婦炎毓膠囊的抑菌抗炎作用

王 燦 吳宿慧

（河南中醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450046）

婦炎毓膠囊的抑菌抗炎作用

王 燦 吳宿慧

（河南中醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450046）

目的研究婦炎毓膠囊（婦炎毓）的抑菌及抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響觀察婦炎毓對(duì)急性炎癥的影響；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用白色念珠菌、陰道滴蟲和大腸桿菌混合感染建立大鼠陰道炎模型，觀察婦炎毓對(duì)陰道炎的影響；體外抑菌實(shí)驗(yàn)觀察婦炎毓對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、克雷伯桿菌、甲型以及乙型鏈球菌的影響。結(jié)果婦炎毓對(duì)小鼠耳廓腫脹有顯著地抑制作用（P＜0.01）；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明婦炎毓能明顯抑制陰道炎模型大鼠陰道黏膜充血、水腫、出血和陰道分泌物的分泌，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05或，P＜0.01）。炎毓組病原體轉(zhuǎn)陰效果明顯，ED50為2.99 g/kg，95%可信區(qū)間為2.01～4.63 g/kg。婦炎毓對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、克雷伯桿菌均有抑制作用，MIC分別為3.90、15.62、3.90、7.81和125 mg/mL。結(jié)論婦炎毓能殺抑制多種陰道致病菌，并對(duì)抗多種細(xì)菌真菌混合感染造成的實(shí)驗(yàn)性陰道炎。

婦炎毓膠囊；抑菌作用；陰道炎

婦炎毓膠囊體為我院協(xié)定處方,由蛇床子、牡丹皮、黃柏、茯苓、懷牛膝、黨參、紅花、莪術(shù)組成。功能與主治:清熱解毒,益氣活血,去濕止帶。用于治療陰道炎,盆腔炎及附件炎等癥。癥見赤白帶下,量多,有異味,少腹墜痛。本實(shí)驗(yàn)對(duì)其抑菌作用和治療陰道炎作用進(jìn)行了研究討論。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑

婦炎毓膠囊（以下簡(jiǎn)稱“婦炎毓”）,批號(hào)20110509,實(shí)驗(yàn)時(shí)去除膠囊外殼,用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成4%,8%和16%三種濃度的混懸液。婦炎康復(fù)膠囊（陽性對(duì)照藥,以下簡(jiǎn)稱“婦炎康”）,吉林吉春制藥有限公司,批號(hào)090710,實(shí)驗(yàn)時(shí)去除外殼,用0.5%CMC-Na配成15%的混懸液。氨芐青霉素,160萬U/支,華北制藥股份有限公司,批號(hào)00902103。

1.1.2 菌種

金黃色葡萄球菌26003,中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供；大腸桿菌E109,中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供；甲型鏈球菌M207,鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物與免疫教研室保存；乙型鏈球菌,臨床分離株,鄭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院提供；克雷伯桿菌,臨床分離株,鄭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院提供。

1.1.3 培養(yǎng)基

M-H液體培養(yǎng)基,杭州微生物試劑廠,批號(hào)090502；M-H固體培養(yǎng)基,杭州微生物試劑廠,批號(hào)080105。使用時(shí)根據(jù)需要加入10%小牛血清和5%～10%脫纖維羊血。

1.1.4 動(dòng)物

SD大鼠、昆明種小鼠均購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證: SCXK（豫）2005-0001。

1.2 方法

1.2.1 婦炎毓對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

取20～22 g的清潔級(jí)昆明種雌性小鼠50只,隨機(jī)分為5組,分別灌胃婦炎康組（1.5 g/kg）和婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（1.30、2.16、3.61、6.03 g/kg）和同體積的生理鹽水（空白對(duì)照組）。每天灌胃1次,連續(xù)給藥3 d,于最后一次灌藥1 h后,每鼠左耳滴二甲苯0.04 mL（正反均滴）,右耳作為對(duì)照,滴加二甲苯1 h后處死動(dòng)物,取下雙耳,對(duì)齊,用0.8 cm的打孔器打下雙耳耳片。迅速在分析天平上稱重,測(cè)腫脹度及其腫脹抑制率。小鼠耳廓腫脹度以每鼠左右耳質(zhì)量之差的平均值來表示,結(jié)果見表1。腫脹抑制率=（空白組腫脹度-給藥組腫脹度）/空白組腫脹度×100%。

