電針“三陰交穴”調(diào)節(jié)自然圍絕經(jīng)期大鼠雌激素及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的實驗研究

彭曉濤，徐玲，李由，程凱

（北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京 100029）

·基礎(chǔ)研究·

電針“三陰交穴”調(diào)節(jié)自然圍絕經(jīng)期大鼠雌激素及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的實驗研究

彭曉濤，徐玲，李由，程凱

（北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京 100029）

目的研究電針“三陰交穴”對自然圍絕經(jīng)期大鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。方法將大鼠分為正常組、模型組與電針組，電針組大鼠在三陰交處進行電針，隔日1次，共治療15次。其他兩組大鼠進行常規(guī)飼養(yǎng)，不進行針刺，隔日抓取。酶免方法（Elisa）檢測大鼠卵巢雌二醇（E2）水平和海馬部位的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量。結(jié)果Elisa結(jié)果提示，與正常組比較，模型組大鼠卵巢E2含量降低了59.17%（P＜0.01）。與模型組比較，治療組大鼠卵巢E2含量顯著增高了65.49%（P＜0.01），但仍未恢復至正常水平（P＜0.01）。中樞神經(jīng)遞質(zhì)的結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組大鼠海馬區(qū)五羥色胺（5-HT）含量升高了34.35%，NE、DA分別下降了33.86%和34.38%（P＜0.01）。與模型組比較，治療組大鼠5-HT含量明顯降低了11.13%（P＜0.05），NE顯著上調(diào)了19.18%（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。治療組DA含量雖升高了7.59%，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組的5-HT／NE的比值顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，治療組的5-HT／NE的比值顯著降低了23.47%（P＜0.01）。結(jié)論電針“三陰交”穴可以調(diào)節(jié)自然圍絕經(jīng)期大鼠的性激素水平及中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的水平。

圍絕經(jīng)期；電針；穴，三陰交，血清素；雌二醇；大鼠，Sprague-Dawley

圍絕經(jīng)期綜合征過往有“更年期綜合征”之稱，研究發(fā)現(xiàn)該病的產(chǎn)生與中樞的神經(jīng)遞質(zhì)紊亂關(guān)系密切［1-2］。西醫(yī)治療一般將雌激素替代療法（hHRT）作為首選方法來延緩卵巢衰老，進而達到防治圍絕經(jīng)期綜合征的目的［3］。但近年來關(guān)于替代療法多種副作用的報道越來越多［4-6］，人們開始尋求安全有效的治療方法。針灸作為傳統(tǒng)中醫(yī)療法，在治療圍絕經(jīng)期綜合征方面，療效顯著，副作用?。?］，逐漸在國際上備受重視，尤其是針刺三陰交具有確切的臨床療效［8-9］。本實驗選取自然圍絕經(jīng)期大鼠模型作為研究的對象，通過電針療法探討雌激素與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在針刺治療圍絕經(jīng)期綜合征中作用規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級3月齡Sprague-Daw ley（SD）大鼠8只，體質(zhì)量（220±20）g；清潔級11～15月齡SD大鼠32只，體質(zhì)量（320±20）g。皆購于北京維通利華動物中心［SCXK（京）2012-0001］。動物置于清潔柜，實驗室內(nèi)溫度保持（20±2）℃，濕度是65%，并且12 h光暗周期，自由攝食與飲水。

1.2 自然圍絕經(jīng)期大鼠模型的建立 據(jù)文獻方法［10］，11～15月齡雌性SD大鼠性激素水平、子宮、等機體病理生理與婦女圍絕經(jīng)期相似，提示已進入圍絕經(jīng)期。故我們選擇11～15月齡雌性SD大鼠為本實驗的動物模型。本課題前期利用該模型通過陰道涂片法［11］即每日定時用堿性美藍溶液給11～15月齡SD雌性大鼠的陰道涂片染色，并觀察其在顯微鏡下組織學的變化，連續(xù)觀察3個動情周期即15日，根據(jù)細胞形態(tài)、種類和數(shù)量來進行篩選，鏡下觀察大鼠陰道涂片沒有成熟的脫落細胞，結(jié)果該模型符合圍絕經(jīng)期變化規(guī)律。

