CNR1、GAD1和BDNF基因多態(tài)性與云南傣族男性海洛因依賴的相關(guān)性分析

楊亞鮮，陳燕祥，武健權(quán)，邢豫明，曾發(fā)明，黃友浩，程寶文

1. 昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，昆明 650500；

2. 云南省公安廳刑事科學(xué)技術(shù)研究所，公安部毒品分析及禁毒技術(shù)重點實驗室，昆明 650283；

3. 西雙版納州公安局，西雙版納 666100

CNR1、GAD1和BDNF基因多態(tài)性與云南傣族男性海洛因依賴的相關(guān)性分析

楊亞鮮1,2，陳燕祥1,2，武健權(quán)1,2，邢豫明1,2，曾發(fā)明1,2，黃友浩3，程寶文1,2

1. 昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，昆明 650500；

2. 云南省公安廳刑事科學(xué)技術(shù)研究所，公安部毒品分析及禁毒技術(shù)重點實驗室，昆明 650283；

3. 西雙版納州公安局，西雙版納 666100

為了探討大麻素受體 1基因(Cannabinoid receptor 1，CNR1)3個 SNP位點(rs6454674、rs1049353和rs806368)、谷氨酸脫羧酶 1基因(Glutamate decarboxylase 1，GAD1)3個 SNP位點(rs1978340、rs3791878和rs11542313)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)2個 SNP位點(rs6265和rs13306221)與云南傣族男性海洛因依賴的相關(guān)性，文章采用病例對照關(guān)聯(lián)分析，建立8-SNPs復(fù)合擴增體系，應(yīng)用SNaPshot方法檢測165例傣族男性海洛因依賴患者和170例健康傣族男性CNR1、GAD1和BDNF基因8個SNPs位點基因型，采用 SPSS17.0、Haploview4.2、PHASE2.1和MDR軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果顯示，rs13306221基因型頻率在海洛因依賴組和對照組中的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.025)，海洛因依賴組rs6265 A等位基因顯著高于對照組(P＜0.05)，由rs1978340-rs3791878-rs11542313構(gòu)建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C單體型及rs6265-rs13306221構(gòu)建的A-G單體型頻率在海洛因依賴組及對照組中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，海洛因依賴組T-A-C、C-C-T和A-G單體型頻率明顯高于對照組，GAD1基因rs1978340與rs3791878之間可能存在強協(xié)同的交互作用。結(jié)果表明，CNR1基因rs1049353多態(tài)性、GAD1基因rs1978340和rs11542313多態(tài)性以及BDNF基因rs6265和rs13306221多態(tài)性與云南傣族男性海洛因依賴相關(guān)聯(lián)，并且攜帶rs6265 A等位基因的個體可能更容易對海洛因產(chǎn)生依賴。

