丙泊酚后處理對(duì)心肌缺血再灌注中TNF－α，IL－6的影響

張彥清，聶麗霞，周建斌，白國良，劉保江

心肌缺血－再灌注損傷（IRI）是臨床麻醉工作中一種常見的病理過程，尤其在體外循環(huán)下的心臟手術(shù)、心肌梗死患者的溶栓治療和實(shí)施非心臟手術(shù)的冠心病患者中往往更為多見。在1960年Jennings等［1］第一次提出心肌缺血－再灌注損傷的概念，其發(fā)病機(jī)制通常認(rèn)為與氧自由基、鈣超載、中性粒細(xì)胞釋放、微血管損傷和高能磷酸化合物生成障礙等有關(guān)［2，3］。心肌缺血后處理（IPO）是近年來提出的一種新的心肌保護(hù)方法，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)已證實(shí)其確有心肌保護(hù)作用，但由于IPO 要求短暫反復(fù)缺血－再灌注，存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)及醫(yī)學(xué)倫理道德的原因而限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用，因此藥物后處理將成為一種趨勢(shì)［4，5］。丙泊酚被用于臨床已有幾十年的歷史，丙泊酚具有明確的擴(kuò)冠作用，至今仍被廣泛應(yīng)用于臨床麻醉。隨著循證醫(yī)學(xué)的興起，醫(yī)療工作者們組織了大規(guī)模的臨床試驗(yàn)試圖對(duì)一些常規(guī)藥物進(jìn)行全面的評(píng)價(jià)，其中一些實(shí)驗(yàn)就是針對(duì)丙泊酚［4，5］。一些試驗(yàn)表明使用丙泊酚可能加重再灌注心肌損傷［3，4］。我們考慮除了已知的保護(hù)作用外，丙泊酚對(duì)缺血心肌可能還存在某種“潛在”的威脅，這兩種作用同時(shí)存在，在一般情況下，其保護(hù)作用強(qiáng)于損傷作用。因此，本實(shí)驗(yàn)將通過丙泊酚后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注中腫瘤細(xì)胞因子α（TNF－α）、白細(xì)胞介素6（IL－6）的含量來為臨床提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物選擇 健康成年Wistar雄性大鼠40只，清潔級(jí)，體重250g～300g，由山西醫(yī)科大學(xué)生理教研室提供。

1.2 建立大鼠在體心肌缺血再灌注模型 用烏拉坦以5mL／kg的劑量對(duì)大鼠腹腔注射，麻醉后固定，并將針形電極插入大鼠四肢皮下，進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)，并記錄正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖。將大鼠氣管切開，連接動(dòng)物呼吸機(jī)，呼吸頻率60次／分，潮氣量18ml／kg，行機(jī)械通氣。開胸：將大鼠左側(cè)胸壁第3～4肋間縱向切口，并剪開心包，暴露心臟，然后在肺動(dòng)脈圓錐和左心耳連線中點(diǎn)下方約2mm 處進(jìn)針，穿行7－0縫線，并在末端通過一塑料管，向下推動(dòng)其管身來阻斷冠脈血流，放松則造成再灌注，同時(shí)記錄并觀察Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察ST 段抬高及恢復(fù)，以及心律失常來作為判斷冠狀動(dòng)脈斷流及再灌注成功與否的指標(biāo)。

1.3 試劑 ELISA 試劑盒，Rat IL－6（北京四正柏生物科技有限公司）；ELISA 試劑盒，Rat TNF－α（北京四正柏生物科技有限公司）；HX－300動(dòng)物呼吸機(jī)（泰盟科技有限公司）；SC－04低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組（n＝10），假手術(shù)組（A 組）：只穿線不結(jié)扎，并分別于穿線之前，30 min后及2 h后取血；灌注組（B組）：穿線之前取血，結(jié)扎LAD 缺血30min后取血，再灌注2h后取血；缺血后處理組（C 組）：穿線之前取血，結(jié)扎LAD 缺血30min末行缺血30s，再灌注30s，重復(fù)3次，然后取血，再灌注2h后取血；丙泊酚后處理組（D 組）：穿線之前取血結(jié)扎LAD 缺血30min再灌注前5min靜脈滴注丙泊酚（25μmol／L）后取血，再灌注2h后取血。取血之后立即離心血清并冰凍。

1.5 標(biāo)本測(cè)定 用ELISA 法測(cè)定血清中TNF－α，IL－6的含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組間差異性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與A 組 比 較，B 組 血 清 含 量 中TNF－α，IL－6 均 升 高（P＜0.0 5），與B組比較，C組血清中TNF－α，IL－6含量均降低（P＜0.05），與C組比較，D 組血清含量中TNF－α，IL－6含量均降低（P＜0.05）。詳見表1、表2。

表1 各組大鼠血清中TNF－α含量比較

表1 各組大鼠血清中TNF－α含量比較

與A 組比較，1）P＜0.05；與B 組比較，2）P＜0.05；與C 組比較，3）P＜0.05

組別 n TNF－α（mg／mL） F 值P假手術(shù)組（A 組） 10 0.134±0.018藥后物處后理處組（理C組組（）D 組） 1100 00..119607±±00..00188032））20.873 0.000再灌注組（B組） 10 0.186±0.0131）

表2 各組大鼠血清中IL－6含量的比較

表2 各組大鼠血清中IL－6含量的比較

與A 組比較，1）P＜0.05；與B 組比較，2）P＜0.05；與C 組比較，3）P＜0.05

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3 討 論

TNF－α是一種具有多種生物活性的細(xì)胞因子，主要來源于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，T 淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大粒細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞在一定條件下也能產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)證明，TNF－α是重要的炎癥促進(jìn)因子并參與多種組織再灌注損傷。TNF－α能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表達(dá)表面黏附分子，促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集，有助于中性粒細(xì)胞釋放活性氧和蛋白水解酶等物質(zhì)，加重缺血再灌注損傷程度［6］。此外，TNF－α能刺激i－NOS合成釋放大量的NO，后者又與超氧陰離子迅速反應(yīng)進(jìn)一步產(chǎn)生氧化能力更強(qiáng)的輕自由基，可使細(xì)胞膜產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化致使組織損傷加重［7］。而臨床證實(shí)，IL－6在心肌缺血再灌注損傷引起的心功能障礙發(fā)展中起重要作用［8］。

本實(shí)驗(yàn)通過丙泊酚后處理心肌缺血再灌注中TNF－α，IL－6的含量來說明丙泊酚對(duì)心肌的一種保護(hù)作用，其結(jié)果如下：與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組中TNF－α，IL－6的含量升高，說明心肌缺血再灌注加重了心肌的損傷；與缺血再灌注組比較，心肌缺血后處理組中TNF－α，IL－6的含量降低，說明心肌缺血后處理能有效的保護(hù)心肌細(xì)胞；與心肌缺血后處理組相比，丙泊酚后處理組中TNF－α，IL－6的含量降低，說明丙泊酚后處理能對(duì)心肌起到保護(hù)作用。因此，本實(shí)驗(yàn)表明，丙泊酚后處理心肌缺血再灌注，能對(duì)心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用。

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