蛹蟲草富鍺胞外多糖對大鼠長期毒性研究

王菊鳳，楊道德，李鵠鳴

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)野生動植物保護(hù)研究所，湖南長沙 410004；2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南吉首 416000）

蛹蟲草（Cordycepsmilitaris）含有蟲草多糖和蟲草素等重要的生物活性成分，具有抗真菌、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、增強免疫力等多方面的藥理作用［1-3］。有機鍺是一種生物活性很高的物質(zhì)，具有誘發(fā)自身干擾素，增加NK細(xì)胞活性，活化巨噬細(xì)胞，抗脂質(zhì)過氧化，抗腫瘤，抗病毒，降血脂，清除自由基等多重醫(yī)療保健功能；同時對骨質(zhì)疏松、高血壓、糖尿病等也有一定療效，含鍺食物和藥物被認(rèn)為是治療癌癥和艾滋病的主要藥品之一［4-8］。

藥用真菌菌絲體對鍺有較強的富集能力，可以使無機鍺轉(zhuǎn)化為有機鍺，降低或消除其對機體的毒害作用，增加有機鍺的利用率，提高鍺的生物效應(yīng)，同時增加菌絲體中有效活性成分的含量，更好地改善藥用真菌的品質(zhì)與保健功效。

本文利用蛹蟲草富鍺胞外多糖對大鼠進(jìn)行了6個月連續(xù)給藥試驗，研究蛹蟲草富鍺胞外多糖對大鼠的長期毒性作用。

1 材料

1.1 實驗藥物 蛹蟲草富鍺胞外多糖，其中多糖含量為95%，鍺含量為288×10-6。由湖南天國力生物工程有限公司提供。

1.2 實驗動物 清潔級SD大鼠160只，平均體質(zhì)量90～110 g，♀♂各半，由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院實驗動物養(yǎng)殖場提供。

1.3 飼養(yǎng)條件 每組分籠飼養(yǎng)。自由采食和飲水，室溫20～25℃，濕度60% ～70%。換氣次數(shù)12次/h，照度2 000 lux，氨氣濃度20×10-6以下，噪音50分貝以下。

1.4 儀器 F-800全血細(xì)胞分析儀，日本東亞生產(chǎn)；自動生化分析儀，ACTOANALYSER，意大利生產(chǎn)。

2 方法

2.1 動物及分組 按體重將160只大鼠均分成4組（n＝40，♀♂各半）。第1組為對照組，給予蒸餾水20 ml·kg-1；第2、3、4組為蛹蟲草富鍺胞外多糖高、中、低劑量組。劑量分別為3.0、1.5和0.75 g·kg-1。相當(dāng)于人用劑量的100、50和25倍。

2.2 藥物配制和給藥方法 取蛹蟲草富鍺胞外多糖內(nèi)容物，用蒸餾水配成0.30、0.15和0.075 g/ml的混懸液，均按大鼠體重10 m l·kg-1灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥26周，每周稱體重1次，并調(diào)整給藥量，同時計算攝食量。

2.3 實驗方法 給藥至第8周、第17周和第26周，于末次給藥后24 h，每組活殺10只動物（先禁食6 h，♀♂各半），其余動物繼續(xù)給藥。各組動物處死時，取血做血液細(xì)胞學(xué)和生化指標(biāo)檢查，系統(tǒng)解剖，肉眼觀察各臟器，并對主要臟器進(jìn)行組織病理檢查。第26周，即第3次活殺動物后，每組剩余的10只動物停止給藥，繼續(xù)觀察2周后，再同法處理。

2.4 觀察指標(biāo) 主要從外觀體征和行為活動、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、尸解及組織學(xué)檢查等幾個方面進(jìn)行觀察檢測。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗統(tǒng)計數(shù)據(jù)以ˉx±s表示，統(tǒng)計數(shù)據(jù)首先采用F檢驗，然后t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 一般觀察 實驗期間，對照組與3個給藥組大鼠行為活動正常，毛色光亮，緊貼其身，飲食、飲水、攝食量及二便均正常，眼、口及肛門等處無異常分泌物，體重正常增長，且♀♂3個給藥組分別與對照組比較，差異無顯著性（P＞0.05）。

3.2 血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo) 給藥8周、17周、26周及恢復(fù)期結(jié)束大鼠血液細(xì)胞學(xué)檢測，結(jié)果顯示，高、中、低劑量組與同期對照組比較，差異無顯著性（P＞0.05）。且各組所有指標(biāo)均在動物血象正常值范圍（Tab 1）。

3.3 血液生化學(xué)指標(biāo) 給藥8周、17周、26周及恢復(fù)期結(jié)束大鼠血液生化學(xué)檢測，結(jié)果顯示，高、中、低劑量組與同期對照組比較，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽固醇（T-CHO）、血糖（GLU）、總膽紅素（T-BIL）的差異無顯著性（P＞0.05）（數(shù)據(jù)略）。