CNR1；GAD1；BDNF；海洛因依賴

毒品依賴指吸毒者對毒品易產(chǎn)生依賴行為，最主要特征是渴求用藥，具有特征性的戒斷綜合征、復(fù)發(fā)性、耐受性和敏感性。據(jù)國家禁毒委公布的《2013年中國禁毒報告》顯示：截至2012年底，全國累計登記吸毒人員209.8萬名；濫用阿片類毒品人員127.2萬名，其中海洛因吸毒人員124.5萬名，占59.3%；濫用合成毒品人員79.8萬名，其中甲基苯丙胺吸毒人員60.2萬，占28.7%；全國繳獲海洛因共7.3噸，海洛因仍為我國主要濫用毒品之一，這給社會帶來巨大的經(jīng)濟損失。海洛因依賴是一種不顧后果的強制性尋覓和使用海洛因的行為。海洛因依賴受社會環(huán)境因素及遺傳因素等影響[1,2]，家系調(diào)查結(jié)果及雙生子、寄養(yǎng)子研究也都表明遺傳因素在海洛因依賴中扮演著重要角色[3,4]。盡管其成癮機制尚不十分明確，但中腦邊緣獎賞系統(tǒng)被普遍認(rèn)為在海洛因成癮相關(guān)問題中發(fā)揮著重要的作用。包括海洛因在內(nèi)的幾乎所有的成癮物質(zhì)都對該系統(tǒng)有一定的作用[5]，或直接影響系統(tǒng)中多巴胺的功能，或通過其他神經(jīng)遞質(zhì)如 γ-氨基丁酸、5-羥色胺能或膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)起作用[6]。藥物依賴的神經(jīng)生化機制都離不開多巴胺(Dopamine, DA)等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，因而與上述遞質(zhì)系統(tǒng)有關(guān)的受體及代謝酶基因成為近年的研究熱點，也成為研究海洛因依賴易感性的重要候選基因。大麻素受體 1(Cannabinoid receptor1, CNR1)主要分布于前額葉皮質(zhì) 、杏仁核、伏隔核、紋狀體和海馬區(qū)，可以調(diào)節(jié)多種神經(jīng)遞質(zhì)(如多巴胺、γ-氨基丁酸)的釋放。谷氨酸脫羧酶(Glutamate decarboxylase, GAD)是催化谷氨酸脫羧為 γ-氨基丁酸的限速酶，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GAD1與GAD2兩個亞型。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotophic factor, BDNF)是體內(nèi)含量最多的神經(jīng)營養(yǎng)因子，對 5-羥色胺和多巴胺能神經(jīng)元的發(fā)育分化與生長再生具有維持和促進作用。國內(nèi)外學(xué)者對上述受體、酶基因進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)與海洛因等物質(zhì)依賴有關(guān)，但基因間是否存在交互作用未見報道。因此，本研究在云南傣族群體中選擇CNR1基因3個SNP位點(rs6454674、rs1049353和rs806368)、GAD1基因3個 SNP位點(rs1978340、rs3791878和 rs11542313)和BDNF基因2個SNP位點(rs6265和rs13306221)，采用病例對照研究方法對上述基因與海洛因依賴的關(guān)聯(lián)性及基因間交互作用進行了探討。

1 對象與方法

1.1 研究對象

患者組：165例海洛因依賴者均來自于云南省西雙版納州勞教所的強制戒毒人員。納入標(biāo)準(zhǔn)：傣族，男性，年齡20～50周歲，符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第 4版(DSM-Ⅳ) 阿片依賴的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以海洛因使用為主，無酒精或尼古丁等成癮物質(zhì)濫用史，排除精神疾病、遺傳性疾病，相互間無親緣關(guān)系。對照組：170例健康對照者來源于云南省DNA數(shù)據(jù)庫。納入標(biāo)準(zhǔn)：傣族，男性，年齡20～50周歲，無海洛因等非法成癮物質(zhì)使用史，無精神疾病史，相互間無親緣關(guān)系。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取及引物設(shè)計

采用 Investigator試劑盒(QIAamo公司，德國)提取全血基因組DNA。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫查詢的各位點信息，運用在線引物設(shè)計軟件Primer3.0設(shè)計引物，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。引物序列信息見表1。

1.2.2 復(fù)合擴增體系建立

采用Touchdown PCR 程序，在9700(ABI，美國)擴增儀上進行擴增。擴增體系為 20 μL，含10×FastStart Taq Buffer(MgCl2)2 μL、25 mmol/L dNTP 1.6 μL、10 μmol/L PCR引物混合液8 μL、FastStart Taq DNA 聚合酶0.4 μL、模板2 μL。PCR擴增程序：95℃預(yù)變性10 min；95℃ 30 s，63℃ 50 s(每個循環(huán)降低0.5℃)，72℃ 1 min進行15個循環(huán)；然后95℃ 30 s，55℃ 50 s，72℃ 1 min進行25個循環(huán)；最后72℃延伸7 min。PCR產(chǎn)物純化體系為6 μL，包括1 U/μL蝦堿性磷酸酶(Phosphatase alkaline shrimp，SAP，Roche)1.5 μL、10 U/μL核酸外切酶(ExonucleaseⅠ，Exo-Ⅰ，Roche)0.15 μL、PCR產(chǎn)物2 μL。37℃ 60 min，85℃ 15 min進行純化。

1.2.3 SNaPshot反應(yīng)

采用 SNaPshot Multiplex 試劑盒(ABI，美國)，反應(yīng)體系為8 μL，含Reaction Mix 0.3 μL，10 μmol/L延伸引物混合物6 μL，多重PCR純化產(chǎn)物1 μL。擴增程序：96℃預(yù)變性1 min；96℃ 10 s，50℃ 5 s，60℃ 30 s，共25個循環(huán)。結(jié)束后加入1 U/μL SAP 0.5 μL，37℃ 60 min、85℃ 15 min進行純化。

