大連櫻桃根際寄生線蟲種類的調(diào)查與鑒定

江曉帆　董春華　馬駿　邱馳　李鑫

摘要[目的] 對(duì)大連櫻桃土壤根際線蟲的種類進(jìn)行調(diào)查與鑒定。[方法] 在2011年6月至2013年6月，對(duì)大連市櫻桃根際土壤線蟲進(jìn)行了廣泛的調(diào)查和采樣。[結(jié)果] 從所采集的80份櫻桃根際土壤樣品中根據(jù)測(cè)量數(shù)據(jù)和形態(tài)特征，共分離和鑒定出植物寄生線蟲8屬8個(gè)種，分別為畸形小環(huán)線蟲（Criconemella informis）、突出針線蟲（Paratylenchus projectus）、斯氏短體線蟲（Pratylenchus scribneri）、活潑平滑墊刃線蟲 （Psilenchus hilarulu）、大盾片盾線蟲（Scutellonema megascutum）、擬盤旋屬線蟲（Pararotylenchus sp.）、燕麥真滑刃線蟲（Aphelenchus avenae）、哈克滑刃線蟲（Aphelenchoides haguei），其中畸形小環(huán)線蟲（Criconemella informis）、斯氏短體線蟲（Pratylenchus scribneri）、活潑平滑墊刃線蟲（Psilenchus hilarulu）、大盾片盾線蟲（Scutellonema megascutum）、擬盤旋屬線蟲（Pararotylenchus sp.）、哈克滑刃線蟲（Aphelenchoides haguei）為大櫻桃上的新紀(jì)錄種。[結(jié)論] 初步明確了大連地區(qū)櫻桃根際線蟲的種類。

關(guān)鍵詞櫻桃；線蟲；鑒定

中圖分類號(hào)S432.4+5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）09-02600-02

作者簡(jiǎn)介江曉帆（1981- ），男，遼寧撫順人，從事植物保護(hù)研究。

櫻桃寄生性線蟲種類較多，分布較廣，給櫻桃生產(chǎn)帶來巨大損失。大連地區(qū)臨海環(huán)山，晝夜溫差大，其地理位置和氣候條件成為我國(guó)乃至世界櫻桃最佳栽植區(qū)之一，所產(chǎn)櫻桃被消費(fèi)者譽(yù)為“天下奇果”，櫻桃品質(zhì)和口味都優(yōu)于其他地區(qū)。國(guó)內(nèi)關(guān)于櫻桃寄生性線蟲的報(bào)道較少，因此，筆者對(duì)大連櫻桃土壤根際線蟲的種類進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步研究寄生線蟲給櫻桃生產(chǎn)帶來的危害提供理論依據(jù)，也為豐富線蟲資源的進(jìn)一步研究提供部分理論數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1土壤的采集2011年6月～2013年6月，從大連市各地區(qū)櫻桃園采集根際土壤80份。先用鐵鏟除去根圍3～5 cm的表土和其他雜物，然后在土表10～60 cm處取樣300～500 g，裝入塑料袋，封好后帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2線蟲的分離與鑒定采用淘洗-過篩-重糖離心分離法：將采集到的根際土壤倒入大型容器中，加水約2 000 ml，充分?jǐn)嚢?，靜置2～3 min后，將上清液倒入4080425目的組篩中，使其依次通過40、80和425目網(wǎng)篩，再用噴頭輕淋洗組篩，40目網(wǎng)篩可以除去植物的根系組織及土壤中的雜質(zhì)，將根系等雜質(zhì)沖掉，輕沖洗80目網(wǎng)篩使線蟲充分進(jìn)入425目網(wǎng)篩中，然后小心淋洗425目網(wǎng)篩中的殘余物，使細(xì)小的土粒通過該網(wǎng)篩，425目網(wǎng)篩中收集的主要是各種線形線蟲，翻轉(zhuǎn)網(wǎng)篩，從網(wǎng)篩的背面用細(xì)水流將425目網(wǎng)篩中的殘余物洗入燒杯中，然后將燒杯中的混合物倒入離心管內(nèi)，平衡好后放入吊籃式低速離心機(jī)內(nèi)，2 000 r/min離心2～4 min后，倒掉離心管內(nèi)的上清液，線蟲存留在管底的沉淀中，再注入比重1.18的蔗糖溶液混勻后，2 000 r/min離心2～4 min，線蟲便分布于蔗糖溶液中，將含有線蟲的蔗糖懸液緩慢傾入500目網(wǎng)篩中，用細(xì)水流淋洗線蟲混合樣到200 ml燒杯內(nèi)，用20 ml水較適宜，也可轉(zhuǎn)入試管中，饑餓幾天后殺死、固定，顯微鏡下觀察與測(cè)量，確定其屬種[1-5]。