1.3 動物分組與治療 從32只11～15月齡大鼠中篩選陰道脫落細胞涂片結(jié)果圍絕經(jīng)期特征符合者16只，根據(jù)隨機數(shù)字表法分為：模型對照組（模型組）8只和電針治療組（治療組）8只。另將3月齡大鼠8只作為青年對照組（正常組），共3組。在處理后第31天的上午，統(tǒng)一取材，取材前12 h禁食。正常組和模型組大鼠不給予任何治療。治療組大鼠給予電針三陰交治療。根據(jù)林文注主編的《實驗針灸學》教材，定位三陰交位于后肢內(nèi)踝尖直上10 mm。直刺3 mm，進行電針刺激，采用疏密波，頻率2／100 Hz，強度以針柄輕微抖動為宜，每次留針20 min。隔日1次，共計15次。

1.4 雌二醇、5-HT、NE、DA含量測定 雌二醇酶免試劑盒：武漢華美公司。五羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）的標準品均為Sigma公司產(chǎn)品，甲醇（色譜純，F(xiàn)isher Scientific），二正丁胺（BAS進口分裝，上?；瘜W試劑），B8離子對試劑（天津化學試劑二廠），高氯酸（HCLO4，國產(chǎn)分析純），乙酸鈉、檸檬酸、乙二胺四乙酸鈉（國產(chǎn)分析純）。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0的軟件進行統(tǒng)計分析，兩組以上計量資料進行單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 電針三陰交對自然圍絕經(jīng)期大鼠卵巢中E2的含量的調(diào)節(jié) 與正常組［（162.40±49.90）pmol／L］比較，模型組卵巢E2的含量明顯降低了59.17%［（66.30±21.19）pmol／L，P＜0.01］，與模型組比較，治療組的卵巢E2含量［（109.72 ±47.39）pmol／L］顯著增高了65.49%（P＜0.01），但仍未恢復至正常水平（P＜0.01）。

2.2 電針三陰交對自然圍絕經(jīng)期大鼠海馬5-HT、NE、DA的含量及5-HT／NE的影響 與正常組比較，模型組的5-HT含量升高了34.35%，NE、DA分別下降了33.86%和34.38%（P＜0.01）。與模型組比較，治療組大鼠5-HT含量明顯降低了11.13%（P＜0.05），NE顯著上調(diào)了19.18%（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。治療組DA含量雖升高了7.59%，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組的5-HT／NE的比值顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，治療組的5-HT／NE的比值顯著降低了23.47%（P＜0.01），見表1。

表1 各組海馬中5-HT、NE、DA的比較（s，ng／g）

表1 各組海馬中5-HT、NE、DA的比較（s，ng／g）

注：與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05，cP＜0.01

5-HT NE DA 5-HT／NE正常組8 451.25±51.67 134.00±19.57 75.25±23.40 3.4組別鼠數(shù)（只）3±0.63模型組8 606.25±71.50a88.63±8.73a49.38±17.82a6.86±0.68a治療組8 538.75±30.44b105.63±13.10b53.13±10.10 5.25±0.76c

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征中醫(yī)稱為“絕經(jīng)前后諸癥”范疇，歷代文獻關(guān)于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中［12］。其病機主要為腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，臟腑氣血功能失調(diào)。三陰交是足太陰脾經(jīng)經(jīng)穴，又是足太陰、足厥陰、足少陰三條經(jīng)脈的交會穴，具有補脾胃，助運化，化濁利濕，通經(jīng)活絡(luò)，調(diào)和氣血，滋補肝腎之功效，且婦女的生理特點與肝脾腎三臟關(guān)系密切，因此三陰交穴在治療婦科病癥方面有著獨特的優(yōu)勢，常作為婦科疾病的首選穴位。

圍絕經(jīng)期綜合征的主要表現(xiàn)以植物神經(jīng)功能紊亂為主。絕經(jīng)后雌激素的水平下降，會影響腦部大腦皮層和下丘腦的神經(jīng)活動，進而導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)諸如NE、DA、5-HT以及阿片肽等的活性下降［13］。中樞神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，在正常情況下，應(yīng)保持在一定的水平，而且遞質(zhì)間的比例需相互協(xié)調(diào)以維持功能的穩(wěn)定。我們發(fā)現(xiàn)模型組大鼠海馬中NE和DA較正常組明顯下降（P＜0.01），5-HT的含量異常升高，進而使5-HT／NE的比值上升，破壞了的正常生理環(huán)境，最終導致出現(xiàn)潮熱、盜汗、抑郁、焦慮等臨床癥狀。本實驗通過電針三陰交穴可提高模型組大鼠海馬中下降的NE含量，降低異常升高的5-HT水平（P＜0.05），從而使5-HT／NE的比值向正常值接近。說明電針三陰交穴可以有效糾正圍絕經(jīng)期大鼠中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)紊亂的作用，進而緩解圍絕經(jīng)期綜合征的臨床癥狀。