3.4 病理解剖及組織學(xué)檢查

3.4.1 臟器系數(shù) 給藥8周、17周、26周及恢復(fù)期結(jié)束大鼠臟器系數(shù)檢測，結(jié)果顯示，高、中、低劑量組與同期對照組比較，差異無顯著性（P＞0.05）（數(shù)據(jù)略）。

3.4.2 組織學(xué)檢查 給藥期大鼠解剖時經(jīng)肉眼觀察，各臟器均未見異常或病變。3個給藥期大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胰腺、胸腺、大腦、食道、胃、小腸、膀胱、睪丸、前列腺、子宮、卵巢等組織經(jīng)病理切片檢查，結(jié)果給藥組和對照組大鼠相比較無異常或病變現(xiàn)象（數(shù)據(jù)略）。

Tab 1 Effect of germanium-enriched extracellular polysaccharide on blood cytology index of rats（±s，n＝10）

Tab 1 Effect of germanium-enriched extracellular polysaccharide on blood cytology index of rats（±s，n＝10）

Time Group RBC/×1012·L-1 HB/g·L-1 HCT/% PLT/×109·L-1 WBC/×109·L-1N/% L/% Clotting time/s Control 6.35±0.63 130.7±11.2 39.9±2.2 572.5±105.3 10.5±1.5 31.2±1.4 68.8±5.4 111.8±16.0 8 week High dose 6.44±0.54 129.1±9.4 39.9±3.8 567.7±142.0 10.7±1.7 32.0±4.2 68.0±4.2 115.5±13.6 Middle dose 6.35±0.68 131.0±10.8 40.1±3.0 546.9±106.3 10.8±1.1 30.1±4.7 69.9±4.7 119.0±10.9 Low dose 6.36±0.64 135.8±10.7 39.6±2.4 513.2±130.0 10.6±1.1 32.9±6.4 67.1±6.4 119.0±12.7 Control 6.49±0.72 128.2±10.4 38.8±2.6 540.6±100.6 10.7±1.6 31.4±5.1 68.6±5.1 112.1±14.3 17 week High dose 6.23±0.60 136.1±12.8 39.1±2.9 558.8±112.5 10.5±1.4 28.7±6.6 71.3±6.6 123.5±13.5 Middle dose 6.22±0.64 128.6±12.0 38.1±1.5 574.4±131.1 10.8±1.7 28.4±5.2 71.7±5.2 115.6±14.7 Low dose 6.41±0.73 134.4±8.8 38.6±2.8 551.0±112.4 11.0±1.7 31.1±6.9 68.9±6.9 115.2±10.4 Control 6.50±0.59 131.9±10.8 38.5±2.8 607.5±107.4 11.2±1.6 30.0±4.3 70.0±4.3 115.5±10.9 26 week High dose 6.38±0.62 136.0±10.8 39.1±3.2 566.4±110.3 10.9±1.5 28.2±4.7 71.8±4.7 119.2±12.5 Middle dose 6.44±0.64 130.1±9.7 40.1±3.7 519.9±116.2 11.1±1.8 30.8±5.5 69.2±5.5 112.7±13.5 Low dose 6.49±0.72 132.4±11.0 40.8±3.0 557.7±134.0 10.7±1.6 30.8±4.2 69.2±4.2 124.1±11.3 Control 6.51±0.66 133.4±11.3 41.7±2.6 526.7±127.8 10.8±1.3 30.4±6.1 69.6±6.1 120.7±13.4 Recovery High dose 6.69±0.75 132.5±10.4 40.5±2.4 521.6±119.7 11.1±1.6 28.4±7.3 71.6±7.3 115.1±11.4 Middle dose 6.61±0.69 132.3±10.6 41.1±2.7 562.9±130.5 10.4±1.2 33.1±4.8 66.9±4.8 117.0±14.0 Low dose 6.40±0.50 133.6±11.4 39.9±3.4 583.3±129.7 10.5±1.0 32.3±6.4 67.7±6.4 111.6±14.6

4 討論

有研究表明，有機鍺具有明顯預(yù)防血糖升高的作用，并具有抗腦細(xì)胞老化、提高智商，以及增加抗氧自由基的能力。有機鍺除了具有抗腫瘤、抗炎與免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗衰老以及鎮(zhèn)痛等作用以外，它還具有廣譜抗癌、毒性極低、無骨髓毒性等優(yōu)點，其本身無直接細(xì)胞毒性作用。

本項研究結(jié)果表明，蛹蟲草富鍺胞外多糖是一種無毒的有機鍺。大鼠灌胃給藥連續(xù)26周和恢復(fù)期，所有指標(biāo)檢查均未見異常，證實蛹蟲草富鍺胞外多糖無毒的特點。由此也證明了我們原來的推斷是正確的，即從理論上來看，蛹蟲草富鍺胞外多糖與兩個前體蛹蟲草多糖和有機鍺Ge-132相比較，蛹蟲草富鍺胞外多糖在毒副作用方面比有機鍺進(jìn)一步降低。因此，蛹蟲草富鍺胞外多糖在臨床推薦用藥劑量下使用是安全的，可以作為進(jìn)一步開發(fā)藥品和保健食品的原料。

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