花葉玉簪的組培技術(shù)的研究

張仁貴　張思露

摘要 [目的]研究花葉玉簪的組培技術(shù)。[方法]以花葉玉簪為研究對(duì)象，采用濃度75%的酒精進(jìn)行消毒，并以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6BA和NAA進(jìn)行增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)狀況。[結(jié)果]MS+4.0 mg/L 6BA +0.1 mg/L NAA增殖效果最好，苗生長(zhǎng)健壯。最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+ 0.1 mg/L NAA+0.3%活性炭；20 d后平均根長(zhǎng)可達(dá)3 cm，且根系比較粗壯，移栽后易成活。幼苗移栽時(shí)以蛭石

∶珍珠巖（5∶1，W/W）、泥炭土∶珍珠巖∶蛭石（3∶1∶1，W/W/W）或腐葉土∶蛭石（3∶1，W/W）的成活率較高，小苗生長(zhǎng)健壯。[結(jié)論]采用組培方法繁殖花葉玉簪，雖然具有繁殖系數(shù)高，時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞 花葉玉簪（Hosta undulata Bailey）；外植體；培養(yǎng)基；組培技術(shù)

中圖分類號(hào) S188 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）05-01302-02

Abstract [Objective] To study tissue culture of Hosta undulate. [Method] With H. undulate as study object， using 75% alcohol to conduct disinfection. With MS as basic culture medium， different concentration plant growth regulator 6BA and NAA were added to conduct proliferation and rooting culture. [Result] MS+4.0 mg/L 6BA +0.1 mg/L NAA has the best proliferation effect. The optimum rooting culture medium is 1/2MS+ 0.1 mg/L NAA+0.3% activated carbon； after 20 d， the average root length can up to 3 cm with stronger root system. The survival rate of vermiculite∶ pearlite （5∶1， W/W）， peat soil∶ pearlite∶ vermiculite （3∶1∶1， W/W/W） or rotten leaf soil∶ vermiculite （3∶1， W/W） is higher. [Conclusion] Adopting tissue culture for Hosta undulate has advantages of high propagation coefficient and short time.

Key words Hosta undulata Bailey； Explant； Medium； Tissue culture technology

花葉玉簪（Hosta undulata Bailey）為百合科（Liliaceae）宿根草本花卉，是近幾年從國外引進(jìn)的玉簪新品種。玉簪耐旱、耐寒且喜陰，常栽培于林下或建筑物北側(cè)，以提升園林工程的觀賞效果，是重要的觀葉、觀花的園林地被植物。除觀賞外，其花含芳香油，可提取制作芳香浸膏。此外，花葉玉簪還有清熱解毒、消毒止血、預(yù)防疾病和養(yǎng)生延壽等多種功效，是極具開發(fā)前景的藥用、綠化配景用植物。

花葉玉簪的繁殖方式有種子繁殖、分株繁殖和組織培養(yǎng)繁殖3種。玉簪從播種到開花至少需要3年，且種子繁殖的后代一般不能保持親本的優(yōu)良性狀，因此生產(chǎn)中一般不用種子繁殖。分株繁殖不僅需要大片的土地栽培母株，而且繁殖系數(shù)低，周期長(zhǎng)。采用組培方式繁殖不僅可以快速繁殖種苗，達(dá)到推廣新品種的目的，還能節(jié)約耕地，在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。筆者對(duì)花葉玉簪的組培技術(shù)進(jìn)行研究，以期為花葉玉簪的種質(zhì)栽培提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

研究對(duì)象。金邊玉簪和銀邊玉簪，由蘇州農(nóng)學(xué)院相城科技園組培室提供，經(jīng)鑒定為百合科（Liliaceae）宿根草本花卉。

1.1.2

主要試劑。所用試劑均為國產(chǎn)分析純，市售。

1.2 方法

1.2.1

花葉玉簪外植體的采集。選擇健壯，無病蟲害，具有繁殖品種典型性狀的花葉玉簪植株，取其植株基部當(dāng)年生的芽作為外植體。2、3月份是取材的最佳季節(jié)，春季是玉簪生長(zhǎng)開始的季節(jié)，此時(shí)體內(nèi)積累了較豐富的的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和內(nèi)源激素，接種后啟動(dòng)率高，而且污染率較低。晴天上午9～10點(diǎn)是最佳取材時(shí)間。

1.2.2

外植體的處理及消毒。將外植體表面的泥土等雜質(zhì)清洗干凈，并去除外部多余的葉片和根系，然后添加洗衣粉振蕩清洗，再用自來水沖洗2～3遍，最后用流水沖洗1 h。將初步洗滌及切割的外植體放入燒杯，帶入超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理。具體步驟如下：將處理過的外植體放入滅過菌的空瓶子中，然后用濃度為75%的酒精溶液浸泡1 min，再用無菌水沖洗2次，接著用濃度為0.1%的升汞溶液浸泡15～20 min，最后用無菌水清洗3～5次，每次5 min。注意浸泡過程中用無菌鑷子不斷攪動(dòng)，以去除殘留在外植體上的升汞。再用濾紙吸干水分，以備接種。在試驗(yàn)中對(duì)升汞的消毒時(shí)間對(duì)污染率的影響進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。

