虎耳草顆粒的質(zhì)量控制方法

鄭 巖 王紅霞 陳隨清*

（河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008）

虎耳草顆粒的質(zhì)量控制方法

鄭 巖 王紅霞 陳隨清*

（河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008）

目的建立虎耳草顆粒的質(zhì)量控制方法。方法色譜柱為hypersil ODS(250 mm×4.0 mm、5 μm)，流動相為甲醇-水（20∶80），流速為1.0 mL/min，檢測波長275 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果巖白菜素的進(jìn)樣量在0.0202～0.202 μg之間與峰面積呈良好線性關(guān)系（R2=0.9998），平均回收率為100.33%，RSD=1.92%。結(jié)論本方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于虎耳草顆粒的質(zhì)量控制。

虎耳草顆粒；HPLC；質(zhì)量控制；巖白菜素

虎耳草，為虎耳草科虎耳草屬植物虎耳草（Saxifraga stolonifera Curt.）的干燥全草，微苦、辛、寒、有小毒，能祛風(fēng)清熱，涼血解毒，用于治療風(fēng)熱咳嗽、風(fēng)疹、濕疹、急性中耳炎等[1]。收載于《貴州省中藥材、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版，是常用的民族藥[2]。為貴州省著名制劑“咳速停膠囊”、“膽炎康膠囊”和“咳平膠囊”等的主要原料藥[3]。藥理實驗表明虎耳草有抗炎、抑菌、鎮(zhèn)咳等作用[4]?；⒍葜兴瘜W(xué)成分主要有巖白菜素、槲皮素、槲皮苷、丹皮酚、沒食子酸等[5]。其中，巖白菜素具有鎮(zhèn)咳祛痰作用，臨床已應(yīng)用于治療慢性支氣管炎[6]?；⒍蓊w粒為河南中醫(yī)學(xué)院三附院自制制劑，用于治療咳嗽痰多。為保證虎耳草顆粒的質(zhì)量及療效，本文以巖白菜素含量為指標(biāo)，建立虎耳草顆粒的質(zhì)量控制方法，為虎耳草顆粒進(jìn)一步的藥理、藥代動力學(xué)及臨床療效研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 實驗儀器

高效液相色譜儀（LC-20AT，Shimadzu），紫外檢測器（SPD-20A，Shimadzu），色譜工作站（CBM-102，Shimadzu）；循環(huán)水式多用真空泵（SHZ-95B，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；分析天平（BS2242S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；十萬分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500DV，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

甲醇（為色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司，20110909）；提取用甲醇為分析純（北京化工廠，20110518）；水為娃哈哈純凈水。

1.3 對照品

巖白菜素為中國生物制品檢定所提供，批號（742-2000111），經(jīng)HPLC檢測，含量＞99%。

1.4 樣品

所用虎耳草顆粒樣品為河南中醫(yī)學(xué)院三附院自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：phenomenex hydro ODS C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）色譜柱，流動相：甲醇-水(20∶80)，流速：1.0 mL/min，檢測波長：275 nm，柱溫：30 ℃。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取巖白菜素對照品，置于容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為0.0101 mg/mL的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密量取1 g虎耳草顆粒，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，浸泡30 min，超聲提取45 min，放置至室溫，補(bǔ)足重量，搖勻，用減壓真空泵抽濾，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品，備用。

圖1 巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖

圖2 供試品溶液HPLC圖

圖3 陰性對照溶液HPLC圖

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方比例配成不含虎耳草的陰性對照樣品，按2.3項下供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液，分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各10 μL，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果表明，陰性對照溶液色譜圖中與對照品相同保留時間處無吸收峰干擾。對照品、供試品及陰性對照對照溶液色譜圖見圖1～3。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系的考察

取濃度為0.0101 mg/mL的巖白菜素對照品溶液，分別進(jìn)樣2、4、6、10、14、20 μL，按2.1項下色譜條件測定。以巖白菜素的峰面積（×10E5）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y=14.72x+0.0106，R2=0.9998，表明巖白菜素的進(jìn)樣量在0.0202～0.202 μg之間與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣測定巖白菜素峰面積，計算RSD=1.67%。結(jié)果表明，供試液在本實驗條件下48 h內(nèi)較為穩(wěn)定，試驗結(jié)果見表1。

表1 虎耳草顆粒穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.5.3 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別測定巖白菜素峰面積，計算RSD=0.68%，表明本方法精密度良好。試驗結(jié)果見表2。

表2 虎耳草顆粒精密度實驗結(jié)果

2.5.4 重現(xiàn)性試驗

按供試品溶液制備方法平行制備5份供試品溶液，分別測定巖白菜素平均峰面積，計算RSD=1.78%，表明本方法重現(xiàn)性良好。試驗結(jié)果見表3。

表3 虎耳草顆粒重現(xiàn)性實驗結(jié)果

2.5.5 加樣回收率試驗

取六份已知巖白菜素含量的虎耳草顆粒各0.5 g，精密稱定后，分別精密加入每1 mL含巖白菜素3.857 mg的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5 mL，其余按照2.3項下供試品溶液的制備方法制備，進(jìn)樣測定，計算回收率，平均回收率100.33%，RSD=1.92%，表明本方法回收率較好。結(jié)果見表4。

表4 虎耳草顆粒中巖白菜素加樣回收率實驗結(jié)果

2.6 樣品含量測定

按上述方法，制備供試品溶液，測定3批虎耳草灌注劑中巖白菜素的含量，結(jié)果見表5。

表5 虎耳草顆粒含量測定結(jié)果

3 討 論

測定結(jié)果表明，本實驗建立的HPLC法測定虎耳草顆粒中巖白菜素的含量方法，快速、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可有效控制虎耳草顆粒質(zhì)量，保證其臨床療效，并為今后虎耳草的藥理、藥代動力學(xué)及臨床療效研究提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:科學(xué)技術(shù)出版社,1997:1335.

[2] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[M].貴陽:貴州科技出版社,2003:235.

[3] 徐昌艷,張麗艷,李燕,等.黔產(chǎn)苗藥虎耳草的HPLC指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(15):73-76.

[4] 李亨東,李英倫,范巧佳,等.四川寶興虎耳草活性部位篩選[J].中草藥,2009,40(S1):187-189.

[5] 羅厚蔚,吳葆金,陳節(jié)庵,等.虎耳草有效成分的研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,1988,19(12):1-3.

[6] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].2010版.北京:中國醫(yī)藥科學(xué)出版社,2010.

A Quality Control Method for the Saxifraga Granules

ZHENG Yan, WANG Hong-xia, CHEN Sui-qing
(Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, China)

ObjectiveTo establish a quality control method of Saxifraga granules.MethodsThe analysis was performed on phenomenex hydro C18column (250 mm×4.6 mm, 4 μm), the mobile phase was MeOH-H2O (20∶80) with a flow rate at 1.0 mL/min, and detectional wavelength at 275 nm under column temperature 30 ℃.ResultsThere was a good linear relationship when the sample size of bergenin was at a range of 0.0202-0.202 μg(R2=0.9998), the recovery was 100.33%, with RSD at 1.92%.ConclusionThis method was sensitive, exact, and reproducible to be used for the quality control of the Saxifraga granules.

Saxifraga granules; HPLC; Quality control; Bergenin

R9

B

1671-8194（2014）23-0046-02

*通訊作者