2結(jié)果與分析

在大連櫻桃根際土壤中共鑒定出植物寄生線蟲2目7科8屬8種，并對(duì)分離到的每一種線蟲進(jìn)行了詳細(xì)的測(cè)量、中文描述并列出其鑒別特征，鑒定結(jié)果分別為畸形小環(huán)線蟲（Criconemella informis）、突出針線蟲（Paratylenchus projectus）、斯氏短體線蟲（Pratylenchus scribneri）、活潑平滑墊刃線蟲 （Psilenchus hilarulu）、大盾片盾線蟲（Scutellonema megascutum）、擬盤旋屬線蟲（Pararotylenchus sp.）、燕麥真滑刃線蟲（Aphelenchus avenae）、哈克滑刃線蟲（Aphelenchoides haguei）。

2.1畸形小環(huán)線蟲（Criconemella informis （Micoletzky，1922）Luc & Raski，1981）[6]溫和熱殺死后蟲體呈臘腸形，略向腹面彎曲，頭尾兩端略尖。體長(zhǎng)為427.6～505.8 μm，體環(huán)數(shù)（R）為62～69條，體環(huán)較粗大，后翻明顯，體中部體環(huán)寬7 μm左右。頭環(huán)3條，不向后翻，唇盤小且略突出，頭部骨化明顯。口針長(zhǎng)63.3～65.1 μm，錐體長(zhǎng)47.7～52.7 μm，錐體占口針長(zhǎng)度的比例為75.4%～81.0%，口針基球錨形，寬8.5～10 μm。食道為典型的環(huán)型食道，食道前體部與中食道球合并，中食道球發(fā)達(dá)，寬為18～22 μm，瓣門明顯，長(zhǎng)10～12 μm，峽部細(xì)而短，被神經(jīng)環(huán)圍繞，食道基球梨形，寬為11～14 μm，長(zhǎng)為16～21 μm，與腸交界的賁門呈球突狀，食道基球到頭端的距離為116.1～126.8 μm，排泄孔位于食道基球后約2個(gè)體環(huán)處。腸道通常不清晰；陰門位于蟲體后部，成熟雌蟲陰門閉合，橫裂，單生殖腺前伸，卵母細(xì)胞頂部雙行排列，基部單行排列，陰門到尾端的體環(huán)數(shù)（RV）為4～5條；陰門后蟲體圓錐形漸細(xì)，尾短，肛門到尾端的體環(huán)數(shù)（Ran）為2～3條，尾末端呈裂葉狀或元寶形。

2.2突出針線蟲 （Paratylenchus projectus Jenkins，1956）[6]溫和熱殺死后蟲體前部較直，中后部向腹面彎曲呈敞開的“C”形，體長(zhǎng)308.5～316.4 μm。體環(huán)細(xì)小，側(cè)區(qū)有4條等距的側(cè)線。頭部縊縮明顯，兩側(cè)向上逐漸傾斜變窄，至頭端平截?？卺橀L(zhǎng)26.8～27.3 μm，口針基球半球形，兩側(cè)略尖。背食道腺開口到口針基球的距離（DGO）為5～8 μm。環(huán)型食道，食道前體部與中食道球合并；中食道球很發(fā)達(dá)，食道瓣門較大，位于中食道球的中央，骨化明顯；峽部細(xì)，被神經(jīng)環(huán)圍繞；后食道腺圓形，與腸平截。排泄孔位于峽部以下，后食道腺偏上的位置，半月體位于排泄孔前1～3個(gè)體環(huán)處。成熟雌蟲陰門處蟲體常膨脹，有陰門側(cè)膜，單生殖腺前伸，無后陰子宮囊，受精囊大，近圓形，卵母細(xì)胞頂部雙行排列，基部單行排列。尾部向腹面彎曲，呈圓錐形，末端鈍圓，通常尾末端背側(cè)收縮成指狀突。