1.2.3

培養(yǎng)基的制備。試驗(yàn)采用的培養(yǎng)方式為固體培養(yǎng)，所用的基本培養(yǎng)基為MS，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為6BA和NAA，附加瓊脂粉8 g/L，蔗糖30 g/L。培養(yǎng)基采用200 ml的小口瓶分裝，每瓶分裝50 ml。

1.2.4

培養(yǎng)條件。溫度為（26±1）℃；光照為12 h/d；光照強(qiáng)度為2 500 lx；pH 5.8～6.0。用滅過菌的手術(shù)刀橫切去除上部葉片，留約0.5 cm長(zhǎng)，再將幼芽外部葉柄剝?nèi)?，然后將其切?.25 cm長(zhǎng)，最后將其正向插入MS+4.0 mg/L 6BA+0.1～0.2 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種1～2個(gè)外植體。

1.2.5

增殖培養(yǎng)。將初代得到的無菌苗，分別接種到幾種不同的培養(yǎng)基中，重點(diǎn)研究不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比對(duì)玉簪芽增殖的影響，以選擇出芽增殖效果最佳培養(yǎng)基。計(jì)算公式為：芽增殖系數(shù)=培養(yǎng)后芽數(shù)/接種時(shí)芽數(shù)。

1.2.6

生根培養(yǎng)。取生長(zhǎng)健壯的苗接種于3種不同濃度NAA的生根培養(yǎng)基中，研究不同濃度的NAA對(duì)苗生根情況的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 升汞的不同消毒時(shí)間對(duì)污染率的影響

由表1可知，升汞的消毒時(shí)間并不是越長(zhǎng)越好，只有最適宜的消毒時(shí)間才能取得最佳的消毒效果。

2.2 芽的增殖試驗(yàn)

由表2可知， 隨著6BA濃度的增加對(duì)芽的增殖有一定的促進(jìn)作用，但增至5 mg/L時(shí)則會(huì)抑制芽的增殖，且苗的生長(zhǎng)狀態(tài)開始惡化。綜合可得，MS+4.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA增殖效果最好，苗生長(zhǎng)健壯。增殖培養(yǎng)中，接種于較低濃度6BA和NAA配合使用的培養(yǎng)基中的幼苗，也出現(xiàn)了生根的現(xiàn)象?？梢娸^低濃度的6BA對(duì)苗的生根并沒有抑制作用，NAA在生根培養(yǎng)中起著關(guān)鍵作用。

2.4 馴化與移栽

當(dāng)生根幼苗長(zhǎng)度達(dá)4～7 cm的時(shí)候則可移栽，移栽前應(yīng)先將其移至常溫下適應(yīng)3～5 d，然后打開蓋子再適應(yīng)2～3 d，之后用鑷子或手指去除組培苗根部的基質(zhì)，用消毒水漂洗干凈，并去除無根，無心葉，畸形的苗，最后將洗好的苗攤放在苗床上以備移栽。

移栽應(yīng)在3～6月和9～11月為宜，移栽的基質(zhì)以蛭石∶珍珠巖（5∶1，W/W）、泥炭土∶珍珠巖∶蛭石（3∶1∶1，W/W/W）或腐葉土∶蛭石（3∶1，W/W）為好，移栽時(shí)用筷子等工具在穴盤上插孔，然后將苗的根系放入孔中覆土壓實(shí)。注意要淺栽，根系舒展，心葉要露于基質(zhì)之上，移栽后澆水，水量以使基質(zhì)充分濕潤(rùn)即可。

3 結(jié)論與討論

綜合以上分析可知，采用組培方法繁殖花葉玉簪，雖然具有繁殖系數(shù)高，時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，但也存在著污染嚴(yán)重，品種退化等問題。因此，在組培過程中，既要保證接種材料、培養(yǎng)基的無菌，接種室和培養(yǎng)室環(huán)境的良好，同時(shí)在操作過程中要時(shí)刻加強(qiáng)操作者的“無菌”意識(shí)。

試驗(yàn)以花葉玉簪的芽為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出的叢生芽幾乎沒有發(fā)生變異。以花序做外植體具有消毒容易，污染率低的優(yōu)點(diǎn)，但再生出的芽會(huì)發(fā)生性狀分離，不能夠保持其母本的優(yōu)良特性。所以，花葉玉簪組培快繁時(shí)最好采用芽作為外植體。試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+4.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA是最適宜芽增殖的培養(yǎng)基；1/2MS+0.1 mg/L NAA+0.3%活性炭是較好的生根培養(yǎng)基。幼苗移栽時(shí)以蛭石∶珍珠巖（5∶1，W/W）、泥炭土∶珍珠巖∶蛭石（3∶1∶1，W/W/W）或腐葉土∶蛭石（3∶1，W/W）的成活率較高，小苗生長(zhǎng)健壯。

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