701跌打鎮(zhèn)痛膏活血化瘀實(shí)驗(yàn)研究

楊 威，郭秋平，郭健敏，汪玉芳，鄧慧敏，肖百全

（1.廣州醫(yī)藥研究總院有限公司藥物非臨床評價(jià)研究中心，廣東廣州 510240；2.廣州白云山制藥股份有限公司白云山何濟(jì)公制藥廠，廣東廣州 510410）

701跌打鎮(zhèn)痛膏主要由土鱉蟲、草烏、馬錢子、大黃、水楊酸甲脂等14味藥物組成，具有活血止痛，散瘀消腫，祛風(fēng)勝濕的功效，臨床上主要應(yīng)用于急、慢性扭挫傷，慢性腰腿痛，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等病癥，是中國外用貼膏類出口第一產(chǎn)品。雖然701跌打鎮(zhèn)痛膏已經(jīng)上市銷售多年，在臨床上也取得了一定的療效，但是其活血化瘀作用目前尚未見相關(guān)實(shí)驗(yàn)報(bào)道。為進(jìn)一步明確701跌打鎮(zhèn)痛膏的活血化瘀作用，了解其作用特點(diǎn)而進(jìn)行本研究。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 701跌打鎮(zhèn)痛膏，廣州白云山制藥股份有限公司白云山何濟(jì)公制藥廠市售產(chǎn)品，批號(hào)為U1045。精制狗皮膏：天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)為AX01；酚妥拉明，廣東環(huán)球制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)100203。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠：5-6周齡，72只，♀♂各半；ICR小鼠：5～6周齡，70只，♀♂各半，大小鼠均為SPF級(jí)，均從湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購進(jìn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為HANSLKJ20121767、HNASLK20121327。

1.3 儀器設(shè)備 足容積測定儀，本室根據(jù)毛細(xì)管放大法自制；BX-40解剖顯微鏡和Image圖像分析系統(tǒng)，Olympus。

1.4 方法

1.4.1 對自體血致SD大鼠足跖血腫模型的影響［1］大鼠實(shí)驗(yàn)前按右后足容積大小隨機(jī)均衡分為空白對照組、模型對照組、精制狗皮膏組、701患處給藥組、701腹部貼敷給藥低、高劑量組。除空白組動(dòng)物外，其余動(dòng)物均無菌操作下從尾靜脈取血0.15 ml，取出的血液立刻注入采血大鼠右后足跖底部造成血腫，空白對照組注射等容積的生理鹽水。注射完畢后立即給予相應(yīng)的藥物。分別測定造模后6 h、2 d大鼠的右后足足容積。造模后d 3、d 5給藥結(jié)束后，每組分別處死4、8只大鼠，切取大鼠造模部位足跖皮膚并進(jìn)行組織學(xué)觀察。大鼠給藥量為 0.36、1.44貼／kg、0.125貼／只（患部給藥），精制狗皮膏藥大鼠給藥量為0.8貼／kg?；疾糠筚N和腹部敷貼法給藥，至少保持藥物和動(dòng)物皮膚直接接觸6 h。

1.4.2 對小鼠微循環(huán)障礙模型的影響［2］ICR小鼠按體重和性別隨機(jī)均衡分為空白對照組、模型組、狗皮膏組、酚妥拉明組、701低、中、高劑量組。分組后各組按照給藥要求進(jìn)行腹部敷貼給藥，每天1次，連續(xù)5 d。末次給藥2h后，烏拉坦（25%）溶液按7 ml·kg-1麻醉，暴露腸系膜，除空白對照組外，其余各實(shí)驗(yàn)組均滴加0.1 ml注射用鹽酸腎上腺素造成腸系膜微循環(huán)障礙模型，并在解剖顯微鏡下觀察，回盲部分別選取10～20μm之間的細(xì)動(dòng)脈和20～30μm之間的細(xì)靜脈各1支，用10×10倍鏡進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用圖像分析軟件（Image-plus 4.0）測量動(dòng)、靜脈直徑和判斷各動(dòng)物血流情況并分級(jí)。給藥方法同“1.4.1”，小鼠給藥量為0.52、1.04、2.08貼／kg，精制狗皮膏藥小鼠給藥量為 1.04貼／kg。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有計(jì)量數(shù)據(jù)均輸入SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行ONE-WAY ANOVA統(tǒng)計(jì)分析，并采用ˉx±s表示。