1.2.2 婦炎毓對(duì)大鼠陰道炎模型的影響

①含藥培養(yǎng)基的制備:將藥物分別加至M-H液體培養(yǎng)基中配制成梯度濃度的含藥培養(yǎng)基。使婦炎毓組和婦炎康組藥物終濃度依次為500、250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95和0.98 mg/mL,青霉素組藥物濃度依次為400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 U/mL。②菌液的制備:將不同凍干菌種分離活化,取單個(gè)菌落接種到1 mL液體培養(yǎng)基中（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和克雷伯桿菌37 ℃培養(yǎng)8 h,1∶1000稀釋；甲型和乙型鏈球菌37 ℃培養(yǎng)18 h,1∶100稀釋）,使各種菌液終濃度約為5.0×106CFU/mL。③最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定（試管法）:用微量移液管吸取方法“2.2”中制備的實(shí)驗(yàn)菌液各0.1 mL分別接種到方法“2.2.1”中制備的含藥培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和克雷伯桿菌37 ℃培養(yǎng)8 h；甲型和乙型鏈球菌37 ℃培養(yǎng)12 h）,并設(shè)空白對(duì)照。隨著藥物濃度的增高,培養(yǎng)物濁度漸低?？瞻讓?duì)照管中的培養(yǎng)物明顯渾濁,實(shí)驗(yàn)把肉眼觀察澄清的最小藥物濃度稱為最小抑菌濃度（MIC）,結(jié)果見表2。④造模與給藥:將大鼠雙側(cè)卵巢和子宮切除后,皮下注射雌二醇建立假動(dòng)情期。處于假動(dòng)情期的大鼠經(jīng)陰道先后注入白色念珠菌3× 108CFU/mL、陰道滴蟲2.5×107CFU/mL和大腸桿菌21×108CFU/mL,注入量為0.3 mL/100 g。動(dòng)物感染5 d后,取大鼠陰道分泌物進(jìn)行測(cè)定:確定病原體檢查為陽性,陰道黏膜發(fā)生充血、水腫或出血者為感染成功。挑選感染成功的大鼠隨機(jī)分為7組,分別設(shè)空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、婦炎康組（1.5 g/kg）（生藥濃度,下同）和婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（1.30、2.16、3.61、6.03 g/kg）（均為生藥濃度,下同）,除空白組每組10只動(dòng)物外,其余組每組20只。各用藥組動(dòng)物每天灌胃給藥一次,連續(xù)給藥7 d,空白組和模型組灌服0.5% CMC-Na（10 mL/只）。

1.2.3 婦炎毓對(duì)陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

停藥當(dāng)天各組分別取10只動(dòng)物,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉,剖取大鼠陰道,觀察陰道黏膜組織充血、水腫、出血、分泌物量及光滑度:陰道黏膜光滑,無充血、水腫、出血,分泌物正常為0級(jí)；陰道黏膜光滑,輕度充血、水腫,分泌物正常為Ⅰ級(jí)；陰道黏膜基本光滑,中度充血、水腫,點(diǎn)狀出血,分泌物增加為Ⅱ級(jí)；陰道黏膜不光滑,重度充血、水腫,出血點(diǎn)密集,分泌物明顯增加為Ⅲ級(jí)。結(jié)果采用秩和檢驗(yàn),結(jié)果見表3。

1.2.4 病原體轉(zhuǎn)陰率（%）

于停藥后第1,3,5天取各組大鼠陰道分泌物進(jìn)行病原體檢查,3次檢查均為陰性者為轉(zhuǎn)陰,計(jì)算ED50及其95%可信區(qū)間,結(jié)果見表4。

2 結(jié) 果

2.1 婦炎毓對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響,見表1。

表1 婦炎毓對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹度及腫脹抑制率的影響（s，n=10）

表1 婦炎毓對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹度及腫脹抑制率的影響（s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比，2）P＜0.05，1）P＜0.01

由表1可知:與空白對(duì)照組比較,婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組對(duì)小鼠耳廓腫脹有顯著或者明顯的抑制作用（P＜0.05,P＜0.01）,提示婦炎毓對(duì)小鼠的急性炎癥有改善作用。