2.3斯氏短體線蟲（Pratylenchus scribneri Steiner，1943）[7]溫和熱殺死后蟲體略向腹面彎曲或彎曲呈“C”型。蟲體表皮紋細(xì)。側(cè)區(qū)4條側(cè)線，側(cè)帶光滑。唇區(qū)較低，稍縊縮，唇環(huán)2條，基環(huán)高于頂環(huán)，頭架發(fā)達(dá)，深度骨化?？卺樰^強(qiáng)壯，口針基球圓形。背食道腺開口距口針基部球2.5 μm左右。中食道球卵圓形，寬7.9～10.3 μm。食道腺從腹面長(zhǎng)覆蓋腸的前端，覆蓋長(zhǎng)度為18.4～25.7 μm。排泄孔位于食道與腸連接處的前方，半月體緊挨在排泄孔的前部，占2個(gè)體環(huán)左右。前生單卵巢，卵母細(xì)胞單行排列，增殖區(qū)有時(shí)雙行排列，受精囊退化，卵圓形或近圓形，內(nèi)部常無精子。后陰子宮囊較短，無細(xì)胞分化，長(zhǎng)度短于陰門處蟲體直徑的1.5倍。尾圓錐形，尾紋18～24條，末端寬圓形，無環(huán)紋。側(cè)尾腺孔位于尾的中前部，側(cè)線不延伸到尾端。

2.4活潑平滑墊刃線蟲（Psilenchus hilarulus de Man，1921）蟲體細(xì)長(zhǎng)，溫和熱殺死后蟲體較直。蟲體長(zhǎng)853.6.1～960.3 μm，體表環(huán)紋細(xì)密。唇區(qū)較高，光滑，前端平圓，不縊縮。口針纖細(xì)，長(zhǎng)13.7～14.3 μm，錐部長(zhǎng)約為口針長(zhǎng)的1/3，無口針基部球。背食道腺開口到口針基部球的距離為6～7 μm。食道前體部長(zhǎng)筒形，中食道球卵圓形，位于食道中部稍后方，瓣門明顯。狹部細(xì)長(zhǎng)，后食道腺梨形，排泄孔位于食道腺前方，到頭端的距離為97.1～105.2 μm。陰門橫裂，略凹陷，雙卵巢對(duì)伸，卵母細(xì)胞雙行排列，受精囊長(zhǎng)橢圓形，常充滿精子。尾較長(zhǎng)，環(huán)紋清晰，長(zhǎng)133.2～144.5 μm，為肛門處蟲體直徑的9～10倍，尾末端膨大呈棍棒狀。

2.5大盾片盾線蟲（Scutellonema megascutum Peng & Siddiqi，1994）[8]蟲體較大，溫和熱殺死后呈松散的螺旋形或“C”形；側(cè)區(qū)4條側(cè)線，在蟲體前端和側(cè)尾腺口盾片處網(wǎng)格化。唇區(qū)呈半球形，稍有縊縮，有4～5條唇環(huán)，頭架高度骨化；口針發(fā)達(dá)，長(zhǎng)度為26.4～29.2 μm；口針基球圓形，高3.5 μm；背食道腺開口距口針基球的距離為6.5～6.9 μm。中食道球圓形，排泄孔位于食道—腸瓣門稍后的位置；半月體位于排泄孔前3～5個(gè)體環(huán)處，2～3個(gè)體環(huán)長(zhǎng)；食道腺從背面長(zhǎng)覆蓋腸。陰門凹陷，具有小陰門唇葉；卵母細(xì)胞單行排列，局部雙行排列。側(cè)尾腺孔盾片狀，直徑為5～6 μm，位于肛門后1～4個(gè)體環(huán)間；尾端闊圓形，長(zhǎng)12.7～20.9 μm，腹面有9～12條環(huán)紋。

