新藥長毒試驗(yàn)動物血液生化檢驗(yàn)過程中的影響因素及解決對策

摘要血液生化指標(biāo)檢驗(yàn)是新藥長毒動物試驗(yàn)中一類常用的檢測技術(shù)，對于評價受試藥物對動物的安全性有重要意義。但在血液生化指標(biāo)檢驗(yàn)過程中常存在多種因素影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，可能導(dǎo)致藥物評價機(jī)構(gòu)對某些新藥毒理學(xué)性質(zhì)的誤判，甚至造成嚴(yán)重后果。對血液生化檢驗(yàn)中常見的影響因素進(jìn)行了總結(jié)，并制定了相關(guān)解決對策，以提升血液生化指標(biāo)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，為藥物的動物安全評價試驗(yàn)提供更為可靠的數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞藥物安全評價；血液生化檢驗(yàn)；影響因素；解決對策

中圖分類號S859文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）09-02611-02

作者簡介樊靜（1983- ），女，四川成都人，研究實(shí)習(xí)員，從事實(shí)驗(yàn)動物學(xué)的教學(xué)與研究工作。

在新藥研發(fā)過程中，藥物安全性評價是新藥研究開發(fā)的重要前提， 而長期毒性試驗(yàn)又是安全性評價試驗(yàn)中的重中之重[1]。長毒試驗(yàn)需要檢測的血液生化指標(biāo)包括：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)堿性磷酸酶移酶和總膽紅素等10余項指標(biāo)，是評判受試藥物對實(shí)驗(yàn)動物肝、腎等重要臟器功能損傷的重要指標(biāo)。生化指標(biāo)檢測的準(zhǔn)確性對于新藥的安全性評價至關(guān)重要，而采血、離心、保存及檢測等的各環(huán)節(jié)均可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[2]。

只有對采樣前后影響血液生化檢驗(yàn)的各種因素進(jìn)行有效控制，才能使檢測結(jié)果具有可靠的參考價值，如果血生化檢測結(jié)果不可靠，會導(dǎo)致人們對受試藥物的毒理學(xué)性質(zhì)造成誤判，甚至造成嚴(yán)重后果[3]。因此，筆者對從血樣采集到實(shí)驗(yàn)室檢查的各個環(huán)節(jié)中的影響因素進(jìn)行了總結(jié)，并制定了有效的解決方案，從而提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以更好地為新藥的安全性評價提供可靠的依據(jù)。

1血液生化檢驗(yàn)過程中的影響因素

1.1采血過程中的影響因素

1.1.1應(yīng)激。動物生理狀態(tài)受到年齡、性別、人員操作技術(shù)等因素的影響。例如，在動物的捉取和保定過程中動作粗魯、落地摔傷、用力過猛等操作不當(dāng)行為，則容易引起試驗(yàn)動物的應(yīng)激，造成血糖及乳酸的含量升高。

1.1.2飲食。采集血樣時，實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)處于空腹?fàn)顟B(tài)，喂食后食物中的色素、維生素等多種有效成分可能會對檢測結(jié)果造成干擾。喂食會增加血清中 ALT和AST等的水平。飼料中維生素C可使實(shí)驗(yàn)動物血中乳酸脫氫酶含量降低[4]。

1.1.3溶血。造成標(biāo)本溶血的因素有很多，包括采血針頭過細(xì)、抽吸用力過猛，劇烈振蕩試管或采血管負(fù)壓過大等均可造成血樣溶血。溶血標(biāo)本中堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和鉀離子等的含量會發(fā)生異常增高，對檢驗(yàn)結(jié)果造成影響[5]。

1.2保存與檢測中的影響因素

1.2.1血樣的保存。因?yàn)檠獦硬杉笪醇皶r進(jìn)行檢測，可引起血液中化學(xué)物質(zhì)的改變，甚至可能發(fā)生病原菌污染，因此采集血樣后應(yīng)及時進(jìn)行檢測[6]。

1.2.2處理不當(dāng)。血樣應(yīng)放置應(yīng)在恒定溫度的環(huán)境中，分離血清時應(yīng)在低溫離心機(jī)中進(jìn)行，氣溫過高等因素都有可能造成血清化學(xué)成分變化，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

1.2.3試劑盒選擇。試劑盒種類、保存方法、有效期及操作步驟等均可能對檢驗(yàn)結(jié)果造成影響，如試劑盒保存不當(dāng)或超過有效期等也可對檢驗(yàn)結(jié)果造成誤差。