同時，本實驗結(jié)果顯示，模型組的E2水平明顯低于正常組，說明自然圍絕經(jīng)期模型大鼠卵巢中雌激素水平明顯降低，比較符合相關(guān)文獻所報道的圍絕經(jīng)期大鼠模型的性激素水平。而作為主要由卵巢和腎上腺分泌的雌激素E2，它的缺乏是圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病的重要原因。針對出現(xiàn)的一系列癥狀，雌激素治療有效［14］。在本實驗中，治療組與模型組相比，E2水平明顯高于模型組（P＜0.01），說明電針三陰交可以升高E2含量，提示針刺對雌激素指標有一定的作用。

可見，本實驗針刺對大鼠神經(jīng)遞質(zhì)及內(nèi)分泌的改變均離不開神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)（NIM網(wǎng)絡(luò)）的整體性調(diào)節(jié)。經(jīng)前期綜合征（PMS）的發(fā)生發(fā)展與NIM網(wǎng)絡(luò)的平衡紊亂密切相關(guān)，NIM網(wǎng)絡(luò)理論指出，神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)無論在結(jié)構(gòu)上還是在功能上都有著密切的聯(lián)系。它們之間存在著一個多維立體網(wǎng)絡(luò)，由多種神經(jīng)遞質(zhì)、細胞因子與激素等相互作用與調(diào)節(jié)［15］，本實驗中由于雌激素也發(fā)生了有益的變化，提示可能是這些神經(jīng)遞質(zhì)的變化改變了NIM網(wǎng)絡(luò)的失衡狀態(tài)，引起了激素的變化，進而共同作用改善了圍絕經(jīng)期綜合征的相關(guān)癥狀，具體的機制尚待進一步證實。

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Experimental study on regulation of estrogen and monoam ine neurotransm itters in natural climacteric ratthrough electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂

PENGXiaotao，XU Ling，LIYou，CHENGKai（School of Acupuncture-moχibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Ob jective To investigate the effects of electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂on estrogen and monoamine neurotransmittersof natural menopausal rats.M ethods Rats were divided into normal group，model group and electroacupuncture group randomly.Electro acupuncture group ratswere acupunctured in Sanyinjiao for 15 therapies，each therapywas given once every other day.The rats inother two groupswere fed as themodel groupbut without acupuncture.ELISA method was applied to detect the levels of ovarian estradiol（E2）and monoamine neurotransmitters in hippocampus.ResultsCompared with the normal group，the concentrationof ovarianE2 in model grouprats decreased by 59.17%（P＜0.01）.After the treatmentof theelectro-acupuncture，the level of E2 was significantly increased by 65.49%（P＜0.01）compared with themodel group，but the levelwas not restored to the normal level（P＜0.01）.The central neurotransmitterResultsshowthat compared with the normal group，the content of 5-HT in hippocampus in themodel group rats increased by 34.35%.The levels of NE，DA were decreased by 33.86%and 34.38%respectively（P＜0.01）inmodel group rats.The content of5-HT in the treatmentgroup ratswere decreased by 11.13%（P＜0.05）compared with the model grouprats.However，NE was significantly up-regulated by19.18%（P＜0.05）at the same time.DA intreatment group ratswas increased by 7.59%，but had no statistical significancewith themodel group（P＞0.05）.Compared with the normal group，the ratio of 5-HT／NE in model group ratsincreased significantly（P＜0.01）.After the treatment of the electro-acupuncture，the ratio 5-HT／NE of the treatment group decreased significantly by23.47%（P＜0.01）.Conclusion Electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂point can regulate sex hormone levels andmonoamine neurotransmitter levels in the natural climacteric rats.

Perimenopause；Electroacupuncture；Point SP6；Serotonin；Estradiol；Rats，Sprague-Dawley

R711.51；R245.97

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.05.024

2014-07-29）

彭曉濤，醫(yī)師，Email：happypger＠163.com