1.2.4 檢測及基因分型

以GeneScan-120Liz Size Standard(ABI)為內(nèi)標(biāo)，取1 μL產(chǎn)物與10 μL含有Liz的HiDi混合，95℃變性10 min，立即冰浴冷卻3 min，然后采用ABI 3100型自動遺傳分析儀進行電泳，應(yīng)用 Genemapper ID v3.2軟件進行數(shù)據(jù)分析和基因分型。

表1 8個SNPs位點及其引物序列

1.3 統(tǒng)計分析

應(yīng)用SPSS17.0軟件，對海洛因依賴組及對照組8個SNPs位點進行Hardy-Weinberg平衡檢驗，驗證樣本的代表性，并對單位點基因型及等位基因頻率進行非線性logistic回歸分析，P值通過Bonferroni進行校正。運用HaploView 4.2軟件對各位點間進行連鎖不平衡分析。應(yīng)用PHASE2.1軟件構(gòu)建單體型，進行單體型分析，并用SPSS17.0海洛因依賴組及對照組各單體型頻率分布進行四格表卡方檢驗。運用多因子降維(MDR)軟件對8個SNPs位點間進行交互作用分析，檢驗樣本的準(zhǔn)確度(Testing balanced accuracy, TBA)和交叉驗證一致性(Cross-validation consistency, CVC )，設(shè)符號檢驗P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因分型結(jié)果

本研究對CNR1基因3個SNPs位點(rs6454674、rs1049353和rs806368)、GAD1基因3個SNPs位點(rs1978340、rs3791878和rs1152313)和BDNF基因2個SNPs位點(rs6265和rs13306221)進行檢測，均得到良好的分型結(jié)果(圖1)。在8個SNPs位點基因型檢測中，在rs13306221位點僅檢測到2種基因型(GG和AG)，其余7個SNPs位點均檢測到3種基因型，其中rs6454674位點檢測到TT、TG和GG基因型，rs1049353和rs6265位點檢測到GG、GA和AA基因型，rs806368、rs1978340和rs11542313位點檢測到TT、TC和CC基因型，rs3791878位點檢測到CC、CA和AA基因型。

圖1 8個SNPs位點多態(tài)性圖譜圖中藍色、黑色、紅色和綠色峰分別代表G、C、T和A等位基因。

2.2 單位點分析

病例及對照組各位點基因型頻率分布符合H-W平衡。海洛因依賴組及對照組基因型及等位基因頻率分布logisic回歸分析結(jié)果見表2。經(jīng)過Bonferroni校正后，發(fā)現(xiàn)8個SNPs多態(tài)性位點中，僅rs13306221基因型頻率分布在海洛因依賴組與對照組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.025)。rs1049353、rs1978340、rs11542313、rs6265和 rs13306221等位基因頻率分布在海洛因依賴組與對照組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且經(jīng) Bonferroni校正后顯示差異顯著，海洛因依賴組rs6265多態(tài)性位點A等位基因顯著高于對照組(P＜0.025)。rs6454674、rs806368和rs3791878 3個SNPs位點基因型及等位基因頻率分布在海洛因依賴組與對照組分布無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 多位點分析

應(yīng)用 HaploView 4.2 軟件對本研究中的 SNPs位點進行連鎖不平衡分析(圖2：A，B)，結(jié)果顯示：在云南傣族男性中，海洛因依賴組與對照組各位點之間存在連鎖不平衡現(xiàn)象，連鎖程度較弱(D’＜0.8)。

應(yīng)用PHASE2.1軟件對CNR1、GAD1和BDNF基因8個SNPs位點構(gòu)建單體型，并對海洛因依賴組及對照組各單體型頻率進行四格表卡方檢驗(表 3)，頻率低于 3%的單體型不進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由rs1978340-rs3791878-rs11542313構(gòu)建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C單體型及rs6265-rs13306221構(gòu)建的A-G單體型頻率分布在海洛因依賴組及對照組中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，海洛因依賴組T-A-C、C-C-T和A-G單體型頻率明顯高于對照組。