2.6擬盤旋屬線蟲（Pararotylenchus sp.）蟲體較大，溫和熱殺死后蟲體呈松散的“C”字形，側(cè)區(qū)4條側(cè)線。頭部有環(huán)紋，略縊縮；口針發(fā)達(dá)，長(zhǎng)29～31 μm，口針基球圓形，前端稍平；背食道腺開口距口針基球的距離為5.5～6.0 μm。中食道球明顯，距前端91.2～99.8 μm；食道腺葉長(zhǎng)梨形，基本不覆蓋腸。雙生殖腺對(duì)伸，有小陰門蓋。側(cè)尾腺孔小，孔狀，位于肛門附近；尾略向腹面彎曲，末端較圓，尾長(zhǎng)為18～20 μm，腹面有8～9條環(huán)紋，環(huán)紋清晰，尾末端環(huán)紋寬大。

2.7燕麥真滑刃線蟲（Aphelenchus avenae Bastian，1865）[9-10]蟲體經(jīng)溫和熱殺死后較直或略向腹面彎曲。蟲體圓筒形，兩端稍變細(xì)，表皮環(huán)紋細(xì)。體中部側(cè)區(qū)具有10～12條側(cè)線。唇區(qū)較低，不縊縮，前端平圓。口針較長(zhǎng)，長(zhǎng)166～19.8 μm，口針前段稍短于后段，無口針基球。食道前體部圓筒形，中食道球較大，呈卵圓形，寬10～14.3 μm，長(zhǎng)154～20.4 μm。食道狹部短，食道腺呈長(zhǎng)葉狀，從背側(cè)覆蓋腸，覆蓋長(zhǎng)度為體寬的2～3倍。神經(jīng)環(huán)位于中食道球后約半個(gè)中食道球長(zhǎng)度處，排泄孔位于中食道球后2/3～1個(gè)中食道球長(zhǎng)度處。陰門位于蟲體后部75%～79%處，陰道壁較厚，稍向前傾斜，陰門唇常突起。前生單卵巢，卵母細(xì)胞單行排列，部分雙行排列。后陰子宮囊較長(zhǎng)，長(zhǎng)度約為陰門處蟲體直徑的2～4倍。肛門前唇突起。尾較短，呈圓筒形，末端寬圓形。

2.8哈克滑刃線蟲（Aphelenchoides haguei Maslen，1979）溫和熱殺死后蟲體略向腹面彎曲，體長(zhǎng)為663.8～722.6 μm。體表環(huán)紋細(xì)密。唇區(qū)縊縮明顯，前端平圓。口針長(zhǎng)12.4～12.9 μm，口針基部球小。食道前體部呈細(xì)長(zhǎng)的管狀；中食道球卵圓形，13.8 μm～16.3 μm×10.6 μm～12.8 μm，瓣門位于中食道球的中央；峽部較短，食道腺長(zhǎng)葉狀，覆蓋腸的背側(cè)面。排泄孔位于中食道球后一個(gè)中食道球長(zhǎng)度處，與神經(jīng)環(huán)處于同一水平上。陰門橫裂，陰門唇稍突起，陰道向前傾斜，長(zhǎng)度約占陰門處蟲體寬度的1/2，陰門位于蟲體中后部70.1%～70.8%處。單卵巢前伸，卵母細(xì)胞單行排列。后陰子宮囊較長(zhǎng)，呈囊袋狀，為陰門處蟲體直徑的2～4倍。尾長(zhǎng)圓錐形，長(zhǎng)為41.6～43.7 μm，為肛門處蟲體直徑的3.3～3.9倍。尾末端變細(xì)，近腹面或尾尖中間具一短的尾尖突。

3結(jié)論與討論