2 結(jié)果

2.1 對自體血致SD大鼠足跖血腫模型的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（Tab 1-3）：各實(shí)驗(yàn)組治療效果排序?yàn)?01患處給藥組＞狗皮膏藥組＞701貼敷高劑量組＞701貼敷低劑量組。

2.2 對小鼠微循環(huán)障礙模型的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（Tab 3）：701中、高劑量組微循環(huán)障礙有明顯改善，能夠使動(dòng)、靜脈直徑增寬，與模型組相比差異有顯著性，低劑量組未見明顯改善。酚妥拉明能明顯改善模型動(dòng)物的微循環(huán)障礙。精制狗皮膏改善微循環(huán)作用不明顯，能使靜脈直徑增寬，但對動(dòng)脈直徑未見明顯改善，對于血流情況亦未見明顯改善。

Tab 1 Effect of 701 on rats’paw volume（±s，n＝12）

Tab 1 Effect of 701 on rats’paw volume（±s，n＝12）

##P＜0.01 vs negative control group；**P＜0.01 vs control group

Group Dose／paste·kg-1 Volume of rats’feet／ml 0.19 Control - 1.61±0.20 1.77±0.21 1.62±0.13 Goupigaoyao 0.125paste／rat 1.62±0.18 2.04±0.24**## 1.74±0.17 Affected part administration 0.125paste／rat 1.62±0.18 1.91±0.19** 1.62±0.11 701 lose dose 0.36 1.61±0.20 1.76±0.20 1.59±0.18 701 high dose 1.44 1.60±0.19 1.70±0.25 1.55±0 Basic volume 6h after molding 2d after molding Negative control - 1.65±0.21 1.64±0.19 1.63±.20

Tab 2 Results of histological examination

Tab 3 Effect of 701 on microcirculation disturbance model（±s）

Tab 3 Effect of 701 on microcirculation disturbance model（±s）

##P＜0.01 vs negative control group；*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group

Group Diameter of the vein／mm Gradeof blood flow Negativecontrol 104.6±33.1** 52.5±17.4** 3.0±0.9 Diameter of the artery／mm**Control 61.5±21.9## 36.1±11.9## 1.2±0.6##701 lowdose 87.3±44.4 44.6±17.2 1.3±0.7 701 middle dose 94.7±32.2* 50.6±26.9* 1.4±0.8 701 high dose 101.5±23.1** 51.1±11.3* 1.9±0.7*Goupigaoyao 107.1±55.4* 44.5±26.9 1.4±0.8 Phentolamine 129.3±27.1** 58.8±14.9** 2.2±0.8*

3 討論

本研究結(jié)果表明，注射自體血6 h后，狗皮膏藥組、701患部給藥組足容積明顯增大，其它組足容積有增大的趨勢，但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該現(xiàn)象可能與自體血注射入局部組織中引起急性炎癥反應(yīng)有關(guān)，但24 h后各實(shí)驗(yàn)組足容積相近，未見明顯差別，表明急性炎癥反應(yīng)得到緩解。701患部給藥3 d、5 d后與模型組相比局部病變明顯減輕，表明701跌打鎮(zhèn)痛膏對自體血腫模型具有一定的改善作用。701跌打鎮(zhèn)痛膏腹部敷貼給藥高、低劑量組也有一定的改善作用，但均弱于患部給藥組，表明701跌打鎮(zhèn)痛膏具有活血化瘀作用，且局部給藥作用強(qiáng)于全身給藥。精制狗皮膏藥也具有一定的改善作用，但弱于701跌打鎮(zhèn)痛膏。

微循環(huán)障礙是跌打損傷局部瘀血難以快速吸收的重要原因之一，為進(jìn)一步考察701跌打鎮(zhèn)痛膏的活血化瘀作用，本研究還選用了腎上腺素誘發(fā)的小鼠微循環(huán)障礙模型進(jìn)行研究。701中劑量、高劑量能改善鹽酸腎上腺素引起的動(dòng)靜脈血管的收縮，使動(dòng)脈和靜脈管徑增寬，改善血流障礙情況，表明701跌打鎮(zhèn)痛膏具有改善微循環(huán)障礙的作用。精制狗皮膏藥也具有增加靜脈管徑的作用，但對動(dòng)脈和血流狀態(tài)未見明顯改善作用。

根據(jù)上述研究結(jié)果可判斷701跌打鎮(zhèn)痛膏具有明顯的活血化瘀作用，特別是對局部血液循環(huán)障礙和皮下?lián)p傷出血所致的瘀血應(yīng)該具有明顯改善作用，值得進(jìn)一步深入研究和推廣應(yīng)用。

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