表2 8個SNPs位點基因型及等位基因頻率分布

圖2 海洛因依賴組與對照組8個SNPs連鎖圖(D’)A：海洛因依賴組；B：對照組。

表3 CNR1、GAD1和BDNF基因單體型頻率分布及卡方檢驗分析結(jié)果

表4 MDR分析基因-基因交互作用模型

2.4 MDR分析

對CNR1、GAD1和BDNF基因8個SNPs位點進行MDR分析，結(jié)果見表4。GAD1基因rs1978340與 rs3791878多態(tài)性位點的二因子模型檢驗準(zhǔn)確度最大(TBA = 0.6551)，交叉驗證一致性(CVC)為10/10，TBA與CVC值越大說明模型越好，因此rs1978340與rs3791878二因子模型為最佳模型，且符號檢驗P = 0.0010，具有顯著性差異，提示這兩個位點的交互作用與云南傣族男性海洛因依賴可能相關(guān)聯(lián)。

圖3 最佳圖形模型該圖形模型表示經(jīng)MDR分析后，患者組和對照組分別在X6，X7(X6為rs1978340，X7為rs3791878)的各基因型組合中分布的例數(shù)(患者組例數(shù)以左側(cè)條帶表示，對照組例數(shù)以右側(cè)條帶表示)。深灰色小塊表示該基因型組合中患者組例數(shù)/對照組例數(shù)超過比值閾(比值閾=全部病例組例數(shù)/全部對照組列數(shù)) ，提示高風(fēng)險；淺灰色小塊表示該基因型組合中患者組例數(shù)/對照組例數(shù)低于比值域，提示低風(fēng)險。

圖3為rs1978340與rs3791878二因子模型最佳模型的圖形模型，從深灰色小塊中可以看出攜帶X6(rs1978340)等位基因 C 的個體或攜帶X7(rs3791878)等位基因C的個體患海洛因依賴風(fēng)險相對高，而當(dāng)個體的rs1978340基因型為純合子CC且 rs3791878基因型為雜合子 AC時，或個體的rs1978340基因型為雜合子CT且rs3791878基因型為純合子CC時，患海洛因依賴風(fēng)險相對較小。

圖 4為各多態(tài)性位點交互作用的系統(tǒng)樹，顯示GAD1基Z因rs1978340(X6)與rs3791878(X7)多態(tài)性位點之間可能存在強協(xié)同的交互作用，其他位點間協(xié)調(diào)與消減作用不明顯。

圖4 各多態(tài)性位點交互作用的系統(tǒng)樹該圖以顏色譜表示自協(xié)同至消減的交互作用，最上端表示強協(xié)同，最下端表示強消減，中間顏色分別表示不同程度的協(xié)同或消減。圖中 X4、X8、X1、X6和 X7分別代表 rs6265、rs11542313、rs6454674、rs1978340和rs3791878 SNP位點。

3 討 論

當(dāng)前，毒品泛濫問題嚴(yán)重影響社會的穩(wěn)定和進步，對社會治安、經(jīng)濟發(fā)展、疾病控制、社會保障等諸多方面都有很強的負面作用，特別是海洛因等硬性毒品仍是嚴(yán)重威脅人類健康的元兇和公敵。因此，對毒品成癮與戒斷機理的研究及治療也一直是研究者關(guān)注的熱點。

大麻素受體系統(tǒng)與藥物依賴及其他精神疾病中起重要作用[7]。Leroy等[8]對法國高加索人群研究發(fā)現(xiàn) CNR1基因與藥物依賴相關(guān)。隨后 Zhang等[9]對歐裔、非裔美國人的研究也證實 CNR1基因與阿片類、可卡因和酒精濫用存在相關(guān)性。Li等[10]研究發(fā)現(xiàn)CNR1基因(AAT)n多態(tài)性與中國漢族海洛因依賴無關(guān)聯(lián)性。最近Proudnikov等[11]通過對共計247例高加索人、161例西班牙人及 179例非裔美國人海洛因依賴情況與CNR1基因6個SNPs位點關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，僅在高加索人群中發(fā)現(xiàn)rs806379、rs1049353和rs59088366多態(tài)性位點的基因型頻率分布與海洛因依賴顯著關(guān)聯(lián)，rs1049353位點GG基因型更容易對海洛因產(chǎn)生依賴(P=0.034)。本研究對云南傣族人群與CNR1基因rs6454674、rs1049353和rs806368多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究僅發(fā)現(xiàn) rs1049353多態(tài)性位點與海洛因依賴相關(guān)聯(lián)，海洛因依賴組rs1049353 A等位基因頻率顯著低于對照組。Marcos等[12]、Clarke等[13]及 Zuo[14]等在男性酒精依賴者與美國非洲裔可卡因依賴個體中研究證實 CNR1(rs6454674、rs1049353和rs806368)基因與酒精依賴及可卡因依賴存在明顯相關(guān)性，但Clarke等[13]與Zuo等[14]的數(shù)據(jù)結(jié)合后分析，僅發(fā)現(xiàn)rs6454674位點與可卡因依賴存在關(guān)聯(lián)性，這說明種族、群體分層及樣本量差異可能導(dǎo)致研究結(jié)果不同。但這些研究都表明 CNR1基因在藥物依賴(阿片類、可卡因、酒精)中發(fā)揮一定作用。