2.2 最小抑菌濃度（MIC）比較

婦炎毓對(duì)多種細(xì)菌均有抑制作用,其中對(duì)金黃色葡萄球菌、克雷伯桿菌和甲型鏈球菌的抑制作用比婦炎康強(qiáng),對(duì)甲型鏈球菌的抑制效果接近青霉素（表2）。

表2 婦炎毓的最小抑菌濃度（MIC）

2.3 婦炎毓對(duì)陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

陰道炎模型大鼠陰道黏膜不光滑,可見充血、水腫,并伴有出血和分泌物（P＜0.01）,說明造模成功。婦炎康組和婦炎毓Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組均能明顯抑制陰道炎模型大鼠陰道黏膜充血、水腫、出血和陰道分泌物的分泌,與模型對(duì)照組比較,有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）（表3）。

表3 婦炎毓對(duì)陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

2.4 病原體轉(zhuǎn)陰率（%）

婦炎毓Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組病原體轉(zhuǎn)陰效果明顯,經(jīng)計(jì)算其ED50為2.99 g/kg,95%可信區(qū)間為2.01～4.63 g/kg（表4）。

表4 婦炎毓膠囊對(duì)陰道炎模型大鼠陰道病原體的影響

3 討 論

外陰及陰道炎是婦科常見病、多發(fā)病,女性各年齡段均可發(fā)病,常見的臨床癥狀為外陰瘙癢,帶下增多,色黃或黃白相兼、味臭,或質(zhì)稠厚如豆腐渣樣,外陰潮紅,可伴有口苦咽干,尿黃,舌質(zhì)紅,舌苔黃膩,脈濡數(shù),辨證屬“濕熱下注“證。中醫(yī)認(rèn)為各類陰道炎均屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)中的陰癢、帶下病范疇,其病因病機(jī)在諸多論著中均有闡述,《醫(yī)宗金鑒》認(rèn)為“婦人陰癢,多因濕熱生蟲,蟲毒作癢?！盵1]；《婦人大全良方》曰:“夫婦人陰癢者,是蟲蝕所為。三蟲在于腸胃之間,因臟虛,三蟲動(dòng)作,蝕于陰內(nèi)。其蟲作熱,微則為癢,重則乃痛也”[2]。主要病因?yàn)闈裥跋x毒,又有內(nèi)外之分；病機(jī)為肝脾腎功能失調(diào),濕邪傷及任帶二脈,濕熱下注,使任脈失固、帶脈失約；分肝經(jīng)濕熱、陰虛夾濕、濕濁蘊(yùn)結(jié)。治當(dāng)清熱化濕,殺蟲止癢立法[3]。婦炎毓膠囊方中蛇床子性溫,具有燥濕祛風(fēng),殺蟲止癢之功效,用于陰癢帶下,濕疹瘙癢；牡丹皮性微寒,有清熱涼血,活血化瘀之功效,用于溫毒發(fā)斑,吐血衄血；黃柏性寒寒,清熱燥濕,解毒,可用于帶下陰癢,熱淋澀痛,瘡瘍腫毒,濕疹濕瘡；苦參清熱燥濕,祛風(fēng)殺蟲,用于濕熱下注、帶下色黃、陰腫陰癢；茯苓性平,利水滲濕,健脾；懷牛膝性平,補(bǔ)肝腎,用于淋證；黨參性甘,平,健脾益肺。諸藥合用,具有清熱解毒、殺蟲、祛濕、止癢,并兼具補(bǔ)腎健脾之功效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用炎毓膠囊方治療陰道炎,對(duì)改善癥狀、消除炎癥有明顯的效果；其中對(duì)金黃色葡萄球菌、克雷伯桿菌和甲型鏈球菌的抑制作用優(yōu)于陽性對(duì)照組,對(duì)甲型鏈球菌的抑制效果接近青霉素,可以推廣運(yùn)用。

[1] 陳燕,王志,蘭海珍.復(fù)方黃柏苦參洗液治療陰道炎療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,19(20):2502-2503.

[2] 陳自明.婦人大全良方[M].天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,2003:195.

[3] 高月平,張瑾.自擬冰片薄荷湯治療陰道炎的臨床研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(10):1991-1992.

R711.31

B

1671-8194（2014）25-0094-02