1.2.4檢測儀器。血液生化檢驗(yàn)中一般使用全自動血生化分析儀進(jìn)行檢測，儀器的維護(hù)保養(yǎng)及工作狀態(tài)均對血生化指標(biāo)的檢測產(chǎn)生影響，如長時間未清洗造成污染、長時間未校準(zhǔn)等均可影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[7]。

2采取的解決對策

2.1血樣采集時的注意事項①要求試驗(yàn)動物采集血樣前禁食禁水。②防止動物在檢查前受到外界環(huán)境或人為的劇烈刺激，導(dǎo)致其受到驚嚇并避免劇烈的活動。這些因素均可導(dǎo)致應(yīng)激，引起體內(nèi)激素分泌過多，血液中化學(xué)成分發(fā)生變化，從而影響檢驗(yàn)結(jié)果[8]。③提高采血人員的靜脈穿刺操作水平，防止由于操作不當(dāng)而造成的溶血或凝血等影響血樣質(zhì)量的情況出現(xiàn)。④前壁頭靜脈采血時，避免結(jié)扎的止血帶過緊，結(jié)扎后1 min內(nèi)將穿刺工作完成，結(jié)扎太久會導(dǎo)致采血部位血液循環(huán)不良，血液中成分發(fā)生變化。⑤采取有效手段防止血樣發(fā)生溶血。按照操作規(guī)則合理使用抗凝劑，采樣前檢測抗凝劑的抗凝效果，及時淘汰抗凝效果不好的抗凝管；采血過程中輕輕搖動采血管，使血液與抗凝劑成分充分混合；盡量不要使用太細(xì)的針頭采血且在采血時操作要迅速，避免延遲，以免造成溶血；采血后禁止劇烈搖動采血管。另外，若發(fā)現(xiàn)采集的血樣出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，應(yīng)及時補(bǔ)采血樣[9]。

2.2血樣保存過程中的注意事項①采集的血樣應(yīng)盡快進(jìn)行檢測，避免因長時間放置血樣而造成微生物的污染或血樣內(nèi)化學(xué)物質(zhì)的變化。②對于未能及時檢測的血樣應(yīng)做好保存工作，可根據(jù)檢測的指標(biāo)及樣本情況進(jìn)行合理保存，通常的方法是分離血清后進(jìn)行保存，血液樣本以2 000～3 000 r/min，4 ℃離心下10 min，分離上層血清后先暫時保存在4 ℃冰箱中，檢測時再取出。樣本盡量當(dāng)天測完，特別是血糖、乳酸脫氫酶、肌酸激酶及其同工酶、尿酸、鉀離子等必須在當(dāng)日檢測完畢，否則存儲24 h 后血清生化指標(biāo)會受到明顯影響[9]。③制定血樣收驗(yàn)制度，嚴(yán)格審查血樣標(biāo)本的質(zhì)量，對于質(zhì)量較差的血樣特別是溶血血樣應(yīng)及時發(fā)現(xiàn)，并及時重新采集樣本，提升檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。對于檢測結(jié)果異常的數(shù)據(jù)，及時對該樣本進(jìn)行重新檢測，并反復(fù)比對，及時校對由于個人操作失誤導(dǎo)致的檢測結(jié)果誤差。

2.3血樣檢測過程中的注意事項①檢驗(yàn)室的環(huán)境條件因素可直接或間接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，環(huán)境條件要符合標(biāo)準(zhǔn)，濕度、溫度等應(yīng)控制在規(guī)定范圍內(nèi)，并注意定期消毒。②嚴(yán)格按照操作說明使用儀器，每次檢測前對儀器進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定，并做好儀器的日常維護(hù)保養(yǎng)，加樣時注意血清中是否有蛋白凝集物形成，避免堵塞儀器。每次檢測后要及時清洗，避免因儀器污染或運(yùn)轉(zhuǎn)不正常造成結(jié)果上的誤差[10]。③校準(zhǔn)檢驗(yàn)所需的臨界值及背景參考值等，要求工作人員能夠?qū)Ω鞣N標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行核對，以便于更加準(zhǔn)確地評估檢測結(jié)果。

3小結(jié)

影響實(shí)驗(yàn)動物血液生化檢驗(yàn)的因素很多，為進(jìn)一步提高新藥長期毒性試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動物血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，對可能影響血生化檢查結(jié)果的常見因素進(jìn)行了分析，并制定了可靠的方案，有效防止了影響血清生化指標(biāo)的大部分因素的干擾，減少了檢測誤差，提高了臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為評估新藥的安全性提供了可靠依據(jù)。

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