研究證實GAD1基因多態(tài)性可能與藥物依賴相關(guān)。Kuo等[15]及 Terranova等[16]分別在愛爾蘭人群及意大利人群酒精依賴情況與GAD1基因關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，GAD1基因與酒精依賴存在相關(guān)性。Levran等[17]對202例美國海洛因依賴者130個基因的1350個突變點研究發(fā)現(xiàn)，GAD1基因rs2058725位點與海洛因依賴存在顯著關(guān)聯(lián)性。Wu等[18]對中國漢族370例海洛因依賴者和389例對照樣本GAD1基因的15個 SNPs多態(tài)性關(guān)聯(lián)性研究發(fā)現(xiàn)，啟動子區(qū)rs1978340、rs3791878 和外顯子3 rs11542313 多態(tài)性等位基因或基因型頻率與海洛因依賴有顯著性差異。而本次在云南傣族人群中研究也發(fā)現(xiàn)rs1978340與rs11542313兩個多態(tài)性位點等位基因頻率與海洛因依賴相關(guān)聯(lián)，海洛因依賴組rs1978340、rs11542313位點 T等位基因頻率顯著低于對照組(P=0.00585，P=0.0159)。通過國內(nèi)外研究推測GAD1基因可能是海洛因依賴的一個候選基因。

在對BDNF基因和藥物依賴關(guān)聯(lián)性的研究中，關(guān)于功能多態(tài)性rs6265位點的研究結(jié)果報道并不一致。Haerian[19]對BDNF基因與藥物依賴的研究進行了系統(tǒng)回顧及 Meta分析，發(fā)現(xiàn) rs6265位點是南亞人群或中國人群海洛因依賴及甲基苯丙胺依賴者的危險因素。Meng等[20]對中國漢族486例海洛因依賴者與BDNF基因3個SNPs位點的研究發(fā)現(xiàn)，rs6265位點AA基因型攜帶者首吸年齡更早。Jia等[21]研究了 487例漢族海洛因依賴者與 BDNF基因的 4個SNPs位點海洛因依賴的關(guān)聯(lián)性，發(fā)現(xiàn) rs6265與rs13306221多態(tài)性位點與海洛因依賴存在顯著的關(guān)聯(lián)情況，且海洛因依賴組G等位基因頻率明顯高于對照組(P=0.001，P=0.005)，提示 G等位基因可能會增加海洛因依賴的易感性。而本研究在云南傣族人群中卻發(fā)現(xiàn)rs6265多態(tài)性位點海洛因依賴組G等位基因頻率低于對照組(P=0.0219)，G等位基因可能是一個保護因素。此外，有研究還證實rs6265多態(tài)性位點與精神分裂癥、抑郁癥等腦病相關(guān)，在神經(jīng)元的存活、分化及突觸可塑性調(diào)節(jié)、大腦學(xué)習(xí)記憶的過程中起重要作用。

綜上所述，BDFN基因rs6265與海洛因依賴相關(guān)聯(lián)，攜帶有A等位基因的個體可能更容易對海洛因產(chǎn)生依賴。本研究與前人研究結(jié)果基本一致，但也存在不一致情況。究其原因可能是：海洛因依賴是一個生理-心理-社會及遺傳因素綜合作用所形成的慢性復(fù)雜性腦病，遺傳因素外其他因素也起一定作用；可能與種族差異、民族及地域差異、樣本量小等因素有關(guān)；單個位點、單個基因的研究可能不能得出準(zhǔn)確結(jié)論。因此，還需要進一步擴大樣本量，通過對多個種群、多個基因和多個位點的研究，以了解海洛因依賴的遺傳機制，從而對海洛因依賴做出基因診斷，為戒毒宣傳及后續(xù)的基因治療提供理論依據(jù)。

[1] Yuferov V, Levran O, Proudnikov D, Nielsen DA, Kreek MJ. Search for genetic markers and functional variants involved in the development of opiate and cocaine addiction and treatment. Ann N Y Acad Sci, 2010, 1187(1): 184-207.

