情況與P53蛋白表達(dá)有明顯關(guān)系。具體情況見(jiàn)表1。

    MMR基因檢測(cè)結(jié)果顯示,微衛(wèi)星不穩(wěn)定6例,占比6.7%。其中體系與胚系均突變者1例,占比1.1%,根據(jù)臨床病史,其父親也為大腸癌患者,可以明確診斷為林奇綜合征。

    討論:

    河北省廊坊市三河市、香河縣和大廠回族自治區(qū)地理位置緊鄰北京市,位于北京市東側(cè),俗稱北三縣。由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展,近10年來(lái),北三縣外來(lái)人口增多,導(dǎo)致本地人口占比不足十分之一。往來(lái)北京市通勤的人口大約有30萬(wàn)左右。隨著人口遷徙,生活習(xí)慣的改變,目前當(dāng)?shù)卮竽c癌的發(fā)病是否受到影響,目前尚未有人研究。

    有的研究表明,在大腸癌的標(biāo)本中,EGFR的表達(dá)占比達(dá)61%,本研究EGFR的表達(dá)占比54.4%,無(wú)明顯差異。EGFR的過(guò)表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,本研究顯示在部分大腸癌患者中,隨著年齡的增長(zhǎng),EGFR的過(guò)表達(dá)率升高,說(shuō)明年齡是腫瘤轉(zhuǎn)移的高風(fēng)險(xiǎn)因素。腫瘤直徑越小,EGFR的過(guò)表達(dá)率越高,說(shuō)明腫瘤在發(fā)生的早期階段,轉(zhuǎn)移性和侵襲性會(huì)增高。

    有研究表明,在大腸癌的標(biāo)本中,dMMR占比約為16%。本研究顯示dMMR占比17.8%,無(wú)明顯差異。在腺癌伴粘液腺癌的大腸癌標(biāo)本及右半結(jié)腸癌中,dMMR的表達(dá)率明顯增高。免疫組化表達(dá)出的dMMR,比基因檢測(cè)出的dMMR比例高,說(shuō)明有些基因未出現(xiàn)突變,但蛋白質(zhì)表達(dá)被沉默了。其對(duì)大腸癌的發(fā)病影響是否一致,對(duì)靶向治療是否有影響,有待進(jìn)一步研究。

    本研究顯示P53的突變率為65.6%,接近70%,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的突變率增高,說(shuō)明P53不僅在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用,有可能在癌癥的轉(zhuǎn)移中也起到某些作用,有待進(jìn)一步研究。

    總之,MLH1,PMS2,MSH2,MSH6,EGFR 及P53蛋白的表達(dá)與大腸癌的轉(zhuǎn)移、生長(zhǎng)、侵襲都有著較大關(guān)聯(lián),因此,微衛(wèi)星不穩(wěn)定四項(xiàng)蛋白質(zhì),EGFR及P53三者的聯(lián)合篩查可以為靶向治療提供用藥指導(dǎo),有利于高?;颊叩脑缙谂袛啵欣诨颊哳A(yù)后的判斷。

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