[2] Li MD, Burmeister M. New insights into the genetics of addiction. Nat Rev Genet, 2009, 10(4): 225-231.

[3] Hoffer LD, Bobashev G, Morris RJ. Researching a local heroin market as a complex adaptive system. Am J Community Psychol, 2009, 44(3-4): 273-286.

[4] Baud FJ. Mechanisms of opioid-induced overdose: experimental approach to clinical concerns. Ann Pharm Fr, 2009, 67(5): 353-359.

[5] Leshner AI. Addiction is a brain disease, and it matters.Science, 1997, 278(5335): 45-47.

[6] Tomkins DM, Sellers EM. Addiction and the brain: the role of neurotransmitters in the cause and treatment of drug dependence. CMAJ, 2001, 164(6): 817-821.

[7] López-Moreno JA, Echeverry-Alzate V, Bühler KM. The genetic basis of the endocannabinoid system and drug addiction in humans. J Psychopharmacol, 2012, 26(1): 133-143.

[8] Leroy S, Griffon N, Bourdel MC, Olie JP, Poirier MF, Krebs MO. Schizophrenia and the cannabinoid receptor type 1 (CB1): association study using a single-base polymorphism in coding exon 1. Am J Med Genet, 2001, 105(8): 749-752.

[9] Zhang PW, Ishiguro H, Ohtsuki T, Hess J, Carillo F, Walther D, Onaivi ES, Arinami T, Uhl GR. Human cannabinoid receptor 1: 5' exons, candidate regulatory regions, polymorphisms, haplotypes and association with polysubstance abuse. Mol Psychiatry, 2004, 9(10): 916-931.

[10] Li T, Liu X, Zhu ZH, Zhao J, Hu X, Ball DM, Sham PC, Collier DA. No association between (AAT)n repeats in the cannabinoid receptor gene (CNR1) and heroin abuse in a Chinese population. Mol Psychiatry, 2000, 5(2): 128-130.

[11] Proudnikov D, Kroslak T, Sipe JC, Randesi M, Li D, Hamon S, Ho A, Ott J, Kreek MJ. Association of polymorphisms of the cannabinoid receptor (CNR1) and fatty acid amide hydrolase (FAAH) genes with heroin addiction: impact of long repeats of CNR1. Pharmacogenomics J, 2010, 10(3): 232-242.

[12] Marcos M, PastorI, dela Calle C, Barrio-Real L, Laso FJ, González-Sarmiento R. Cannabinoid receptor 1 gene is associated with alcohol dependence. Alcohol Clin Exp Res, 2012, 36(2): 267-271.

[13] Clarke TK, Bloch PJ, Ambrose-Lanci LM, Ferraro TN, Berrettini WH, Kampman KM, Dackis CA, Pettinati HM, O'Brien CP, Oslin DW, Lohoff FW. Further evidence for association of polymorphisms in the CNR1 gene with cocaine addiction: confirmation in an independent sample and meta-analysis. Addict Biol, 2013, 18(4): 702-708.

[14] Zuo LJ, Kranzler HR, Luo XG, Covault J, Gelernter J. CNR1 variation modulates risk for drug and alcohol dependence. Biological Psychiatry, 2007, 62(6): 616-626.

[15] Kuo PH, Kalsi G, Prescott CA, Hodgkinson CA, Goldman D, Alexander J, van den Oord EJ, Chen X, Sullivan PF, Patterson DG, Walsh D, Kendler KS, Riley BP. Associations of glutamate decarboxylase genes with initial sensitivity and age-at-onset of alcohol dependence in the Irish Affected Sib Pair Study of Alcohol Dependence. Drug Alcohol Depend, 2009, 101(1-2): 80-87.

[16] Terranova C, Tucci M, Forza G, Barzon L, Palu G, Ferrara SD. Alcohol dependence and glutamate decarboxylase gene polymorphisms in an Italian male population. Alcohol, 2010, 44(5): 407-413.

[17] Levran O, Londono D, O'Hara K, Randesi M, Rotrosen J, Casadonte P, Linzy S, Ott J, Adelson M, Kreek MJ. Heroin addiction in African Americans: a hypothesis-driven association study. Genes Brain Behav, 2009, 8(5): 531-540.

[18] Wu W, Zhu YS, Li SB. Polymorphisms in the glutamate decarboxylase 1 gene associated with heroin dependence. BiochemBiophys Res Commun, 2012, 422(1): 91-96.

[19] Haerian BS. BDNF rs6265 polymorphism and drug addiction: a systematic review and meta-analysis. Pharmacogenomics, 2013, 14(16): 2055-2065.

[20] Meng C, Lan J, Wang Y, Song M, Gao X, Ran L, Moira S, Wang W. Influence of brain-derived neurotrophic factor genetic polymorphisms on the ages of onset for heroin dependence in a Chinese population. Genet Test Mol Biomarkers, 2012, 16(9): 1044-1050.

[21] Jia W, Shi JG, Wu B, Ao L, Zhang R, Zhu YS. Polymorphisms of brain-derived neurotrophic factor associated with heroin dependence. Neurosci Lett, 2011, 495 (3): 221-224.

(責(zé)任編委: 賴江華)

Association study of CNR1, GAD1 and BDNF polymorphisms with male heroin dependence in the Dai population in Yunnan

Yaxian Yang1,2, Yanxiang Chen1,2, Jianquan Wu1,2, Yuming Xing1,2, Faming Zeng1,2, Youhao Huang3, Baowen Cheng1,2

1. Forensic Medicine Department of Forensic Science College of Kunming Medical University, Kunming 650500, China;

2. Key Laboratory of Ministry of Public Security of Drug Analysis and Drug Control Technology, Public Security Department of Yunnan Province, Kunming 650283, China;
3. Xishuangbanna Municipal Public Security Bureau, Xishuangbanna 666100, China

Abstract:In order to analyze the association of CNR1(Cannabinoid receptor 1), GAD1(Glutamate decarboxylase 1), and BDNF(Brain-derived neurotrophic factor) polymorphisms with male heroin dependence in the Dai population in Yunnan Province, an eight-SNP co-amplification protocol was established to genotype on the SNaPshot platform. A case-control study was performed with 8 SNPs from CNR1, GAD1, and BDNF genes in 165 heroin-dependent males and 170 healthy males of the Dai population. Statistical analyses were conducted with SPSS17.0, Haploview4.2, PHASE2.1, and MDR software. We found that: (1) the genotype frequency of rs13306221 was significant in the case group (P＜0.025); (2) the A allelic frequency of rs6265 was significantly higher in the case group; (3) the haplotypes of T-A-C, C-C-C, C-C-T, and T-C-C based on rs1978340-rs3791878-rs11542313 and haplotype A-G based on rs6265-rs13306221 were significant (P＜0.05); (4) the haplotype frequencies of T-A-C, C-C-T, and A-G were significantly higher in the case group. These results indicate that the linkage between rs1978340 and rs3791878 in GAD1 has a strong association with heroin dependence. Furthermore, polymorphisms in CNR1 (rs1049353), GAD1 (rs1978340 and rs11542313), and BDNF (rs6265 and rs13306221) were associated with heroin dependence in the Yunnan Dai population, and individuals with the rs6265 A allele were more likely to be heroin dependent.

CNR1; GAD1; BDNF; heroin dependence

2013-12-23;

2014-06-13

公安部科技強警基礎(chǔ)工作專項項目(編號：2013GABJC017)資助

楊亞鮮，碩士研究生，專業(yè)方向：法醫(yī)物證學(xué)。E-mail:1329113301@qq.com

程寶文，博士，主任法醫(yī)師，研究方向：法醫(yī)物證學(xué)。E-mail:ggcbw@vip.sina.com

10.3724/SP.J.1005.2014.0888

時間: 2014-7-31 9:24:06

URL: http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3724/SP.J.1005.2014.0000.html